Штамм бактерий bifidobacterium bifidum icis-310 - продуцент ингибитора провоспалительного цитокина inf-γ

Изобретение относится к микробиологии. Предложен штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310, который является продуцентом ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ и депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под коллекционным номером 1258. Изобретение обеспечивает получение ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 может быть использован для получения ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ.

Аналогов изобретения в патентной и научно-технической литературе не обнаружено.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в получении средства для продуцирования ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ.

Указанный технический результат достигнут получением нового штамма бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310.

Штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 выделен из испражнений пациента с эубиозом кишечника при обследовании микробиоценоза дистального отдела толстого кишечника в 2013 году в лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований ФГБУН Института клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук г. Оренбурга.

Полученный штамм Bifidobacterium bifidum ICIS-310 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры (ГКНМ) ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» и имеет регистрационный номер 1258.

Штамм Bifidobacterium bifidum ICIS-310 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Клетки представляют собой грамположительные, неподвижные палочки, длиной от 0,4 до 5,0 мкм с бифуркацией или утолщением на одном или двух концах, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений.

В анаэробных условиях на поверхности Schaedler-агара и МРС-5 (38±1°С, 48 часов) образуют круглые мелкие белые колонии.

В полужидких средах (печеночная среда Блаурокка, казеиново-дрожжевой (КД-5), гидролизатно-молочный (ГМ) при 38±1°С, 48 часов бактерии вырастают в виде рыхлой массы, оставляя прозрачной верхнюю часть среды (зона аэробиоза). Отдельные колонии бифидобактерий при росте на печеночной среде Блаурокка имеют форму мелких «гвоздей» белого цвета, образующих при встряхивании крошковатую массу.

Физиолого-биохимические признаки.

Строгий анаэроб.

Температурный диапазон роста 38±1°С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 24-48 ч. Оптимум рН 7,2-7,6.

Не ферментируют индол, мальтозу, уреазу, нитраты, N-ацетил-β-D-глюкозаминидазу, β-глюкозидазу, раффинозу и ксилозу. Ферментируют глюкозу, фруктозу, галактозу, лактозу, мелезитозу, сукрозу, салицин, трегалозу, маннотол, рамнозу, эскулин, маннозу, целлобиозуарабинозу, сорбитол.

Условия хранения лиофильно высушенной культуры: в герметичной упаковке при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 70%. При соблюдении всех норм, срок хранения 1 год.

Условия и состав сред для размножения:

- плотные среды: МРС-5, Schaedler-агар (48 часов, 38±1°С, анаэробные условия);

- полужидкие среды: печеночная среда Блаурокка, казеиново-дрожжевая (КД-5), гидролизатно-молочная (ГМ) (48 часов, 38±1°С, анаэробные условия);

- Schaedler-бульон (24-48 часов, 38±1°С, анаэробные условия).

При проведении полногеномного секвенирования, включая 16rRNA-типирование штамм Bifidobacterium bifidum ICIS-310 идентифицирован как штамм вида Bifidobacterium bifidum.

Уровень активности продуцируемого Bifidobacterium bifidum ICIS-310 ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ определяли согласно известному способу определения антицитокиновой активности микроорганизмов (Бухарин О.В. и др. Антицитокиновая активность микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2011 - №4, С. 56-61).

Уровень активности ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ, продуцируемого штаммом бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 выражают в процентах (%) инактивации цитокинов в опыте по сравнению с контролем.

Примеры осуществления изобретения.

Пример 1

Бульонную культуру Bifidobacterium bifidum ICIS-310 получают выращиванием данного штамма в пробирках в жидкой питательной среде следующего состава: гидролизат казеина - 5,67 г.; протеозопептон - 5,00 г.; папаиновый перевар соевой муки - 1,00 г.; дрожжевой экстракт - 5,00 г.; глюкоза - 5,83 г.; NaCl - 1,67 г.; калия гидрофосфат - 0,83 г.; трис - 3,00 г.; L-цистин - 0,40 г.; гемин - 0,01 г. рН = 7,6±0,2. Температура 38±1°С, время инкубации 24-48 часа в анаэробных условиях. Полученную бульонную культуру Bifidobacterium bifidum ICIS-310 центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 20 минут.

Культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток стеклянной стерильной пипеткой в отдельную емкость. Данная культуральная жидкость представляет собой неочищенный препарат ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ.

Наличие и уровень активности полученного неочищенного препарата ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ определяют следующим образом: супернатант Bifidobacterium bifidum ICIS-310 соинкубируют с раствором рекомбинантного цитокина («Sigma», INF-γ) в соотношении 1:1 (опытные пробы).

В качестве контроля используют раствор цитокинов, внесенный в Schaedler-бульон (BBL, США).

Конечная концентрация цитокинов в опытных и контрольных пробах составляла для INF-γ-20, 80, 160, 240, 320 пг/мл.

Опытные и контрольные пробы инкубируют в течение 2 часов (37°С), реакцию останавливают на холоду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин (+4°С) и отбирают супернатант.

Определение концентрации цитокинов в опытных и контрольных пробах проводят общепринятым иммуноферментным анализом с использованием реагентов «Цитокин» (СП-б, Россия).

Учет результатов проводят на фотометре Multiskan Labsystems (Финляндия) при длине волны 492 нм.

О наличии продуцируемого штаммом Bifidobacterium bifidum ICIS-310 ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ судили по способности его супернатанта снижать концентрацию рекомбинантного цитокина в опыте по сравнению с контролем.

Уровень активности продуцируемого Bifidobacterium bifidum ICIS-310 ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ определяли согласно известному способу определения антицитокиновой активности микроорганизмов (Бухарин О.В. и др. Антицитокиновая активность микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2011 - №4, С. 56-61).

Уровень активности ингибитора INF-y, продуцируемого штаммом Bifidobacterium bifidum ICIS-310 составил при концентрации цитокина в среде от 20 до 160 пг/мл - 100%, при 240 пг/мл - 80% и 320 пг/мл - 55%.

Пример 2

Аналогично примеру 1 проводили эксперименты по определению наличия и уровня активности ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ, продуцируемого штаммом Bifidobacterium bifidum ICIS-310 и клиническими изолятами Bifidobacterium spp.(В. bifidum 1-11), выделенных из кишечного биотопа.

Результаты исследований приведены в таблице.

Как видно из таблицы штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 имеет 100% уровень активности ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ при концентрации цитокина в среде от 20 до 160 пг/мл, а у клинических изолятов бифидобактерий (В. bifidum 1-11) уровень активности ингибитора цитокина INF-γ в среднем составлял при концентрации цитокина в среде 20 пг/мл - 66,8±5,6%, при 80 пг/мл - 53±5,6%, при 160 пг/мл - 29,3±5,6%. При создании концентрации цитокина в среде 240 пг/мл среди клинических изолятов бифидобактерий три штамма ингибировали 19,7±2,1% цитокина, при 320 пг/мл активность отсутствовала у всех клинических культур.

Уровень активности ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ у штамма Bifidobacterium bifidum ICIS-310 сохранялся и при более высокой концентрации цитокинов: при 240 пг/мл его активность составляла 80%, а при 320 пг/мл уровень активности был равен 55%, что свидетельствует о большей продуктивности ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ штаммом Bifidobacterium bifidum ICIS-310 по сравнению с клиническими изолятами Bifidobacterium spp.

Таким образом, заявляемый штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 может быть использован в качестве продуцента ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ.

В. bifidum 1…11 - клинические изоляты Bifidobacterium spp.,

в (№) указан лабораторный номер.

Штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 - продуцент ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под коллекционным номером 1258.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к микробиологии, а именно к новым солюбилизирующим фосфаты штаммам, а также к композиции и способам увеличения доступности фосфата для поглощения растением.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена композиция пробиотических микроорганизмов, содержащая молочно-кислые Lactobacillus casei 21, Streptococcus lactis 47, фотосинтезирующие Rhodopseudomonas palustris 108, дрожжи Saccharomyces cerevisiae 76 и сапротрофы бактерии в жидкой среде, предназначенная для утилизации осадков сточных вод.

Изобретение относится к применению экобиопрепарата «Центрум-MMS» в качестве биологического деструктора нитроцеллюлозы. Изобретение обеспечивает снижение концентрации нитроцеллюлозы промышленных отходов химических предприятий.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм бактерий Vibrio parahaemolyticus, обладающий гемолитической и цитотоксической активностями, депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора» под регистрационным номером KM 2027.

Группа изобретений относится к области промышленной биотехнологии. Предложены биопрепарат-нефтедеструктор и способ получения биопрепарата-нефтедеструктора.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для первичного посева биоматериала, выделенного из нижних дыхательных путей пациентов с муковисцидозом, при проведении микробиологического исследования.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ активации спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 перед определением количества жизнеспособных клеток.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 40%-ный спиртовой экстракт кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен модифицированный полипептид, обладающий активностью сигма-фактора А РНК-полимеразы, где по меньшей мере одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в следующих положениях полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2, заменена, и аминокислотная замена представляет собой по меньшей мере одну из следующих аминокислотных замен: 136G, 254N, 268S, 281S, 381R, 429R, 447H, 451I, 455V, 479R, 483R, 488T и 491R.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 96%-ный спиртовой экстракт кофе арабика и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения поверхностных белков грамм-отрицательных бактерий и культуры клеток растений.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен микроорганизм рода Corynebacterium, продуцирующий L-лизин, где оксалоацетат-декарбоксилаза с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1 инактивирована.

Изобретение относится к применению экобиопрепарата «Центрум-MMS» в качестве биологического деструктора нитроцеллюлозы. Изобретение обеспечивает снижение концентрации нитроцеллюлозы промышленных отходов химических предприятий.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм бактерий Vibrio parahaemolyticus, обладающий гемолитической и цитотоксической активностями, депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора» под регистрационным номером KM 2027.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для первичного посева биоматериала, выделенного из нижних дыхательных путей пациентов с муковисцидозом, при проведении микробиологического исследования.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ активации спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 перед определением количества жизнеспособных клеток.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 40%-ный спиртовой экстракт кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен модифицированный полипептид, обладающий активностью сигма-фактора А РНК-полимеразы, где по меньшей мере одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в следующих положениях полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2, заменена, и аминокислотная замена представляет собой по меньшей мере одну из следующих аминокислотных замен: 136G, 254N, 268S, 281S, 381R, 429R, 447H, 451I, 455V, 479R, 483R, 488T и 491R.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 96%-ный спиртовой экстракт кофе арабика и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выращивания факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к лечению коров, больных маститами. Препарат для лечения коров, больных маститами, включает 10% экстракт смеси прополиса и травяного сбора, в качестве экстрагента которых используется водно-пропиленгликолиевая смесь с соотношением воды и пропиленгликоля 1:1, а также следующие вещества при следующем соотношении компонентов, мас.%: арабиногалактан 20, бишофит 20, диметилсульфоксид 15.

Изобретение относится к микробиологии. Предложен штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310, который является продуцентом ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ и депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под коллекционным номером 1258. Изобретение обеспечивает получение ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ. 1 табл., 2 пр.

Наверх