Патент ссср 416969
1
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
416969
Сотоз Советских
Социал истин еских
Республик
К ПАТЕНТУ
Зависимый от патента №вЂ”
М. Кл. б 01п 31 22
С 07с 93/14
Заявлено 24.11.1971 (№ 1624536/23-4) Приоритет 06.III.1970, ¹ 2976 70, Швеция
Гасударственный камитет
Саввта й(инистрав СССР аа делам изабретений и открытий
УДК 547.625(088.8) Опубликовано 25.02.74. Бюллетень № 7
Дата опубликования описания 13.08.74
Авторы изобретения
Иностранцы
Нилс Аке Йонссон, Ференс Мерени и Ларс-Эрик Вестлунд (Швеция) Иностранная фирма
«АБ Каби» (Швеция) Заявитель
ХРОМОГЕН ДЛЯ АНАЛИЗА
Изобретение относится к методу анализа соединений, например сахаров, и может найти применение для аналитических целей.
Известен метод анализа аналогичных соединений, способных образовывать в процессе реакции с оксидазой, специфичной для исследуемого сахара, перекись водорода. Последняя используется для превращения хромогена, например О-дианизидина или О-толидина, который в восстановленной форме не способен поглощать в видимой части спектра, в окисленную форму, поглощающую видимый свет.
Под влиянием энзима пероксидазы хромоген окисляется пропорционально количеству выделившейся перекиси водорода, что влечет за собой пропорциональное изменение цвета.
Использование для этой цели О-дианизидина или О-толидина связано с некоторыми трудностями. Так для них характерна низкая растворимость, для восстановленной формы, около
100 мг/л, а для окисленной около 10 мг/л.
Вследствие этого цвет должен фиксироваться в течение короткого отрезка времени. Время, гребуемое для развития окраски в определяемой области, черезмерно длительное (50—
60 мин). Кроме того, окраска окисленного Одианизидина чувствительна к свету и быстро уменьшается вплоть до 25%, что дает неточные результаты.
Предлагаемое в качестве хромогена соединение общей формулы
5 1 11., Х вЂ” А- (г1)л 1oj„- А-х где и=0 или 1;
10. А — алкильная цепь, имеющая, по крайней мере, 3 атома углерода;
Х вЂ” сульфо- или карбоновая кислота, или его соль с кислотами или основаниями, например соответственно ди-НС1 или ди-,Na, 15 для анализа соединений, например сахаров, которые под действием специфической оксиредуктазы образуют перекись водорода, удовлетворяет повышенным требованиям современной аналитической практики.
20 В качестве вещества для сравнения в аналитических определениях применяли глюкозу вместе с ее специфической оксидазой — глюкозоксидазой, включаемой вместе со стандартными составными частями реагента в следую25 щую стандартную смесь:
Хромоген, ммоль 0,2
Пероксидаза, ед 300
Специфическая оксидаза, ед 3000
Фосфатный буфер (до рН 7), М 0,1
Дистиллированная вода, мл до 1000
416969
Время развития окраски (мин) ири температуре С
Растворимость при рН 7, мг, л
Понижение экстинкции после облучения в течение 5 мин вольфрамовой лампой (40 вт), %
Поглощение материалом труб
Длина волны, нм
Хромоген рН восстановленная (бесцветная) окисленная (о крашенная) 37
25 о-Дианизидин о-Толидии о-Толидин
Из примера 1
Из примера 2
450
110
6,5
430
60
6,5
130
630
4,5
Нестойкое
130
450
700
6,5
70000
15
450
6,5
12000 120
25 где n=0 или 1;
Изд. № 575 Тираж 651
Подписное
Заказ 1801/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Испытуемые растворы содержали глюкозу в концентрациях 25, 50, 100, 200, 300 и 400 мг на 100 мл.
После приготовления реагентов в соответстаии с изложенным проводили определения биологических, содержащих белок материалов, например крови. В этих случаях первоначально осаждали белки, наприме1р, с помощью 0,33 M буферного раствора, содержащего глицин с хлорной кислотой (рН 2,7), после чего образец разбавляли в соотношении 1: 21.
Перед окончательным определением этот уаствор разбавляли указанным раствором реагепта в соотношении 1: 11. После этого развитие окраски измеряли в диапазоне волн 450 нм.
Когда схему разбавления применяли а< испытуемым растворам, получали растворы со следующим содвржанием глюкозы 2,2; 4,2; 6,8;
13,0 и 17,3 мг/л.
Пример 1. Приготовление реагента в соответствии со стандартным составом, содержащего 0,2 ммоль у,у - (4,4 -диамино-3,3 -дифенилдиокси) димасляной кислоты-ди-НС1.
В .качестве хромогена соединение апробируют станда1ртной методикой по отношению к различным испытуемым растворам. Максимальное развитие окраски в диапазоне волн
450 нм наступает в течение 25 мин при 25 С и соответственно в течение 15 мин при 37 С.
Растворимость,в воде соли HQBoro хромогена, полученной в результате присоединения кислоты, хорошая и поэтому осаждения его не
Предмет изобретения
Применение хромогена общей формулы 1Hг х-л- (О), (())„- д-х происходит. Стойкость окраски хромогена при максимальной экстинкции позволяет вести отсчет произ вольное время (в переделах 4 час).
Этот период является наиболее продолжи ель5 ным из изученных.
В случае применения автоматических анализаторов желательно, чтобы резина или различные пластические материалы, составляющие часть трубчатой системы, не меняли бы
10 окраски при действии раствора реагента. Образцы различных труб помещают в такой раствор ца 25 час. Эти образцы,,погруженные в реагент, содержащий х ромоген, остаются бесцветными, тогда как образцы труб, помещен15 ные в раствор, содержащий О-дианизидин становятся бурыми. В некоторых случаях .происходят реакции между х1ромогеном и материалом трубы и последующие анализы дают не.правильные данные.
20 Пр имер 2. Приготовление реагента в соответст вии со стандартным составом, содержащего 0,2 ммоль у,у - (4,4 -диамино-3,3 -дифенилдиокси) дипропансульфокислоты. Полученные данные аналогичны результатам, при25 веденным в примере 1.
Испытания остальных соединений показывают, что свойствами, типичными для двух хромогенов из примеров 1 и 2, обладают также и другие х ромогены, отвечающие приведенной
30 общей формуле. Сравнение свойств обычно ч рименяющихся производных бензидина и предлагаемых хромогенов приведено в таблице.
А — алкильная цепь, имеющая, по крайней мере, 3 атома углерода;
Х вЂ” сульфо- или карбоновая кислота, или его соли с кислотами или основаниями, 40 например соответственно ди-НС1 или ди-Na, для анализа соединений, наприме1р сахаров,,которые под действием специфической оксиреду ктазы образуют перекись водорода.
