Способ получения пептидов

 

и 439967

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских-—

Социалистических

Республик (61) Зависимый от патента— (22) Заявлено 03.04.70 (21) 1421071/23-4 (51) М.Кл. С 07с 103/52 (32) Приоритет 05.04.69; (31) P 1917690.0;

24.07.69 P 1937656.8

Осударственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий (33) ФРГ

Опубликовано 15.08.74. Бюллетень ¹ 30 (53) УДК 547.964.4.07 (088.8) Дата опуб 111KOB3HIIH описания 10.09.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Вольфганг Кениг и Рольф Гайгер (ФРГ) Иностранная фирма

«Фарбверке Хехст АГ» (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ

Один из самых удобшях способов получения пептидов состоит в связывании N-ациламинокислоты или N-ацплпептпда с эфиром аминокислоты или эфиром пептида посредством дициклогексилкарбодиимида (ДСС). При связывании пептидов происходит значительная рацемнзация и образование Х-ацилмочевин, которые загрязняют продукт синтеза и сии>к а ют вы ход.

Добавки от 1,1 до 2 эквивалентов N-окспсукцинимида для синтеза пептида с дициклогексилкарбодппмпдом снижают рацемпзацию и препятствуют образовагипо N-ацилмочевпны.

Однако N-оксисукцинимид реагирует с дициклогексилкарбодиимидом и нельзя получить пространственно затрудненные сложные эфиры N-ацилпептпд-N-оксисукцинимида. Соединение пз 1 моль дициклогекснлкарбодиимида и 3 моль N-оксисукцннимида было названо позднее сложным эфиром сукцинимпдоокснкар бои ил-р-ал анинокснсукцинимпда.

Это соединение легко реагирует с аминами, давая производные мочевины Р-аланпнамидов. При реакции а-бензилового эфира ВОС-а-глутаминовой кислоты с N-оксисукдинимидом и дициклогексилкарбоднимидом и последующей добавке 2, 4, 6-триметоксибензиламина выделялся в значительном количестве сукцинимидоокспкарбонил-Р-алании-2, 4, 6-трпметоксибензиламид, 5

При использовании днциклогексилкарбодиимида (ДСС) добавка 1-окспбензтрпазолов (ОБТ) также снижает рацемизацшо и препятствует образованию N-ацилмочевнн (см. табл. 1 в примере 1, Л). Кроме того, не могут образоваться побочные продукты, возможные при добавке N-оксисукциннмнда.

1-Окспбензтрпазолы значительно превосхо)5 дят известную добавку N-окснсукцннимпда при синтезе пептида с ДСС.

Таким образом, предложен способ получения пептидов, который заключается в том, что

20 защищенную аминокислоту или защищенный пептид, у которых карбоксильная группа, которая должна вступать в реакцию, свободна, подвергают реакции с защищенным эфиром аминокислоты или эфиром пептида или

25 амидом пептида, у которых аминогруппа, которая должна вступать в реакцию, свободна, в обычном в химии пептидов растворителе в присутствии карбодиимида при добавке 1 — 2 эквивалентов 1-оксибензтриазола общей фор30 мулы I

439967

1

0li

2д

30 ая

4О,45

50 5

63 в которой . Я обозначает водород, галоген, трифторметпл-, HIJTpo-, группу амида сульфокислоты, карбоксампд-, цпано-, низшую алкил и/плп метоксп-плл этокспгруппу и ll обозпачает числа 1 — 4.

Из N-защищенных аминокислот и пептидов прп помощи 1-окспбензтрназолов и дициклогексплкарбодппмпда могут получаться актпвированные продукты, которые используются для синтеза пептидов. Прп этом образуются

«активировапные сложные эфиры», которые 13 растворе, очевидно, находятся в равновесии с

«актпвированпым ампдом». В зависимости от вещества может выделяться активпроваиньш сложный эфир плп активпрованный амид. Как правило, нет однако необходимости в выделении активированного продукта.

Этп новыс актпвпрованные соединения исключительно быстро реагируют с первичнымп и вторпч нымп аминами. Прп синтезе

Z-Phe Val-ОСНОВ пз Z-Phe-ОВТ и H-Val-OCI- HC1 прп добавке 1 эквивалента

N-этплморфолина уже через 5 .яин при 0 С образуется более 90% пептпда. Прп использовании эфира N-окспсукцпнпмпда лишь через 2 ч прп 0 С достигается 90%-ная ступень.

Другим преимуществом является то, что сложные эфиры не требуется выделять, так как 1-окспбепзтрпазол и его производные, в противоположность N-окспсукцпнимпд, не ооразуют с дпциклогексплкарбодппмидом Iloбочных продуктов. Это легко обнаруживается, например, хроматографией на бумаге.

С дициклогексплкарбодиимпдом и 1-QKcIJбензтриазолом тридекапептпд оставался без изменения через 15 ч.

При активации N-защищенных пептидов, которые не имеют в качестве аминокислоты с концевой кароокспльной группой пролина и глнцина, происходит небольшая рацемпзацпя.

Однако и эфиры N-оксисукцпнпмпда с дпцпклогексилкарбодиимидом не могут получаться полностью без рацемизации (см. табл. 2, пример 1, Б). Кроме самого 1-оксибензтрпазола могут применяться следующие производные:

6-хлор-1-оксп-5-изопропплбензч1риазол плп 5-хлор-1-оксп- 7- метил- 6- нитробензтрназол, а также упомянутые в примерах соединения.

В качестве карбодипмидов могут применяться обычные в химии пептидов соединения.

В качестве защитных групп для тех функциональных групп аминокислот и пептидов, которые должны быть защищены, используют все обычные в химии пептидов защитные группы.

Полимерные смолы, например оксиметплполпстирол, также могут применяться как защитные группы.

Для получения примененных согласно изобретению и еще не описанных в литературе замещенных в ядро 1-оксибензтриазолов соответствующие о-хлорнитробензолы нагревают известным образом в спирте с 3 эквивалентами гидразингидрата или с l эквивалентом гидразингидрата и 2 эквивалентами триэтиламина. Образующуюся соль гидразина или триэтиламина замещенного в ядро 1-окспбензтриазола растворяют в воде и подкпсляют, причем замещенные в ядро 1-оксибензтриазолы осаждаются.

Соответствующими, обычными в химии пептидов растворителями являются, например, диметилформамид, диметилацетамид, тетрагидрофуран, диоксан, пиридин, сульфоокись диметпла или хлористый метилен. Температура реакции обычно от — 20 до +40 С, преимущественно около 0 С.

Из защищенных карбоксилом трудно растворимых в воде пептидов добавленный 1-оксибензтрпазол может полностью извлекаться прп встряхивании с раствором бикарбоната натрия плп калия или содовым раствором.

Подкпсленпем этих промывных растворов бикарбоната натрия можно снова осаждать использоваш ый 1-окспбензтриазол. Это невозможно, например, при добавке N-оксисукцпнпмпда, растворяющегося также в кислотах.

Из труднорастворпмых пептидов можно посредством пзопропанола, спирта, метанола, тетрагпдрофурана плп горячей воды извлечь

1-окспбензтрпазол.

Выход во всех исследованных примерах с добавкой 1-окспбензтриазолов был выше, чем с добавкой плп без добавки N-окспсукциним пда.

Как видно пз данных табл. 1, рацемизацпя при использовании дициклогексилкарбодиимпда в тетрагпдрофуране в качестве растворителя становится ниже 1%, если добавляют

2 эквивалента 1-окспбензтриазола. Если в качестве растворителя применяют диметилформампд, то прп добавке 2 эквивалентов незамещенпого 1-окспбепзтрпазола появляется небольшая рецемизация, в то время как при добавке 1 — 1,2 эквивалентов рацемпзацпя остается ниже 1%. При добавке N-оксисукцинпмпда получается как раз наоборот. Если пептид активируется при помощи дицпклогексплкарбодпимида и l-оксибепзтрпазола, то и здесь самая мшшмальная рацемизацпя достигается с

1 эквивалентом 1-окспбензтрпазола. В тетрагпдрофураие опа даже остается ниже 1%.

Г1ри добавке М-оксисукцпнпмида и здесь получается наоборот (см. табл. 2).

Предлагаемый способ имеет большое значение для получения серинпептидов, так как применяемый в большинстве случаев метод с азидом дает меньшие выходы. Из N-карбобензоксисерпназида образуется также через изопианат в качестве побочного продукта 4-кар439967

Добавка

Количество, эквиваленты

Раствор D-Phe-L-\ а1!

11азпа н1с

РМГ

ТНГ

РМ!

DHF

DMF

РМГ

РМГ

TH!=

DMF

РМГ

РМР

ТН!

14,3

8,1

27,0

10,0

1,0

< 1,0

< 1,0

< !.0

< 1,0

< 1,0

1,7

< 1,0

0

2

1,2

2

1,2

2

Пентахлорфсиол

Х-Оксис кцинимил

>>

1-Оксибензтриазол

>>

1-0êñè-б-ннтробе11зтр.1азол

РМГ

РМГ

< 1,0

< 1,0

>>

2 5-Хлор-1-оксп-бензтрназол

1»

2 6-Хлор-1-оксибензтрпазол

РМГ

РМГ

).7

<1,0

D.ÌÃ

РМГ

1,1

< 1,0

2 . 5,6-дихлор-1-оксн-бенз триазол

2 6-Бром-1-оксибензтрпазол

1,3

< 1,0

< 1,0

< 1.0

>>

1-Окси-б-трнфторметилбензтрназол

6-0кси-б-бензтриазол. сул ьфона канд

< 1,0

< 1,0

6oI>el!3!>lie!!>Iминоксазолидинон-2. Hpll применении дициклогексилкарбодиимида образуется в качестве побочного продукта Nацилмочевина.

Если получают глутаминил- илп аспарагинилпептиды посредством дициклогексилкарбодиимпда, то в результате дегидратации группы амида кислоты образуются в значительном количестве соответствующие нитрилы. При N-апиласпарагине возможно также образован>!е имида. Так, аспарагинилпептиды могут получаться только с выходами 39 — 45о о.

При добавке 1-оксибензтриазола в случае использования дициклогексилкарбодипмида можно, однако, с хорошими выходами, быстро и в чистом виде получать глутаминил- и аспарагинилпептид.

Аргиниипептиды с протонированной гуанидогруппой также можно получать предлагаемым способом в чистой форме II с лучшим выходом. Возгяо>кно даже получение активированного сложного эфира 113 протонированного М-ациларгинина u l-оксибензтриазола, который превращается дальше без выделения.

Как структурные элементы полученных предлагаемым способом пептидов принима1отся в расчет все аминокислоты в их Z или

D-форме, которые можно встретить в существующих в природе пептидах. Возможно также применение Р-аминокислот, например Р-аланшга или других аминокислот, которые могут получаться только синтетическим или полуспнтетическпм путем, например а-метилаланина, а-метил-3,4-дпоксп-и-фенилаланпна или

Р-хлораланииа.

Продукты предлагаемого способа после отщепленпя защитных групп можно применять как терапевтические средства или использовать как промежуточные продукты для изготовления других ценных в терапии пептидов, например оксптоцпна, вазопрессина, гл1окагона, АКТГ (адрепокортикотропного гормона), секретпна, тпреокальцитонина uJIII инсулина.

В описании амlluокllñëîòû сокращаются Ilо действующик! международным правилам. Кроме того, применяются следующие сокращения;

AsN — аспарагип

Ci I N — гл ута м и н

Z — карбобензокспВОС вЂ” трет-бутилоксикарбон11л

N PS — о-нитрофенилсульфенил

OCI Iз — сложный метиловый эфир

ОВи1 — трет-бутиловый эфир

DMF — дпметплформамид

DCC — дпцпклогексилкарбодпим ид

THF — тетр агпдрофуран

ONB — n-пптробензиловый эфир

ОВТ вЂ” l-окси-1,2,3-бензтриазпловы и эфир.

Все названные ниже амп1юкпслоты применя1от в 1 -форме.

Пример l. Опыт по рацемизации с применением газовой хроматографии

Вместо 7-1 ец-Phe-OH применялся BOC-Leu-Phe-ОН, образующийся полностью защищенный пептлд ВОС-1 еu-1 DPhc-Val-OBut мог гидролизоваться без предыдущего отщепления защитной группы.

A. Испытание на рацемпзацию прп использовании дпцпклогексилкарбодиимида с различными добавками.

378,5 мг ВОС-I eu-Phe-Ol-! (1 моль) и

209,7 мг Н-VÇI-OBut.НС1 (1 ммоль) растворяют в 2 мл абсолютного 1>МР плп тетрагидрофурана. Добавля1от 0,12 мл N-этилморфолина (1 ммоль) Il охлаждают в ледяной бане.

После этого вводят добавки и в заключение охлажде1н1ный до 0 С раствор 207 .Ilг DCC (1 ммоль) в 1 мл абсолютного дпметилформамида или тетрагидрофурана. Выдерживают !

5 исходные смес:! 5 ч при 0 ll около 15 и IlpIl комнатной температуре, разбавля1от приблизительно 30 мл уксусного эфира, фильтру!от выпавший осадок, экстрагируют фпльтрат встряхиванием с насыщенным раствором би20 карбоната натрия, 2 н. лимонной кислотой, насыщенным раствором бпкарбоната иатр 1я

ll воды, сушат при помощи сульфата натрия, сгущают и производят хроматографшо остатка в уксусном эфире на 3 г основной окиси

25 алюминия (активная ступень I). Элюат (око I0 40 .11л) сгущается и 0013Tuh растворяется приблизительно в 5 мл 8 — 9 н. раствора соляной кислоты в метаноле и нагревается в тугоилавкой трубке 24 ч до 70 С. Раствор соляной

30 кислоты в метаноле сгущается и обрабатывается известным способом, В табл. 1 приведены результаты.

Taoл11ца

Исследования рацемизации при использовании

35 дициклогекснлкарбодиимида и различных добавок

РМ»

60 РМГ

РМГ

1 РМГ

РМГ

РМ 1с

439967

Добавка

Количество эквиваленты

D-Phc-L-Val

Раствор

1-! Iзваиие

2,3

2,3

1,65

4,4

Зо

9,3 (1,0

K.OêñHcÓ1cöèIIè»1IIä

>>

1-Оксибензтриазол

>>

I

1.2

1

1,2

РМГ

РМГ

РМГ

DNI=

РМГ

РМЕ

TI I I=

В. Получение ВОС-Zeu-Phe-ОН.

38 г фенплаланина растворяют в 345 смл дноксана и 115 мл 2 и. натрового щелока. До-. 35 бавляют 38 г ВОС-LeuOSu и перемешивают около 20 ч прп комнатной температуре. Осадок (избыток фепплаланпна) отсасывают и фильтр ат сгущают. Остаток распределяют между 200 мл уксусного эфира и 220 мл 2 н. 40 лимонной кислоты. Фазу уксусного эфира еще раз экстрагируют, встряхивая с 2 и. лимонной кислотой и водой, сушат сульфатом натрия и сгущают. Остаток растирают с петролейным эфиром. Выход 39,3 г, точка текучести 108 — 45

111 С, перекрпсталлизацпя пз смеси уксусного эфира и петролейного эфира; выход 33,3 г, точка текучести 112 †1 С, (а)г> — — — 8,5 (с=2, метанол).

Г. Получение Н-Val-OBut HCI.

N-Карбобензокси- 1 - валин-трет-бутпловый эфир подвергают каталнтическому гидрированию в метаноле посредством Pd-катализатора при помощи самотптратора при pll 5 (добавка 1 н. раствора НС1 в метаноле).

H-Val-OBut НСl может перекрпсталлпзовы1ваться из уксусного эф:ра. Точка текучести

148 С, (и)1>=+19,22 С (с=2, метанол).

П р» м е р 2. Синтез Z-Val-Val-ОСНз прп использовании дициклогексилкарбодпимпда с 60 разлпчньв|и добавками.

А. Одноопсрациопный метод (общая инструкция) 2,5 г Z-Ча1-ОН (10 ммоль), 1,7 г

II-Val-ONe, HCl (10 ммо.гь), 1,28 ил N-этилморфолппа (10 ммоль) н 10 — 20 ммоль замеБ. Испытание на рацемизацию при активировании пептидов дициклогексилкарбодиимпдом и l-окси-1,2,3-бензтриазолом или N-оксисукциннмидом.

378,5 мг ВОС-Leu-Phe-OH (1 ммоль) и добавку растворяют в 2 мл абсолютного DMF плп тетрагидрофурана. Охлаждают до 0, добавляют охлажденный до 0 раствор 207 мг

DCC (1 ммоль) в 1 мл абсолютного DMF или тетрагидрофурана и выдерживают 2 ч при 0 . Ið

Затем добавля!от 209,7 мг Н-Val-ОВШ.НСI (1,Il »IoJIb) II 0,12 миг этилморфолина (1 лl II0Ab) I выдерживают еще 3 ч при 0 и оставляют около 15 ч прп комнатной температуре. Затем произ водят обработку, как в примере 1, А. 15

Результаты приведены в табл. 2.

Таблица 2

Исследования рацемизации при активировании пептидов дициклогексилкарбодиимидом и 1-оксибензтриазолом или N-оксисукцинимидом

Получение Z- тга1-Val-OMe

Лобавка

Точка плавления, оС

Выход, . о

Количествоо, эквиваленты

Ри о

I е>

"я

Название! -Окси-6-бензтриазолсульфокислый диэтиламин 90,5

1-Окси-б-бонзтриазолсульфокислый метиламид 96,1

1-Окон-6-бензтриазолсульфокислый амид 90,5

1-Окси-б-трифтор метилбензтриазол 90,5

1-Окси-б-метоксибензтриазол

97 — 100

99 — 102

100 †1

94 — 97

А 2

А 2

А 2

Л 2 бо,9

Б 1» 79,0

А 2 1-OKcll-5-метоксибонзтриазол 80,0

Б 1

>> 83,5

Л 2 1-0кси-5,6-диметилбензтриазол

Б 1

>>

А 2 1-Окси-4-метилоензтри98 — 101

103 †1

107 †1

98 — 100

98 — 100

102 — 103

98,8

93,3

103 †1

102 †1

104 — 105

104 †1

93 — 95

93 — 98

97 — 100 азол 82,4

Б !» 68,6

А 2 1 Окси-5-метилбензтриазол 79,6

Б 1» 71,5

А 2 1-Окси-6-нитробензтриазол 90,6

А 2 6-Хлор-1-оксибензтриазол 96,0

А 2 5-Хлор-1-оксибеизтриазол 90,6

А 2 5,7-Дихлор-l-оксибензтриазол 93.3

А 2 б-Бром-1-оксибензтриазол 90,5

А 2 4-Хлор-1-окси-7-метил-6-нитробензтриа зол

А 6-Хлор-1-окси-5-метилбеиз93 — 97

100 †!02

96 — 99

80,0 щенного 1-окспбензтр1иазола формулы I охлаждают до 0 С в 20 мл абсолютного тетрагидрофурана при перемешиванпи. Дсгбавляют охлажденный до 0 С;раствор 2,2 г DCC в аосолютном тел!рагидрофуране и оставляют при перемеш!!1вании 1 ч п1ри 0 С и 1 ч при комнатной температуре. Осадок отсасывают, фильтрат сгущают г! остаток растворяют в этплацетате. Раствор промывают насыщенным раствором ба!карбоната натрия, 2 н. соляной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и водой, сушат сульфатом натрия„ сгущают и остаток растирают с петролейным эфиром. Результаты, полученные со сложным эфиром дипеппида при .использованп1п различных 1-оксибензтриазолон в качестве добавки, приведены в табл. 3.

Б. Предва рптельное активированпе карбоксильной компоненты (общая инструкция)

2,5 г Z-Val.OÍ (10 имоль) v 10 — 20 ммоль замещенного 1-оксибе1нзтриазола формулы I вводят в 10 м.г а1бсолютного тетрагпдрофурана и разбавляют при 0 С холодным растворов!

2,2 г DCC в абсолютном тетрагидрофуране.

Выдерживают 1 ч при 0 С и 1 ч при комнатной температуре, добавляют 1,7 г Н-Val-OMe НС1 (10 ммоль) и 1,28 м,г н-этплморфолина (10 ммоль) и оставляют при перемешиванни 1 ч !!pi!! комнатной температуре. Обработка, как в примере 2, А. Результаты, полученные со сложным эфиром днпептида прп использовании различных 1-оксцбензтрпазолов в качестве добавки, приведены в табл. 3.

Таблица 3

439967

9;> — 99

А 2

1()3 — 105

92 — 103

99 — 102

103 †1

А 1

Б !

zpII

1-Окси-6-метил-5-о»и»три ато.чкарбоиитрил 66.0

1-Оксябеиатриазол 82,4

>> 93.4

» 90,7

Пример 3. Синтез асиарягииил- и глутамииилпептидов.

Л. Z-AsN-1 erI-ОСНз.

К раствору 2,7 г Z-ЛзХ-OI! (10 л,по.гь), 1,7 г

Н-1.еи-ОСН3 НС1 (10 я,тголь) и 2,7 г 1-оксибеизтриязола в 20 лл DMF добавляют при 0

1,28 ял М-этилморфол1ша (10 11,11оль) Ir в заключение холодный раствор 2,1 г DCC в небольшом количестве ВМЕ. Перемешивают 1 ч при 0 и 1 ч ири комнатной температуре, отсасывают осадок и разбавляют фильтрат водой.

Осадок отсасывают, растирают с раствором бикарбоиатя натрия, снова отсасывают, промывают водой и сушат иа пятиокиси фосфора.

Выход 3,35 г (85 /о ), точка текучести 176, (а)r> — 26,3 (с=2, метанол).

Б. Z-GIN-Лlа-ОВut.

К раствору 2>8 г Z-ИХ-ОН (10 ллголь), 1,8 г

Н-Ala-OBut НС1 (10 ммоль) и 1,35 г 1-окси1,2,3-беизтриазола (10 ллоль) в DMF добавляют при 0 1,28 л1л N-этилморфолииа (10 .я,воль) и в заключение колодный раствор

2,1 г DCC в небольшом количестве DMF. Поступают затем, как н примере 3. А. Выход 3,0 г (73,7о/о), точка текучести 158 — 161, (u)» — 36,0 (c=2, в метаноле).

При добавке 2 эквивяле -лов l-окси-1,2,3-беизтриазола выход 2,9 г (71,2 /о), точка текучести 158 — 161 .

Пример 4. Z- >ег-GIy-ONB.

К раствору 2,4 г Z-Ser-OH (10 яь1чоль), 2,7 г

1-оксибензтриазола (20,ямоль) и 2,9 г Н-Gly-ONB HBr в 30 мл DMF добавляют при 0

1,3 мл N-этилморфолииа и в заключение холодный раствор 2,2 г DCC в DMF. Перемешивают 1 ч при 0 и 1 ч при комнатной температуре и обрабатывают, как в примере 2, А.

Выход 4,2 г (97,5о/о ), точка плавления

121 — 123, (aj» — 8,2 (с=2, ледяная уксусная кислота).

Пример 5. Кортикотропии-(1-23)-трикозапептид-амид

8,25 г ВОС-Ser-Tyr-$ег-Met-GTu (OBut) -НЬ-Phe-Arg-Tzp-GTy-0H (5,5 л>поль), изготовлепиого по Chem. Ber. 96 (1963), стр. 1080, и

12,5 г (5 мяоль) Н-1 ys (ВОС) -Pro-Val-GTy-Lys(BOC)- Lys(BOC)- Лг1» - Лго- Pro- Val-I.ys- (BOC) -Va1-Tyr-NH -тритозилата, который был получен пз изготовлеииого ио С е1п.

Ber 97 (1964), стр. 1197 ацетата смешиванием с вычислен количеством толуолсульфокислоты в воде, выпариванием растворителя в вакууме и вторичным осаждеиием остатка из смеси пиридииа и эфира, растворяют в

150 лл DMF. После добавки 2,7 г 1-окоибеизтриазола (20 .ч,поль) добавляют при комиатной температуре /а раствора 6,5 г (30 11моль) 5

40 ,45

DCC в 20 пл DMF. Через 1 и добавляют вторую треть, через 2 ч последнюю треть раствора DCC. Через 2 ч осаждают сырой продукт реакции при помощи эфира. Выход 19,9 г. 3ащитные группы отщепляют известным способом одночасовой обработкой 90о/о-ной трифторуксусной кислотой, содержащей немного тиогликолевой кислоты, сырой трикозапептид осаждают эфиром и промывают эфиром. Выход 19,1 г. Для очистки производят хроматографию известным способом на карбоксиметил целл юл озе.

Пример 6. Z-Leu-Ala-Leu-GIu (OBut)Иу-Рго-Pro-GIN-Lys (BOC) -Arg-OH.

11,5 г (18 гьяоль) Z-Leu-Ala-Leu-GIu(OBut)-OEI и 2,43 г (18 лглоль) 1-оксибеизтриазола смешивают в 80 слга DMF при — 10 при перемешиваиии с 3,7 г (18 ммоль) DCC в 25 смз

DMF. Перемешивают еще 2 ч при комнатной температуре, отфильтровывают от мочевины и добавляют раствор 13,3 г (15 тгмоль) Н-Gly-Pro- Рго- GliN- Lys- (BOC)- Arg- ОН, 1,5 г

СНаСООН, Н О и 1,92 см (15 ллго,гь) N этилморфолииа в 80 сл DMF. Перемешивают 2 ч при комнатной температуре, отгоняют растворитель в вакууме и растирают остаток с уксусиым эфиром. Выход сырого продукта 17,1 г.

Соединение трижды кипятят с уксусным эфиром, высушенное вещество трижды основательно растирают с водой. Выход 15,5 г (73,5%); загрязнения имеются лишь в ничтожиых количествах (Q)» 0= — 80,0 (c=2, в мста ноле) .

Вычислено: б1и 2; Pro 2; Gly 1; Аlа 1;

l.åè 2: I ys 1; Arg 1.

Найдено: Glu 2,05; Pro 1,84; Gly 0,98;

Лlа 1,02; 1 ец 2; Lys 1,03; Arg 0,92.

NH3. расчетное 1 эквивалент, полученное

1,09 эквивалента.

Пример 7. Получение новых замешенных в ядро l-оксибеизтриазолов, которые применяются как добавки.

Общие инструкции а) 0,1,ноль ароматического о-хлориитросоединения кипятят с флегмой в 50 лл этанола с 15 г 100о/о-ного гидразингидрата (0,3 .поль) 5 ч. Охлаждают и отсасывают осадок.

Если осадка иет, сгущается маточный раствор. Осадок или остаток растворяют в воде, ири случае извлекают эфиром и водную фазу подкисляют концентрированной соляной кислотой, а осадок OTcacrlnaroT. Результаты приведены в табл. 4.

o) 0,1 ноль ароматического î-хлорцитросоедииеиия иагрсвают в 50 .«л спирта с 15 г

100 /о-ного гидрязиигидрята (0,3 поль) 10 ч в явтоклаве ro 110 С. Обработка, как указано в иуиктс я. Результаты ириведеиы в табл. 4. с) 0,1 ноль ароматического о-хлорнитросоедиисиия кипятят с флегмой в 50 лл этанола с 27,2 я,г трпэтиламииа (0,2 поль) и 5 г

100о/о -ного гидразиигидрата (0,1 1голь) 5 ч.

Зяте I сгуигают и остаток обрабатывают, как указано в пункте а. Результаты приведены в табл. 4.

439967

Таблица 4

Новые замещенные в ядро 1-оксибензтриазолы

Мстод (выход, о ) Топка плавления, С

Соединение (растворитсль, из которого перекрнсталлизопано) 13рутзо-формула (мол. нес)

Вынпс Icil0 "",ь

11аи тсно

1-Оксп-6-трифторметилбенз- а Сз! Iз! зХзО (203,1) три азол (:вода) (90) 148 — 149 С 41,39; II 1,98; Х 20,69.

С 41,5; II 2,2; Х 21,0, Сульфокислый метиламид 1- а Сз! IgN„OgS (228,2)

-оксп-6-бензтрпазола (вода) (79) 214 C 36,85; If 3,53; Х 24,55; S 14,05.

С 36,>; Н 3,8; Х 24,8; S 13,8.

С1зН ыХзО,S (270,3)

159 †1 С 44,45; Н 5,22; Х 20,73; S 11,84.

С 44,8; Il 5,1; Х 20,8; S 11,7.

Сульфокпслый дпэтпламнд а

1- окси- 6- бензтриазола (эта- (67! цол — вода) 1-Оксн-6-бснзтриазолкарбок- а

:амид (50 / -ный спирт) (39) С71-1аМ,Оз.! НзО (196,1)

С 42,80, ll 4,11, Х 28,58.

С 428 Il 40 U 274 298

24!

1-Окси-5-мстокспбензтрпазол Ь Сз)!зХзОз (165,1) (этапол) (68) 215 С 5090 Il 427 Х 25 15

С 509; Н 42; Ni 257.

1-Оксп-6-метокспбензтриазол Ь (вода) (6) Сз1-1зХзО 5НзО (174,1)

172 — 173 С 48,30; 11 5,21; iNi э4,! 3.

С 487; II 5,1; Х 25,3.

1-Оксп-5-мстилбензтрпазол Ь С, I 17NçÎ (149,1) (вода) (77) 188 — !89 С 56,37; Il 4,73; Х 28,18.

С 56,4; II 4,7; Х 28,3.

1-Оксп-4-метплбензтриазол b СзНзХзО (149,1) (этано 1) (7!) 151,5 †1,5 С 56,37; H 4,73; N 28,!8.

С 56,4; Н 4,8; Х 28.0

1-0кси-5,6-диметилбензтриазол (этанол) b Са11зМзО (163,2) (60) )93 †1 С 58,89; Н 5,56; Х 25,75.

С 58,8; Н 5,5; N 25,4.

1-Окси-6-метил-5-бензтриазол- Ь СаНзХзО (! 74,2) карбонитрил (этанол — вода) (17) 216 — 217 С 55,17; Н 3,47; N 32,17.

С 54,4; 11 3,6; Х 32,1.

СзНаС!!х!зО (183,6)

С 4578 Н 330. Х 2289

С 45 л, I-l 3,3; N 23,0.

6-Хлор-1-окси-5-метилбензтри- с азол (этанол — вода) (37) 215

CgI IipC INTRO (211,7)

173 — 174 С 51,05; II 4,76; iU 19,87.

С 508 Н 47 Ч 202

6-Хлор-1-окси-5-изопропил бснзтриазол (этанол — вода) (25) B l м

011

Предмет изобретения

Способ получения пептидов конденсацией

N-защищенных аминокислоты или пептида со сложным эфиром или ампдом аминокислоты 50 или пептида в присутствии карбодиимида с органическими добавками с последующим выделением известными приемами свободного или частично или полностью защищенного пептида, оглачаюи(ийся тем, что, с целью снижения рацемизации, в качестве органической добавки используют 1-оксибензтрпазолы об щей формулы где R — водород, галоген, низший алкил, трпфторметпл, нптро-, циано-, метокси-, этокспгруппы, группа амида сульфокислоты или карбоксамида, п=1 — 4, в количестве! — 2 эквивалентов.

Приоритет по признакам:

05.04.69 при R — водород.

24.07.69 прп К вЂ” галоген, низший алкил„ трифторметил, нптро-, циано, метоксп-, этоксигруппы, группа амида сульфокислоты пли к арбокса мида, и = 1 — 4.