Способ получения стероидных гормонов

 

О П И С А Н И Е (492078

Союз Сооотских

",,ооиалистинеских

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 17.01.72 (21) 1740295/28-13 (51) М. Кл. С 07с 167/00 (32) Приоритет 18.01.71 (31) 19466 А/71 (33) Италия

Государственный комитат

Совета Министров СССР ло делам изобретений и от::рытнй

Опубликовано 15.11.75. Бюллетень ¹ 42 (53) УДК 615.361(088.8) Дата опубликования описания 05.07.76

{72) Авторы изобретения

Иностранцы

Джорджио Феррари, Луиджи Каноника и Бруно Даниэли (Италия) Иностранная фирма

«Даутен С. А.» (Швейцария) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ

Изобретение относится к области медицины и касается получения гормональных препаратов.

Известен способ получения стероидных веществ из листьев Podocarpus macrophyllus, согласно которому метанольный экстракт сухих листьев обрабатывают водой, удаляют осадок, экстракт обрабатывают этилацетатом, упаривают, осадок хроматографируют на активированном угле и окиси алюминия для выделения целевых продуктов.

Предложен способ получения стероидных гормонов из растения CaloIIyction Ipomaea (choisy) На111ег F. сем. CoTIvolvulaceae, заключающийся в том, что исходный материал измельчают, при необходимости обезжиривают и экстрагируют смесью хлорированного алифатического углеводорода (например, хлороформа), алифатического спирта с 1 — 4 атомами углерода (например, метанола), и органического основания (например, аммиака), экстракт концентрируют и отделяют целевой продукт, |причем экстракцию осуществляют смесью хлороформа, метанола и аммиака в соотношении 9: О, 9: 1.

Пример l. Семена «Каладана» (20 кг) измельчают на дисковой мельнице, имеющей секцию с 30 отверстиями на 1 см . Измельченное лекарственное средство обезжиривают посредством экстрагирования холодным лигроином (т. кип. в пределах 60 — 90 С). Трех последовательно проведенных экстрагирований оказывается достаточно. Каждое экстра5 гирование проводят с 35 л бензина при перемешивании в течение 5 ч. Обезжиренный материал затем экстрагируют при парсмешивании, последовательнс два раза 60 л смеси хлороформа, метанола п водного раствора

10 аммиака в объемных соотношениях 9: О, 9: О, l. Каждую ступень экстрагирования проводят в течение 12 ч при ком:.атной температуре.

После этого проводят два последовательных экстрагированпя по 3 ч каждое. прп пс15 ремешивании с 50 л хлороформ . Каждую ступень проводят при коз:натной температуре. жидкость, применяемую для экстрагирования, отделяют от лекарственного средства каждый раз фильтрованием при пои;Ix сн..ом

20 давлении. Все полученные экстракты объединяют и концентрируют при пониженном давлении и температуре, не превышшощсй 40 С, до объема 10 л. Концентрат выдерживают в холодильнике несколько дней до Тсх пор, по25 ка перестает выделяться кристаллический продукт. Отделенный материал собирают па фильтре путем тсасывапия, промывают пебольш;.и коли еством xyloú-.форма. затем петролейным эфиром II гысу ш;1вdlcT в вакуу33 ме. Дополнительное коли IecTso сырого про4920,Я

3 дукта может быть получено за счет выпаривания маточных растгоров II последующего выдер>кивания и хо:1одильнике. Получен выход 140 г.

Хро>1атографический тонкослойный (силнкагель марки «G») анализ с применением в качестве растворителя смеси хлороформа, этапола и воды (80: 19: 1) и проявителя пятен в виде реагента ванилин — серная кислота, при нагревании до 120 С в течение 10 мин показал наличие пятен.

Для указанных соединений были получены слсду1ощие значения Rf:0,22 (синее пятно);

0,20 (фиолетовое и .тно) и 0,15 (желтое пятEIO) .

Пример 2. 120 г общего кристаллизата (Т), полученного, как указано в примере 1. взмучпвают в 100 мл дистиллированной воды.

Полученную суснензию механически перемешивают 1 ч при 25 С. Затем суспензию фильтруют при отсасывании. Фильтрат не учитывают. Полученную после фильтрования плотную массу подвергают новой обработке водой прп тех жс условиях, что указаны выше. Для последовательных ооработок каждый раз применяют 1000 мл воды.

После четвертой обработки тонкослойное хроматографическое исследование, проведенное как указано выше, показало, что желтое пятно, обусловленное наличием крустекдизона в плотной массе после фильтрования (10 г) в результате промывок водой стало существенно слабее по сравнению с фиолетовым пятном, вызванном макистероном А, и синим пятном, вызванным экдизопом.

K объединенным водным фильтратам (4000 мл) добавляют метанол (1600 мл) и полученный раствор упаривают в вакууме при максимальной температуре 35 С до объема около 1100 мл. Концентрат охлаждают на ледяной бане и выделившийся кристалличеокий продукт (30 г) собирают на фильтре.

Данный продукт (В), по данны м исследования методом тонкослойной хроматографии, состоит из макистеропа А и крустекдизона.

Маточные жидкости (В) затем высушивают в вакууме при температуре, не превышающей

35 С. Полученный остаток кристаллизуют неciкения хроматографической чистоты.

Водонерастворимая часть оощего кристаллизата (А), как такового, то есть остающегоcÿ еще влажным от воды, поглощают чистым метанолом на водяной бане при 50 С. Затем массу охлаждают до комнатной температуры.

Продукт, который был отделен, собирают на фильтре (Б) . Метанольный фильтр ат, от которого продукт (Б) был отделен, показывает, по данным указанного выше хроматотрафического исследования, что он содержит крустекдизон и экдизон. Экдизон отделяют, упаривая филырат в вакууме досуха при низкой температуре (35 C). Полученный таким путем

4 остаток затем подвергают по;тОрнОй кристаллизации из дистилл Iронанной Водь1 Д III по 14 чения хроматографически чистого продукта требуется провести Ilo меньшей мерс три кристаллизации. Для 7,5 г остатка нужно брать

1500 мл воды.

Окончательная очистка продукта после высушивания его в вакууме достигается путем перекристаллизации из этилацетата. Полученный таки м ооразом экдизоп имеет т. пл. 230—

240 С. 15 г нерастворимого остатка (Б) сначала кристаллизуют нз 50 мл метанола, затем из метанола, содер>кащего 1 об. /, воды до тех iffop, пока не будет достигнута степень чистоты, приемлемая в хроматографическом отношении. Получен :,ûé при этом продукт является макистероном Л. Маточные жидкости, поступающие после всех кристаллизаций, объединяют и упаривают досуха в вакууме при температуре ниже 35" С. Полученный таким путем остаток (Г) объединяют с остатком (В) и все вместе растворя1от в метаноле.

Метанольный раствор упаривают в вакууме при низкой температуре. Г1олученный таким путем остаток (Д) затем подвергают новой операции разделения, один или вместе с новой партией общего кристаллизата (Т). 21 г остатка (Г), смешанного с 50 I силикагеля (размер частичек 0,05 — 0,2 мм) помещают в колонку, приготовленную с 600 г такого же силикагеля. Извлечение из адсорбента вымыванием осуществляют сначала смесью хлороформа с метанолом в соотношении 95: 5. Сухой остаток после этого вымывания отбрасывают. Последующие четыре фракции, полученEIbIe с применением смеси хлороформа с метанолом 90: 10, дают остаток, который по данным тонкослойной хроматографии содер>кит новое вещество, обнаруживаемое по зеленому пятну. Остаток вновь подвергают хроматографическому разделению «а новой колонке, как указано выше, до тех пор, пока не достигается требуемая степень чистоты. Вымывание осуществляют только смесью хлорофор ма с метанолом 95: 5. Новые экстракты из адсорбента упаривают,досуха. Полученный остаток после перекристаллизации из этилацетата дает продукт, имеющий т. пл. 227—

230 С (скор1".ектнрованную) — муристерон.

Данные инфракрасного исследования в бромистом калии: 3600 — 3200; 1660; 1630 см — . Данные ультрафиолетового исследования в метаноле: 236 н м. 0,994, 52,8 мл (в=9050). (а) 0 =+49,6+-1 (С=1,02 в пиридине).

Пример 3. Крустекднзон-триацетат. 0,15 г крустекдизона (экдистерона), полученного по примеру 2, растворяют в 5 мл пиридина (безводного) и обрабатывают в 2 мл уксусного ангидрида при комнатной температуре в течение 24 ",. Раствор выливают в ледяную воду и обнаруженный осадок собирают на вильтре, высушивают и повторно кристаллизуют из смеси этилацетата с н-гексаном.

492078

Формула изобретения

Составитель С. Щенева

Техред Г. Псдурушина

Pe;!актор ".-. Хори..а

;т O. Top

3 -,.аа 082t8 Иа" ¹ 2038 Тираж 529 Подписное

Ц!!ИИПИ Государственного комитета Совета Чинпсгров СССР по делам наооретений и откры-..*: .

113035, Москва, К-35, Раугпскаи a".5., д. 4 5

Типографии, н1п Сапунова. 2

Получают 0056»l твердого кристаллического вещества, имеющего т. пл. 153 — 157 С, который признан экдистерон-триаце гатом.

Найдено, о!о: С 63,64; Н 8,36.

Вычислено, о!о: С 63,46; Н 8,33. (а) о =+59+1 (С=1 в метаноле).

Литературные данные: т. пл. 198,5 — 199 С для полугидрата.

П р и мер 4. Макистерон-триацетат. 0,2 r макистерона, полученного IIO примеру 2, обрабатывают, как описано выше для крустекдизона. После кристаллизации из этилацетата с н-гексаном получают 0,15 r макистерона-триацатата, имеющего т. n;I. 237 С.

Найдено, о!о: С 65,38; Н 8,40.

С34 Н52 010.

Вычислено, о1о: С 65,80; Н 8,38. (а) 0 =+74+1 (С = 1 в метаноле) .,П р и мер 5. Экдизон-триацетат. 0,10 г экдизона, полученного по примеру 2, обрабатывают, как указано выше.

Твердый остаток подвергают хроматографированию на силикагеле. Для вымывания из адсорбента применяют смесь хлороформа с метанолом (99: 1). Отдельные фракции объединяют и кристаллизуют из гексана; получают 45 мг твердого аморфного вещества, имеющего т. пл. 85 — 95 С.

10 1. Способ получения стероидных гормонов пз растительного сырья, отличающийся т:и, 1то, с целью расширения сырьевой базы, части растения Calonyction 1рогпаеа (choisy)

Ha1lier F. сем. ConvolvIIlaceae измельчают, !

5 при необходимости обезхкирпвают и экстрагиру1от смесью хлорированного алифатического углеводорода (например, хлороформа), алифат!,еского спирта (например, метанола) и органического основания (например. аммиака), экстракт концентрируют и отделяют целевой продукт.

2. Способ по и. 1, отл пч ающи йс я тем, 1ТО экстр акп1110 Ос, lijLcT!1.1ë!oò смесь10 х !ороформа, метанола ll аммиака D соотношении

25 9: О, 9: I.