Способ получения гемпептидных фрагментов цитохрома с

 

Ь",=:.-..: вщ т е!

Союз Советских

Сощиалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22} Занвлеио26.03.75 (21) 2117176/04 с присоединением заявки И» (23) Приоритет (43) Опубликоваио15.07.76.Бюллетень №26 (45} Дата опубликовании описании,11.10„76 (51) N. й.л.»

С 076 7/02

С 07 G 7/04

С 07С103/52//

/",А 61К 37/02 (53) УДК 547.964.4. .07 (088.8) Гасударственный комитет

Совета Министров СССР ое делам наооретений н открытий (72) Авторы изобретении

Р. П. Евстигнеева, А. Ф. Миронов, Г. А. Васильева и Т. A. Сидорова

Московский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой химической технологии им. М. Б. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМПЕПТИДНЫХ ФРАГМЕНТОЭ

UHTOXPGNA. C

Йэобретение относигся к новому спосо бу получения новых гемпептидов - фрагментов природного белка иитохрома С, который играет важную роль в процессах окислительного фосфорилирования в организме н мояе г . быть использован для профилактики н лече.ния некоторых заболеваний сердечно-сосудйсс той си" темы.

Гемпептидные фрагменты цитохрома С ,могут быть получены при реакции гемина с замешенными пептидами в среде жидкого аммиака в присутствии металлического натрия.

Известный способ не позволяет получать гемпептидные комплексы с аминокислотной цепью, содержащей более десяти аминокислот, и целевые продукты с выходом более 40%(1 .

У

Предлагаемый принципиально новый метод, ;основан на удлинении амннокислотной цв ети гемпептида-фрагмента 14-18 белковой цепи ыитохрома С с С-конца, что позволяет получать новые гемпептидные комплексы с различной длиной пептидной цепи с высоким выходом (75-90%).

Способ получения гемпептидных фрагментов цитохрома С заключается в том, .что гемгексапептид, отвечающий участку

13-18 белковой цепи гемопротеида, лода верга от взаимодействию с метиловым эфиром треонина в присутствии пивалоилхлори да,с последуюшей обработкой полученного, гемпептида 13-19 гидраэингидратом и кон денсацией с соответствующими эашишенны»

10 ми пепгидамн в присутствии иода в шелочной среде в органическом растворителе, Пример 1. Метиловый эфир гемгеп тапептида, отвечаюшего.участку 13-19бел/ ковой цепи цитохрома С, 15 88,3 мг 2,4-QA (Й -О -нитрофенилсуль. фенил, М грифторацетил- Ь лиэил-в -L -циЯ, стеинил- Ь -аланил- 4-глутаминил-8 «Ь -цистеинил- Ь -гистидин) мезогематина N раство ряют в смеси 3 мл ДМФА и 0,5 мл пириднна. о

29 При -;10 С добавляют 0,008 мл триэтиламина и 0 006 мл пивалоилхлорида. Спустя .115 минут при-10 С прибавляют 10,25 MI мегилового эфира !. греонина и Змл ЛАЙФА. о

Перемешивают 1 час при -10 С и 96 ч при„

26 * 20 С. Прибавляют 00 мл воды, подкисля521280, Составитель В, Волкова

Редактор Л. ЕмельяноваТехред А. Богдан Корректор Й Мльничейко Заказ 4902/544 Тираж 575 Подписное

ЦНИИПИ Государственного. комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4l ют до рН 4,0 (с помощью 6 нНС1), экстра гируют этилацетатом, упаривают. Остаток промывают этанолом. Выход 78,8 мг (87,4%). Электронный спектр в виде гемохромогена с. пиридином, восстановитель ®

HQ. $ 0д... Амока 520, 551 нм. fd)@ +

195,7 {С 0,6, 4% NH+OH). Соотношение аминокислот в гидролиэате гемгеитапептида:

Aim l,0,% Ь 1.0, Ф1,4, G(-v.1,2, МЫ0,32 (AS 0,9 - продукт разложения l0

His в условиях кислотного гидролиза),С ф.. определен в виде Сма SO>H.

Пример 2, Гемдекапептид, соответствующий участку 13-22 белковой цепи ° цитохрома С. Ю а) 70,4 мг метилового эфира гемгептпептида, полученного по примеру 1 суспендируют в 2,5 мл ДМФА и добавляют

0,025 мл гидразингидрата. Перемешивают 48 ч при 20 С, разбавляют водой в о

10 раз, подкисляют 6н. НС1 до рн

6,0. Осадок отделяют центрифугированием, тщательно примывают этанолом. Выход

65,5 мг {93"В). Электронный спектр (в тех же условиях), А. „„.522, 551 нм. б) растворяют 50 мг гидраэида гемге птаиептида в 5 мл ДМФА с несколькими каплями 25 i ной Ю И ОН. Избыток a „ миака упарнвают, добавляют 20 мг трипе птидахлоргидрата бензилового эфира g-ваЕ

В лил- f -áåíçèë-1 -глутамил- Я -трифторао цетил-(.-низина. При 0 С добавляют 2 ми раст вора Е4ъ М в ЛМФЛ (О, 1 мл 31 и в 10 мл ДМФА) и 5 мл раствора йода в пиридине (73мг йодав . о, 10 мл пирндина). Перемешивают 1 ч при О С и ф о 3 ч при 20 С. Добавляют тиосульфат натрия, выпавший осадок отделяют центрифугированием. Промывают этанолом. Растворяют в смеси ДМФА: 25%-иая НН ОН-1: 1 и ф обрабатывают амберлитом0(Ев96 в Нформе. Растворижль отгоняют. Выход

53 мг (76,5%). Электронный спектр, A-м 215 550 нм. сС3 +107 (. 0,4, 12% NHg ОН). Соотношение аминокислот в гидролиэате гемдекапептида: 2 2,0, )Ъ2 1,4,Ям2,3,Чв10,8, 3Ltol;2,Яав 02

ASpl, 1 (продукт разложенияЖ в условиях кислотного гидролиза),Су найден в виде

С,а- So Н.

Формула изобретения,1

"1

Способ получения гемпеитидных фрагмен. . фовцитох маС, отличающий» ) с я тем, что гемгексапептид, отвечающий, участку 13-18 белковой цепи гемопротеи да.подвергают взаимодействиюс метиловым, эфиром треонина в присутствии пявалоилхлорнда с иоследуюшей обработкой полученного гемпептида 13-19 гидраэингидратом и конденсацией с соответствующими эащищеннймйпептидами в присутствии .йода в щелочной среде в органическом растворителе.

Источники информации, принятые во внямание при экспертизе:

1. Васильева Г. А. и др. Синтез гем пептидов фрагментов цитохрома С. ЖОХ, 42,1402, 1972.