Способ разделения высокомолекулярных веществ-амфолитов

Авторы патента:

C07K1/28 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

A61K38/42 - гемоглобины; миоглобины

A61K38 - Лекарственные препараты, содержащие пептиды (пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца A61K 31/00; циклические дипептиды, не имеющие в молекуле какой-либо другой пептидной связи кроме формирующей их ядро, наприме

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия (i i) 4428 О I

Соеэ Соовтскил

Социалистиииескив

Респу4лик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 07.07.72 (2!) 1810040/31-16 (5!) М. Кл. А 61k 27/10 с присоединением заявки М

Государственный комитет

Совета Министров СССР ао делам иэо4ретений и открытий (32) Приоритет

Опубликовано 15.09.74. Бюллетень Ло 34

Дата опубликования описания 04.07.75 (53) УДК 615.45:612.12.1:

:612.398(088.8) (72) Авторы изобретения

Г. В. Троицкий, И. Ф. Кирюхин и В. П. Завьялов (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ

ВЕЩЕСТВ вЂ” АМФОЛ ИТОВ

Изобретение относится к медицинской и биологической химии, в частности к выделению белков.

Известен способ разделения высокомолекулярных веществ вЂ” амфолитов путем их изоэлектрического фокусирования в градиенте рН, образованного носителями амфолитов, например низкомолекулярными полиаминополикарбоновыми кислотами в постоянном электрическом поле, и отделения полученных фракций. Однако известный способ является трудоемким.

Цель изобретения вЂ” упрощение способа и сохранение стабильности разделяемых веществ. Это достигается тем, что разделение осуществляют путем внесения амфолитов в буферный раствор с заданным градиентом рН, создаваемым различными концентрациями органического растворителя, например глицерина.

Способ разделения высокомолекулярных веществ вЂ” амфолитов производят следующим образом.

Методом электрофокусирования в амфолитах определяют изоэлектрические точки фракций бычьего гемоглобина. Они имеют следующие значения: 7,2; 7,27; 7,32; 7,44; 7,47 и 7,65 единицы рН. В качестве буферного раствора выбирают борно-боратный буфер с рН 8,6 (0,001 М). В качестве органического растворителя применяют глицерин. Используя график зависимости рН исходного буферного раствора от концентрации глицерина, находят концентрации глицерина для создания зон рН, 5 необходимых для электрофокусирования фракций гемоглобина.

Концентрации глицерина, необходимые для создания соответствующих зон рН в исходном буферном растворе, следующие:

10 рН Концентрация глицерина, в о

7,65 1,5

7,47 2,0

7,44 2,5

15 7,32 2,75

7,29 3,0

7,2 3,5

Предмет изобретения

20 Способ разделения высокомолекулярных веществ вЂ” амфолитов путем их изоэлектрофокусирования в градиенте рН и отбора полученных фракций, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и сохранения

25 стабильности разделяемых веществ, разделение осуществляют путем внесения амфолитов в буферный раствор с заданным градиентом рН, создаваемым различными концентрациями органического растворителя, например гли30 церина.