Способ получения циклопептида

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К ПАТЕНТУ (!!) 535902

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к патенту (51) М. Кл.а С07С 103/52 (22) Заявлено 25.10.68 (21) 1280361/04 (23) Приоритет — (32) 25.10.67 (31) 125842 (33) Франция

Опубликовано 15.11.76. Бюллетень Ме 42

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений (53) УДК 547.964.4 07 (088.8) и открытий

Дата опубликования описания 28.03.77 (72) Автор изобретения

Иностранец

Жорж Жоллес (Лихтенштейн) Иностранная фирма

«Рон-Пуленк А. 0.» (Франция) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛОПЕПТИДА

N нЗ Сн(снз)р Снз С» (Сн )

Снз сн, с», R — N Со h -СНСО-ННСНСΠ— > †)-СО-ИНСНСО !

1 н,с — сн тт — Сн, сн- сн(сн,), СО-СН, JIH-СОСН N СО N — CO

1 сн, сн, сн(сн,), где R означает ацильный радикал, который может входить в следующую группу радикалов: алканоил, аценоил, алкадиеноил, алкилоксикарбонил, аралканоил, ароил, арилсульфенил, арилсульфинил, ар илсульфонил, циклоалкилкарбонил, гетероциклилкар бонил, гетероциклилалканоил или остаток линейного или циклического пептидного радикала, который одной карбонильной группой связан с атомом азота 1 -4-транс-метилпролина в боковой цепи циклопептида.

Алкильные, аценильные или алкадиенильные части вышеуказанных радикалов представляют собою линейные или разветвленные цепи, содержащие 1 — 50 атомов углерода, возможно замсщенные одним или несколькими атомами галогена или радикалов (аминного или алкилтиолового с содержанием 1— э атомов углерода).

Алкильные части алкилоксикарбонильных радикалов с содержанием 1 — 5 атомов углерода могут быть замещены диалкоиламинорадикалом, дающим алкильные части с содержанием каждая 1 5 атомов углерода.

Ароматические части аралканоильных, ароильных, арилсульфенильных или арилсульфонильных представляют собою бензольное или нафталиновое кольцо, возможно замещенное одним или несколькими радикалами: алкилами, гидроксилами, бензоилом, амино10 группой, диалкиламиногруппой, алканоиламиногруппой или нитрогруппой, алкильными радикалами и алкильными частями других радикалов с содержанием 1 — 12 атомов углерода.

15 Гетероциклические части гетероциклилкарбонильных или гетероциклилалканоильных радикалов представляют собою моноциклические гетеросоединения, содержащие один или несколько гетероатомов, входящих в группу атомов азота, кислорода или серы и возможно замещенных одним или несколькими алкильными радикалами или нитрогруппой.

Циклоалкильные части циклоалкилкарбонильных радикалов представляют собою пятичленные или шестичленные циклоалкильные радикалы, возможно замещенные одним или несколькими амин ными радикалами, аминорадикалы, замещающие алкильные, алцениль30 ные или циклоалкильные части радикалов, 535902 природа которых указана выше, причем аминные функции пептидных линейных или циклических радикалов могут быть замещены одним или несколькими алкильными, алканоильными, аралкильными, алкилоксикарбонильными, аралкилоксикарбонильными или алкилоксиаралкилоксикарбонильными группами. Алкильные радикалы или алкильные части других радикалов могут содержать 1—

30 атомов углерода.

В соответствии с изобретением циклопептид указанной общей формулы получают из соответствующего циклопептида со свободной иминной группой пролина путем конденсации с активированным производным кислоты, например карбодимидным методом.

Циклопептид А (R в этом случае замещен атомом водорода) может быть получен путем контролируемого гидролиза антибиотика

11072 RP, синтез которого описан во французском патенте 1393208, Антибиотик 110072

RP может быть гидролизован в циклопептид А органической или неорганической кислотой в органическом растворителе. Лучше всего использовать для этого безводный метанол в соляной кислоте. Реакция выполняется при 20 С в течение 2 ч.

В качестве методов конденсации можно упомянуть, например, методы с использованием карбодимида, например дициклогексилкарбодимид, метод со смешанным ангидридом.

В соответствии с этими методами свободные функциональные группы, которые не должны участвовать в реакции, замещают группами, обладающими способностью к последующему элиминированию без взаимодействия с остальной частью молекулы. Обычно используют для этой цели остатки, которые могут быть удалены гидролизом или восстановлением. Аминогруппа обычно защищается такими алкилоксикарбонильными соединениями, как трет-бутилоксикарбонил, аралкилоксикарбонил, как бензилоксикарбонил или аралкил (как бензил).

Смешанный ангидрид обычно получают действием алкилхлорформиата, например этилового или изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты, на кислоту R — ОН в органическом растворителе, например в хлористом метилене в присутствии органического основания, например триэтиламина при — 10 С.

Продукты согласно изобретению обладают ценными свойствами в терапии.

Это антибиотики с высокой антитуберкулезной активностью и высокой активностью в отношении грам-положительных и грам-отрицательных бактерий.

Эти соединения дали хорошие результаты при испытаниях их на противотуберкулезную активность. Они угнетают размножение вирулентных туберкулезных бацилл, например штаммов, действующих на человека, коровьего штамма и различных устойчивых мутантов.

Активность in vitro определяется путемраз1О

65 бавления сред Дюбо. В этих условиях минимальная угнетающая концентрация находится между 0,005 и 1 мкг/мл.

Особенно интересны продукты общей формулы, где R — это алканоильный или альценоильный радикал, замещенный амино- или алкилтиогруппой, или же линейным пептидным радикалом, причем аминные радикалы могут быть еще замещены по вышеуказанному, Активность in vivo определяется на экспериментальных инфицированных мышах путем введения указанных соединений в течение трех недель, начиная со дня, следующего за заражением. Нелеченые мыши погибали за

20 — 30 дней. В этих условиях были определены минимальные эффективные дозы 50—

300 м г/кг (чер ез рот) .

Особенно эффективны продукты общей формулы, где R — это алканоильный радикал, замещенный аминогруппой или линейным пептидным радикалом, причем аминные радикалы сами могут быть замещены по вышеуказанному.

В медицине можно использовать новые соединения в виде оснований солей от присоединения к ним кислот или четвертичных аммониевых солей, приемлемых для фармацевтики, т. е. нетоксических в тех дозах, в которых они используются.

Как примеры получения продуктов от присоединения фармацевтически приемлемых соединений, можно назвать соли минеральных кислот — хлоргидраты, сульфаты, нитраты, и фосфаты или соли органических кислот (как ацетаты, пропионаты, сукцинаты, бензоаты, фумараты, малеинаты, тартраты, метансульфонаты, бензолсульфонаты, теофиллинацетаты, салицилаты, фенолфталинаты, метиленбис — бетаоксинафтеаты) или замещенные производные этих кислот.

В качестве четвертичных аммониевых солей, приемлемых с точки зрения фармацевтики, можно назвать сложные эфиры неорганических или органических производных. Сюда относятся хлорметилаты, бром метил аты, йодметилаты, соответствующие этилаты, аллилаты или бензилаты, метил- или этилсульфаты, метансульфонаты, бензолсульфонаты или замещенные такого рода соединения.

Качество продуктов в нижеследующих примерах определяют хроматографически в тонком слое на силикагеле.

П р и и е р 1. Получение циклопептида А

150 г пептида — антибиотика, полученного по французскому патенту № 1393208, растворяют в 1320 мл 4,5 н. раствора хлористого водорода в метаноле. После перемещения в течение 2 ч при 20 С раствор концентрируют и выпаривают его досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток экстрагируют дважды, каждый раз порцией по 250 мл метанола. Эти вытяжки дают после выпаривания аморфный остаток, который растворяют в смеси хлороформа — метанола (95 и 5 объе5 мов соответственно). Полученный раствор сливают через колонку диаметром 11 см, заполненную 2 кг силикагеля. Элюирование проводят тем же растворителем. Собирают фракции до 640 мл каждая. Фракции 10 — 16 дают 123,3 г хроматографически чистого циклопептида А с выходом 95,5 /ю.

R — 0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол=65: 35 по объему); (а) = — 62 (с=0,5 в метаноле).

Пример 2. Растворяют 3,35 г циклопептида А в 70 мл этилацетата. Добавляют

1,13 г N. -ацетил-N -бензилоксикарбонил-1 -лизина. Смесь охлаждают в ледяной бане и добавляют 0,8 r дициклогексилкарбодимида.

Перемешивают 2 ч при внешнем охлаждении в ледяной бане, затем выдерживают в течение 15 — 20 ч при 20 С. Добавляют 5 капель ледяной уксусной кислоты и отфильтровывают нерастворимую часть. Осадок промывают этилацетатом, объединяют органические вытяжки и выпаривают их досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 10 мл этилацетата и промывают полученный раствор последовательно 2 /o-ным раствором двууглекислого натрия, нормальной соляной кислотой и дистиллированной водой.

Органическую фазу высушивают над безводным сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают фильтрат досуха при 25 мм рт. ст.

3,14 г сырого остатка пропускают через колонку диаметром 3 см с содержанием 75 г силикагеля. Последовательно элюируют бензолом, смесями из 9 объемов бензола и 1 объема этилацетата, затем смесями 5: 5 (также в объемах), далее смесями 90: 10 или 75:

: 25. Фракции, элюированные этилацетатом и двумя смесями этилацетата и метанола (95: 5 и 90: 10 или 75: 25) объединяют и выпаривают досуха при 25 мм рт. ст. Получают 2,13г (N. -ацетил-N; -бензилоксикарбонил - 1 - лизил)-циклопептида А с выходом 48,5 / .

N = 12,43 / (теоретически 12,20); (а) =

= — 67,7 (с=0,5 в метаноле); Ry — — 0,73 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол =8: 2 ro объему) .

Таким же образом из подходящих исходных продуктов получают: (N-бензил-N-метил - 1 - валил) - циклопептид А

С=64,13 / (теоретически 64,30); Н=8,53 / (теоретически 8,67); К;=0,67 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=

8: 2 по объему); хлоргидрат (N-бензил - N - метил-D-валил) — циклопептид А

N= 11,50 /o (теоретически 11,69); С1=

=2,95 / (теоретически 2,96); Ry=0,87 (силикагель, соотношение хлористый этилен:метанол = 65: 35 по объему); метансульфонат (N — бензил-N-метил-D,1в а лил) - ци кл оп епти да А.

N= I0,59 /n (теоретически 11,13); $=2,65 Й

535902

6 (теоретическп 2,55); R = 0,74 (сил икагель, соотношение хлористый этилен: метанол =

= 80: 20 по объему); (N - бензилоксикарбонил - 1-валил)-цикло5 пептид А

N=11,93 / (теоретически 11,76); (а) =

= — 73,2 (с=0,5 в метаноле); Ry — — 0,85 (силикагель, соотношение хлористый этилен: ме10 танол = 65: 35 по объему); (N - бензоилоксикарбонилглицил) - циклопептид А

N = 11,87 / (теоретически 12,18); R = 0,40 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

15: метанол = 8: 12 по объему); метансульфонат (N - бензилсаркозил) циклопептида А

N=10,81 /o (теоретически 11,52); S=2,89", (теоретически 2,64); R,=0,77 (силпкагель, соотношение хлористый этилен: метанол=65:

: 35 по объему); (Я вЂ” деканоил-1 -валил) -циклопептид А

N= 11,60 / (теоретически 11,56); Rf — — 0,83 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол=8: 2 по объему); (ундецен-10-оил) - циклопептид А

С = 64,33 / (теоретически 64,08); N =

=10,95 / (теоретически 11,21); R;=0,53 (силикагель, соотношение хлористый этилен: меЗО танол = 8: 2 по объему);

1 - метил — 4 - нитро - 2 - пирролилкарбонил) - циклопептид А.

N = 13,81 / (теоретически 13,87): К; = 0,84 (силикагель, соотношение хлористый этилеп:

З метанол = 8: 2 по объему); хлоргидрат (N - бензил-N-метил-а-метионил) -циклопептида А

N=11,62 / (теоретически 11,38); S=3,12 /o (теоретически 2,61); К;=0,65 (силикагсль, 4о соотношение бутанол-1: уксусная кислота: вода = 4: 1: 5 по объему); (N - бензилоксикарбонил - 1 — фенилглицил) - циклопептид А

N= 11,11 / (теоретически 11,42); Rr=0,85

4 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65: 35 по объему); хлоргидрат (N - гексил-N-метил-1 -валил)циклопептида А

С (для основания) = 63,45 /, (теоретически 63,40); Н (для основания) = 9,12", (теоретически 9,24); N (для основания) =12,03 /д (теоретически 12,12); R; =0,53 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол

8: 2 по объему). хлоргидрат (N - бензил - N - метил-1-аланил) - циклопептида А

N=12,20 /o (теоретически 11,98); C1=3,3 /o (теоретически 3,03); R =0,85 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=65:

: 35 по объему);

N - бензил-N-метил - 1 - фенилаланил). циклопептида А

N= 11,50 / (теоретически 11,58); Ry — — 0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен

65: метанол 8: 2 по объему);

535902 пальмитоил-циклопептид А

С=64,45 /о (теоретически 65,24); Н 9,41 /о (теоретически 9,51); N=10,30 /o (теоретически 10,53); Ry=0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол=8: 2 по объему); ундеканоил-циклопептид А

С =64,78 (теоретически 64,0); H=9,28 /о (теоретически 9,21); N= 10,9О/о (теоретически

11,18); Rg = 0,52 (силика гель, соотношение хлористый этилен: метанол=8: 2 по объему); додеканоил-циклопептид А

N= I1,1 /o (теоретически 11,05); R =0,78 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=8:2 по объему); (L (+) — 6 метилоктаноил)-циклопептид А

С=63,63 /о (теоретически 63,41); Н=8,50 /о (теоретически 9,03); N =11,12 /о (теоретически 11,47); К!=0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен:метанол = 8: 2 по объему); бензоил-циклопептид А

N = 11,88 /о (теоретически 11,86); Ry = 0,85 (силикагель, хлористый этилен: метанол =

=65: 35 по объему). изоникотиноил-циклопептид А

N=13,14 /о (теоретически !3,17); Ку=0,83 (силикагель, хлористый этилен: метанол =

= 65: 35 по объему);

Салицилоил-циклопептид А

N= 11,97 /о (теоретически 11,68); R< — — 0,80 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65: 35 по объему); деканоил-циклопептид Л

C=63 98 / (теоретически 63,69); Н=9,41 /о (теоретически 9,15); Ку=0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65:

: 35 по объему); хлоргидрат - (N - гексил-1 -валил) -циклопептида А 4

N (для основания) 12,25 /о (теоретически

12,27); Ry = 0,37 (силика гель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему); (N — бензил-N-метил-L-лейцил) - циклопеп- 4 тида А

N = 11,99 о/о (теоретически 11,91); Rg= 0,72 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему); (4 — параметоксибензилоксикарбонилами- 5 но) - циклогексилкарбонил - циклопептид А, N= 10,8 /о (теоретически 11,22); Rq — — 0,76 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 8: 2 по объему); (10-метил-3-фенотиазинил) - ацетил - циклопептид А

N= 11,3 /о (теоретически 11,56); S=2,53 /о (теоретически 2,64); Rq — — 0,56 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему);

2 - (3 - бензоилфенилпропионил) - циклопептид А

N=10,45 /о (теоретически 10,55); Яу=0,57 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 8: 2 по объему); 6

8 (N,N - дигептилглицил) - циклопептид А

N= 11,43 /о (теоретически 11,56); Ку=0,76 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

; метанол = 8: 2 по объему) .

5 Пр и мер 3. Растворяют 0,21 г N - третбутилоксикарбонил-L-валила в 25 мл хлористого метилена, к которому предварительно добавляют 0,14 мл триэтиламина. Охлаждают до — 7 С и приливают 0,1 мл этилового эфи10 ра хлормуравьиной кислоты и перемешивают в течение 35 мин при — 5 С, После этого приливают раствор 0,96 г циклопептида А в

10 мл хлористого метилена +0,14 мл триэтиламина. Вновь перемешивают в течение

15 18 ч при внешнем охлаждении в ледяной бане. Выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Всего получается 0,97 г (N - трет-бутилоксикарбонил - - валил)циклопептида А в виде сырца с выходом 84 /О.

20 Продукт растворяют в этилацетате. Раствор фильтруют и промывают водой. После выпаривания досуха при 25 мм рт. ст. получают

0,73 r (N-трет-бутилоксикарбонил - 1 - валил) - циклопептида A с выходом 63 /о.

25 N = 11,7 о/о (теоретически 12,1); Яу = 0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол=8: 2 по объему) .

Пример 4. Растворяют 1,43,ггептано вой кислоты в 5 мл диметилформамида и добав30 ляют 0,173 r N - оксисукцинимида. Охлаждают до — 10 С, добавляют 0,31 r дициклогексилкарбомида, перемешивают 1 ч при 10, затем 2 ч при 0 и 18 ч при 20 С.

Образовавшуюся дициклогексилмочевину от35 фильтровывают, после чего приливают к фильтрату раствор 1,44 r циклопептида А в

75 мл диметилформамида с добавкой 0,21 мл триэтиламина. Затем перемешивают 18 ч при

20 С. Реакционную среду выпаривают досу0 ха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Полученный остаток растворяют в 50 мл этилацетата и последовательно промывают водным

5 /о -ным раствором двууглекислого натрия, 1 и. соляной кислотой и водой. Органическую фа5 зу сушат над безводным сернокислым натрием и отфильтровывают и фильтрат выпаривают досуха при остаточном давлении

25 мм рт. ст.

Остаток хроматографируют с использованп0 ем двадцатикратноГо веса силикагеля и с элюированием смесями хлороформа и метанола, в которых постепенно повышают содержание метанола. Гептаноилциклопептид А элюируют смесью хлороформом: метанол (98: 2), 5 Соответствующие фракции концентрируют досуха при 25 мм рт. ст, Получают 0,92 г гептаноилциклопептида Л с выходом 37О/о.

N= 11,2 /o (теоретически 11,77); С =62,6 /о (теоретически 62,83); Н= 8,9 /о (теоретически

8,94), R<=0,82 (силикагель, хлористый этилен: метанол = 65: 35) .

Таким же образом, но с применением надлежащих веществ можно получить следую5 щис продукты:

535902 стеароилциклопептид А

С=65,80 /о (теоретически 65,70); Н=9,60 /О (теоретически 9,62); Rf=0,82 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=65:

: 35 по объему); и-бутирилциклопептид А

С =60,9 /о (теоретически 61,9); Н=8,7 /о (теоретически 8,72); 8 =0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол

= 65: 35 по объему); сорбоилциклопептид А

N = 11,99 о/о (теоретически 11,97); Ry = 0,75 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 65: 35 по объему); хлоргидрат 11 - пирролидиноундеканоилциклопептида А

N = 10,9 /о (теоретически 11,35); С1=2,05 (теоретически 2,87); Ry — — 0,60 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65:

: 35 по объему); хлоргидрат 2 - пирролидиногексаноил-циклопептида A

N = 11,81 (теоретически 12,05); Rf = 0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 65: 35 по объему).

Пример 5. Растворяют 2,5 г L (+)-6-метилоктаноил — Na - бензилоксикарбонил-L-а-7диаминобутирил-1-треонил - N - бензилоксикарбонил - 1 — а - у - диаминобутирилгидразида в 75 мл ледяной уксусной кислоты и

7,08 мл н. соляной кислоты. Охлаждают до

2 С и добавляют ледяной раствор 0,232 г азотистокислого натрия в 2,5 мл воды. Перемешивают 15 мин при 0 С и переливают в ампулу, также охлажденную до 0 С, после чего приливают 200 мл водного 5 /о-ного раствора двууглекислого натрия. Сливают органическую фазу и промывают ее пять раз последовательно с применением 60 мл ледяного

5 /о-ного раствора двууглекислого натрия.

Промывные воды вновь экстрагируют 100 мл ледяного этилацетата. Органические вытяжки промывают ледяным 5О/,-ным раствором двууглекислого натрия. Объединяют все органические вытяжки и высушивают их над безводным сернокислым натрием при 0 — 2 С.

Быстро фильтруют и приливают раствор

L(+)-6- метилактаноил - Ny - бензилоксикарбонил-1 -а-у - диаминобутирил — 1 -треонилN — бензилоксикарбонил-L-а-у-диаминобутирилазида к ледяному раствору 3,23 r циклопептида А в смесь 100 мл этилацетата и

0,47 мл триэтиламина. Перемешивают в течение 18 ч при 0 — 2 С и 48 ч при 20 С.

Полученный раствор выпаривают досуха при давлении 25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 100 мл воды, растирают до полного измельчения, отфильтровывают и сушат при пониженном давлении (0,3 мм рт. ст.) в присутствии пятиокиси фосфора. Полученный продукт растворяют в 20 мл ацетона, отфильтровывают небольшой осадок и выпаривают досуха при 20 мм рт. ст.

Таким образом получается (4,44 г L (+)6-метилоктаноил - у - бензилоксикарбонил-L5

Зо

10 а - у - диаминобутирил - L - треонил-N-y-бензилоксикарбонил-L - а - у - диаминобутирил1циклопептида А с выходом 79 /о.

N= 11,54 о/о (теоретически 11,75); RJ = 0,92 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 1: 1 по объему).

Таким же образом, но с применением других необходимых исходных веществ получают (Na-пальмитоил - N — в — бензилоксикарбонил - 1 - лизил) — циклопептид А.

N=10,51 /о (теоретически 10,51); С=64,65О/о (теоретически 65,03); Н=8,89 (теоретически 9,05); R =0,75 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему); (Na - пел аргонил-N-е-бензилоксикарбонил1 — лизил) — циклопептид А

N= 11,08 (теоретически 11,32); С=63,18 /о (теоретически 63,55); Н=8,41 (теоретически

8,66); R;=0,59 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему); (Ny - пальминтол - N - у - бензилоксикарбонил - L - а - у - диаминобутирил)-циклопептид А

С = 65,02 о/О (теор етически 64,63); N =

= 10,59 /о (теоретически 10,76); Н = 8,82 /о (теоретически 8,95); Ry=0,68 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8:

: 2 по объему); (Na-1 (+)-6-метилоктаноил - Ny - бензилоксикарбонилдиаминобутирил) — циклопептид А

N = 11,13 /о (теоретически 11,56); С =

= 63,00 /О (теоретически 63,08); Н = 8,51 /о (теоретически 8,55); R<=0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол =

= 8: 2 по объему);

Пример 6. Синтез проводят по примеру

4, используют следующие исходные продукты:

2,5 r 1 (+) -6-метилоктаноил-N-y-бензилоксикарбонил-L-а-у-диаминобутирил - 1 — треонил - Ny - бензилоксикарбонил-L-а-у-диаминобутирилгидразида; 75 мл ледяной уксусной кислоты; 7,08 мл 1 н. соляной кислоты; 232 мг азотистокислого натрия; 3,6 г (N-метил-1 -валил) — циклопептида А в виде раствора в

2,5 мл воды, 100 мл этилацетата и 0,94 мл триэтиламина.

Получают 5 3 г 1 (+) -6-метилоктаноилNy — (бензилоксикарбонил-1 -а-у-диаминобутирил - 1 -треонил - N-у-бензилоксикарбонил1 -а-у-диаминобутирил-N-метил - 1 - валил)циклопептид А с выходом 87,5 . Продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя 50 г силикагеля на 5 г продукта, который элюируют в чистом виде этилацетатом и этилацетатом-метанолом, взятыми в отношении 9: 1 по объему. Эта очистка дает возможность получить 2,81 г L(+)-6-метилоктаноил-N-y-бензоилоксикарбонил - L - а - у диаминобутирил - L — треонил-N-y-бензоксикарбонил-1 -а-у-диаминобутирил - N — метил1 - валил) — циклопептид А в хроматографически чистом виде с выходом 47О/о.

535902

Зо

N = 11,79 /о (теоретически 11,79); Ry — — 0,31 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 8: 2 по объему).

Таким же путем получают следующие продукты:

N — стеарил — 1 - валил (циклопептид А);

N = 10,46 /О (теоретически 10,58); Я = 0,45 (силикагель, соотношение хлористый метилен: метанол = 8: 2 по объему);

N — (стеароил - N - метил-1-валил)-циклопептид А

N =10,02 /o (теоретически 10,4); Ку= 0,78 (силикагель, соотношение хлористый метилен: метанол = 8: 2 по объему).

Пример 7. Растворяют 2 г циклопептида А в 40 мл хлористого метилена и добавляют еще 0,28 мл триэтиламина. Смесь охлаждают до (— 5) — (— 10) С, затем приливают в течение 10 мин одновременно два следующих раствора: 0,56 мл триэтиламина в растворе в 15 мл хлористого метилена и 0,684 г хлоргидрата 11-диэтиламино — ундецилового эфира хлормуравьиной кислоты. Перемешивают в течение 2 ч при 0 С и затем 18 ч при

20 С, промывают реакционную среду 5 /о-ным раствором двууглекислого натрия и затем насыщенным раствором поваренной соли. Высушивают над сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток хроматографируют на 25 г силикагеля, засыпанного в колонку диаметром 12 мм. Фракции элюируют смесями этилацегата: метанола, соотношение

98:2 и 95:5 по объему, объединяют и выпаривают досуха при остаточном давлении

25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 40 мл воды, добавляют по каплям н. соляную кислоту до рН=3. Отфильтровывают небольшой остаток и лиофилизуют фильтрат. Получают

1,24 r хлоргидрата 11-диэтиламиноундецилоксикарбонил - циклопептида А с выходом

50 о/о.

N=10,87о/о (теоретически 11,07); Ry=0,64 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 65: 35) .

Таким же образом получаются следующие соединения: децилоксикарбонил - циклопептида Л

С = 63,50 /о (теоретически 63,08);

= 11,95 /о (теоретически 11,03); Н = 9,10 /о (теоретически 9,08); Ry — — 0,85 (силикагель; соотношение хлористый этилен: метанол =

= 8: 2 по объему).

Смешивают 2,98 г циклопептида А, 0,569 г хлористого ортонитрофенилсульфенила и ),42 мл триэтиламина в 40 мл этилацетата при 2 С. Перемешивают 18 ч при охлаждении в ледяной бане, после чего выпаривают досуха при давлении 22 мм рт, ст. Получают

3,45 r сырого продукта, который хроматографируют на силикагеле в колонке диаметром 20 мм. Фракции, элюированные этилацетатом, выпаривают досуха при 25 мм рт. ст.

Получают 1 г ортонптрофенилсульфенилциклогсптида А.

12

N = 12,1 (теоретически 12,6); $ =2,85 /о (теоретически 2,88); R — — 0,79 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему) .

Таким же образом, из соответствующих исходных продуктов получают следующие соединения:

1 - диметиламинонафталинсульфонил — 5циклопептид А

N= 11,66 /о (теоретически 11,75); $=2,69 /о (теоретически 2,69); Rf=0,70 /о (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол =

= 8: 2 по объему); паратолуолсульфонилциклопептид А

N=11,10 /o (теоретически 11,33); $=2,56 /o (теоретически 2,88); Ry=0,74 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол =

= 8: 2 по объему); пар аацетиламинобензосульфонилциклопептид А

N= 11,71 /о (теоретически 12,12); $ =2,93 /о (теоретически 2,77); Rf=0,82 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему).

Пример 8. Растворяют 863 мг Иа-ацетилNa - бензилоксикарбонил - 1 - лизил)-циклопептида А в 25 мл метанола. Добавляют

863 мг палладиевой черни с 3 /о активного металла, Гидрируют при интенсивном перемешивании в течение 2 ч при 20 С и давлении

760 мм рт. ст.

Фильтруют полученный раствор и промывают осадок 10 мл 0 5 н. соляной кислоты.

Фильтрат и промывные воды объединяют и выпаривают досуха при остаточном давлении

25 мм рт. ст. на вращающемся испарителе.

Остаток растворяют в 5 мл ацетона и высаживают продукт 50 мл ледяного эфира. После охлаждения в течение 3 ч до 4 С отфильтровывают осадок, который промывают эфиром, высушивают 18 ч при давлении

0,3 мм рт. ст. в присутствии пятиокиси фосфора. Получается всего 0,46 r (Ха=ацетилL-лизил) - циклопептида А с выходом 57,6 /о.

N= 13,0 /о (теоретически 13,23); (аЯ =77,2 (с=0,5 в метаноле); Ró= 0,56 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 1:

: 1).

Таким же образом соединения: метансульфонат L-валилциклопептида А

N= 11,83 /о (теоретически 12,14); Rf 0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65:35 по объему); хлоргидрат t L(+) - 6 - метилоктаноил-L-ау-диаминобутирил - L - треонил-L-а-у-диаминобутирил)-циклопептида А.

С1=5,08 /о (теоретически 4,81); К =0,14 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 1: 1 по объему); хлоргидрат L (+) - 6 — метилоктаноил-1 -ау-диаминобутирил — 1 - треонил-L-а-у-диаминобутирил - N - метил-L-валил-циклопепти. да Л.

14

40 сна сп,сп,, сн, сп, z — н — Co-н-сисо-ннгноо

1 н.с — сн о

1 со- сн, ия-со сп к сн, си, с 1сн, . си, сн,1, (Сн, Й вЂ” -со ннснсо

N- (и;

СН C iC iÄ:,,Q — — к CO

Составитель А. Нестеренко

Техред Е. Петрова

Корректор Л. Котова

Редактор Т. Девятко

Заказ 774/5 Изд. № 1764 Тираж 575 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

N = 13,37 о/о (теоретически 13,25); Cl =

=4,47 /о (теоретически 4,47); К;=0,05 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 1: 1 по объему); (N - а - пальмитоил - L-лизил) - циклопептид А

N=10,90/0 (теоретическн 11,3); Rj=0,14 (силикагель, соотношение хлористый этилсн: метанол = 8: 2 по объему); хлоргндрат (Na, — пеларгонил-1 - лизил)циклопептида А

N= 12,20 /0 (теоретически 12,19); Сl=

=2,95 /о (теоретически 2,81); Rj= 0,08 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему); хлоргидрат (Na — L (+) - 6 — метилоктаноил-1 -а-у-диаминобутирил) - циклопептида А

N = 12,27 о/о (теоретически 12,48); К, = 0,40 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 8: 2 по объему); (N - метилпарадиметиламинофенил - Р,1 аланил) - циклопептид А.

N = 13,05 /о (теоретически 13,25); Rj=0,5 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 8:2 по объему).

Пример 9. 0,5 г (параметоксибензилоксикарбонил - 4 - аминоциклогексилкарбонил)циклопептида А растворяют в 10 мл диоксана, добавляют 0,25 мл 4 н. безводного раствора НС1 в диоксане и перемешивают полученный раствор в течение 18 ч. Растворитель отгоняют при давлении 30 мм рт. ст. и 35 С и растворяют остаток в 20 мл этилацетата.

Полученный раствор промывают 20 мл воды, сливают органическую фазу и выпаривают досуха при давлении 30 мм рт. ст. и 35 С.

Остаток растворяют в 10 мл диоксана и обрабатывают 4 ч 0,84 мл 4 н. безводного хлоргидрата диоксана. Растворитель отгоняют в вакууме при 30 мм рт. ст. и 35 С и растворяют остаток вновь в 20 мл этилацетате.

Раствор промывают 20 мл воды. Сливают водную фазу, которую объединяют с водной фазой, полученной при первой обработке.

Раствор концентрируют и выпаривают досуха при 35 С и 0,3 мм рт. ст. Остаток растворяют в 10 мл воды, фильтруют для освобождения от легкого осадка и выпаривают досуха в вакууме. Остаток растворяют в 10 мл воды и лиофилизуют.

Таким образом получают 0,355 r 4 - аминоциклогексилкарбонилциклопептида А с выходомм 78 о/oN=12,75 /o (теоретически 12,51); Rj=0,43 (силикагель, соотношение хлористый этилен: . метанол = 8: 2 по объему).

П р и мер 10. 10 г циклопептида А растворяют в 200 мл хлористого метилена и добавляют 1,4 мл триэтиламина. Полученный раствод охлаждают при — 5 С и добавляют к не5 му в течение 10 мин ледяной раствор 1,81 г хлористого трихлорацетила в 20 мл хлористого метилена. Реакционную смесь 2 ч перемешивают при — 5 С, а затем еще 18 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняют в

10 вакууме при 30 мм рт. ст. и 50 С и растворяют в 100 мл этилацетата. Отфильтровывают муть и промывают фильтрат последовательно дважды 75 мл 5 /о-ного ледяного раствора двууглекислого натрия, дважды 75 мл 1 н. со15 ляной кислоты и затем 30 мл насыщенного раствора поваренной соли. Органическую фазу сушат над сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают досуха при 30 мм рт. ст. при 50 С. Получают 7,23 г сырого продукта, 20 который растворяют в 20 мл этилацетата и элюируют через колонку с 125 мл силикагеля диаметром 20 мм. Для элюирования пользуются этилацетатом. Продукт собирают в виде фракции между 150 и 450 мл элюата после

25 отгонки вытяжек при 30 мм и 50 С.

После сушки при 30 С и 0,1 мм рт. ст. получают 76 г трихлорацетилциклопептида А с выходом 53 /о.

30 N = 10,9 /o (теоретически 11,13); Rj = 0,8 (силикагель, соотношение хлористый этилен:

: метанол = 65: 35 по объему).

35 Формула изобретения

Способ получения циклопептида общей формулы. где R — ацильныи радикал о т л и ч а ю

5р шийся тем, что активированное производное кислоты R — ОН конденсируют с соответствующим циклопептидом известным способом, например карбодиимидным, азидным, методом активированных сложных эфиров, и

55 методом смешанных ангидридов или хлорангидридов.