Способ получения эритроцитарных диагностикумов

 

петец ко-те;;нкчесная

О П И С А Н 648228

ИЗОБРЕТЕН

Союз Советских

Социалистических

Республик

Х АВТОРОеОМУ СВИДЙТВ (61) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 2 7„09. 77 (21) 25282 с присоединением заявки №вЂ” (23) Г1риорнтет—

Опубликовано25.02.79.Бюлле

Дата опубликования описания

1) М. Кл, A 61 К 35/18

Государственный номнтет

СССР оо делам нзобретеннй н отнрытнй

3) УДК 6>6-097 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. Я, Молиашвили, С, И. Елкина и Н. Е, Канделаки

М осковский- научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

1 (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРО11ИТАРНЫХ

ДИ АГН ОСТИК УМ ОВ

Изобретение относится к медицине и ка- сается получения эритроцитарных диагностикумов. .Известен способ получения эритроцитарных диагностикумов путем формалинизации, танизации и сенсибилизации эритроцитов высокоактивным специфическим белковым сенситином с последующим осаждением сенсибилизированных эритроцитов,отмыванием и консервацией формалином (1f

Однако известный способ»е обеспечивает высокой специфичности дна гностикума.

Для повышения специфичности диагностикума непосредственно после сенсибилизации специфическим сенситином осуществляют дополнительную сенсибилизацию эритроцитов неспецифическим белком.

Кроме того, сенсибилизацию неспецифическим белком проводят при температуре

4 — 8 С в течение 18 — 20 ч.

А сенсибилизированные эритроциты консервируют 4О/р-ным раствором формалина в фосфатно-буферном растворе.

Для осуществления способа приготавливают следующие растворы.

Раствор 1. Готовят, 0,89 !q-ный раствор хлористого натрия на дистиллированной воде (pH --7,2). На каждые 10л такого раствора добавляют 2л 1/15 М фосфатного буфера (рН вЂ” 7,2) с содержанием 0,85О/о хло- ристого натрия, приготовленного на бидистиллированной воде. Раствор фильтруют через стеклянный фильтр № 3 — 5.

Раствор 2. 40%-ный раствор формалина доводят до рН вЂ” б,4 или 7,2 1 М раствором едкого натра или формалина.

Раствор 3. Для приготовления раствора раствор 2 .(рН вЂ” 7,2) разводят раствором 5 в 100 раз.

Раствор 4. Для приготовления этого раствора танин перед употреблением разводят 1:40000 раствором 5.

Раствор 5. Готовят 1/15 М фосфатный буфер (рН вЂ” 7,2) с содержанием 0,85% хлористого натрия на бидистиллированной воде.

Раствор 6. Для приготовления этого раствора формалин разводят до концентра20 ции 4%-ным раствором 5 (pH — 7,2) .

Раствор 7. Готовят раствор хлористого натрия 0,85%, pH =- 7,1 — 7,2. К одному литру такого раствора добавляют 300 мл

1/15 М фосфатного буфера (рН вЂ” 7,2), при;

° готовлен ного на бидистиллированнои воде.

648228

Составители С. Малютина

Редактор Т. !1!агова ТсхредО Луговая Корректс)р С. И!екмар

Заказ 4! 8/5 Тираж 67 Подписное

ЦНИИ ПИ Го< ударственного коми гста СССР ио делам изобретений и открытий

I!3035), Москва, Ж-35, Раугискав наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», r. Ужгород, ул. Проектная, Способ осуществляют следу!ощим образом.

Дефибринированну!о баранью кров!; фильтруют поочередно через двух. трех, чсTbIpcx, и восьмислойные марлевые стерильные фильтры. Фильтровяннуlî крсвь отмывают от сыворотки раствором ¹ 1.

Формалинизацию эритроцитов произв!)дят в пятилитровых банках. Для чего бараньи эритроциты разводят 1: 1 раствором № 1, затем в банку вносят нсйтральш,)й ф<)рмалин (ряствор № 2, рН ==- 7,2) в объеме, равном 1/5 к объему взвеси эритроцитов, при эт!)м формалин залива!от в мешок из вискозы, который находится в банке со взвесью эритроцитов. Субстрат шуттег!и!)уют на аппарате марки ДВА — -3 220 в. Встряхивание длится 16ч при комнатной температуре. По истечении 2 ч внскозный мешок прокалыва!от на равном расстоянии по вертикали в пяти местах и удаляют пену -- лиш!ды путем ядсорбции. Через 12 ч вискозпый мешок разрывают, удаля!от, а эритроциты Lllóòòåëèpóloò еще 2 и. Формялннизировя)!ные эритроциты фильтруют Фильтр )ванне заканчивают, когда надосадочняя жи!!; кость становится бесцветной. После это п) стандартизуют эритроциты центрифугированием при 2000 — 3000 об/мнн в.течение 10 мин прп температуре 5 С, полученный осадок ресуспендируют и доводят до 50 /о-нои густоты раствором ¹ 3. Эритроциты проверяют на спонтанную агглютинацию:

Затем осуществляют тац!!зяц!т!о эритро,цитов, формалинизированные эритроциты отмывают 100-кратным объемом раствора ¹ 1 в тех же условиях, что и при формалинизации. Осадок отмытых эритроцитов ресуспендируют раствором № 5 до 2,5 /г густоты и смешивают с равным объемом раствора танина (раствор № 4). Колбу с содержиMblì периодически . встряхивя)от (5 раз) .

Танизация длится 10 мин при комнатной температуре, после чего эритроциты осаждают на центрифуге и один раз отмывя!от раствором № 1. Отмытые танизированн!,!е эритроциты ресуспендируют раствором № 5 до 2,5о/о густоты.

Далее проводят сенсибили.aцик) -.ритроцитов.

Для сенсибилизацни эритроцитов оптимальную дозу высокоочищенного и высокоактивного сенситина (5 мкг) разводят раствором ¹ 5 в объеме не "îëåå 10"/о от общего объема приготовляемого диягностикумя, доливают в суспензию с танизированными эритроцитами, после чего осторожно смешивают вращательными движениями. Суспепзи!о оставляют при комнатной температуре 45 мин с пятикратным перемешиванием содержимого. После этого сенсибилизацию продолжя!от в холодильнике при температу)рс 4 С в течение 20 ч с пятикратным перемсшиванием в течение 10 мин. По истечении этого срока сенсибилизированные эрит-. !

0 роциты осаждают центрифугированием и ресуспендируют в растворе ¹ 5 с содержанием

1о/о-ного неспецифического белка и сенсибилнзируют аналогично предыдущему. Затем эритроциты осаждают на центрифуге и два>кды отмывают раствором № 1, ресусисндируloT до 2,5 /0-ной густоты раствором № 5. На каждые 10 мл диагностикума добявляloT 1 мл раствора № 6 и смешивают.

Готовый диягностикум хранят в холодильнике гри температуре 4 — 10 С. Срок годности препарата 5лет.

Предлагаемый! способ обеспечивает выспкую спс-цифичность диап!остикумов и позвол,lcT повысить срок годности их.

Формула изобретения !. Способ получения эритроцитарных диагно тикумов путем формалинизации, танизяции и сенсибилизации эритроцитов высокояктипиым специфическим белковым сенситином с последующим осаждениеM сенсибилизированных эритроцитов, отмыванием и консервацией формалином, отличающийся тем, что, с целью повьцнения специфичности диагностикума, непосредственно после сенсибили"..3öèè специфическим сенситином осущсствля!от дополнительную сенсибилизацию эритроцитов неспецифическим белком.

2. Способ по п. I, отличаюшийся тем, 40 что сенсибилизацию неспецифическим белком проводят при температуре 4 — 8 С в течение !8--20 ч.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сенсибилизированные эритроциты консервируют 4%-нь1м раствором формалина в

45 фосфятно-буферном растворе.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе !. Ст. Басовой Н. Н. и др. Эритроцитярный и-диагностикум и его применение в реак50 ции пассивной геMd!Të!îòèíàöHH при оркпнном тифе — <:Лктуяльные вопросы эпидемиологии». М., 1967, с. 57.