Способ получения несимметричных 6,7-пептидил-протогеминов 1х

 

Р

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ . К: АВТОРСКОМУ СВ ВИЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистических

Республик ю71 7039 (g1 ) 2 =,l ь (б1) Дополнительное,к авт; свид-ву (22} Заявлено 31,0378 (21) 2606603/23-04

% сприсоедииеииемэаявкищ—

С 07 С 103/52

Государственный комитет

СССР по делам нмбретеиий и .открытий (23} При,эритет—

Опубликовано 250280. Бюллетень ¹ 7

Дата опубликОваиия описания 27,0280 (53) УДК 547 ° 964. .4.07(088.8) С. Молокоедов, В. ь. Радюхин, E. И. филиппович и Р. П. Евстигнеева (72} Авторы изобретения

Московский ордена Трудового КрасногО Знамени институт тонкой химической технологии им. м. В. Ломоносова (71 } Заявитель (54) СПОСОБ НОЛУЧЕИИЯ ЯЕСИММЕТРИЧНЬЖ 6,7-ПЕПТИЦИЛ «ПРОТОГЕМ ИВОВ 1Х

Изобретение относится к новому ,способу получения несимметрнчКыХ, 6,7-пеитидил-протогеминов Ц(, соединений, обладающих биологичеСКОЙ активностью, которые могут найти йри"мененне в медицине .

В литературе описаны способы й6. лучеиия соединений, близких по структуре к заявляемым, — несимметричных производных мезогемина 11Õ X(1) и (2), .путем конденсации активированных производных меэогемина 1Х с аминокислотами; Конденсацию проводят или с "использованием сульфангидридов мезогемина 1Х (1), или карбодиимидным методом.

Основным недостатком обоих методов является неприменимость их к щи родным желе эопорфиринам — прото20 гемину lX из-эа наличия в молекуле последних реакционноспособных винильных групп. В обоих способах отсутствует строгая направленность процесса, что приводит. к образованию большого количества балластных соединеиий и затрудняет очистку целевого продукта.

Кроме того, выход целевого продукта, полученного по одному из этих мето- дов, невысок и составляет 38%.

Известен способ получения несимметричных 6,7-пептидил-протогеминов

1Х (3), а именно: 6 (7) -бенэилового эфира (Е -лейцилгистидилаланил-N —-бенэилоксикарбонилливилглицил-S-бензилцистеинил)-7(б)-беизоксигемина, заключающийся в том, что 6(7)-бензоксипротогемин TX.ïîäýåðãàþò взаимодействию с этилхлорформиатом, полученный смешанный ангидрид в среде диметилформамида при температуре от -10 C до О С вводят во взаимоd действие с N -свободным гексапептидом. После хроматографической очист-. ки получают целевой продукт с выходом 26,4%.

К недостатку данного способа следует отнести низкий выход .целевого продукта.

Целью данного изобретения является увеличение выхода целевого продукта и получение новых проиэводнйх несимметричных 6(7)-пептидил-протогеминов 1Х.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения несим717039 метричных 6, 7- пептидилпротогеминов

Я общей формулы в- 112 014

Вв1 2, I

Е8Е 31: — 0CHgdSHS Gea-Eltt — LsS -ONe

E )Р1

>ае: I «-NlS-А1а-ж-I -I -As-ÎÂ I;

Зь1

-Ata-I eu-No.-рйе-At.a- СФ-O 8at. )

Z В аt

1 I или Б1. -Leè-HI)-А1а-1лФ- Ич-I!IIs-033zt 1

Вь1

-Kin — Ьeè-А(а — РИе- А1а- бэба — Овь1 ) .Яз1 Z

ВŠ— ОСНеСеН,;- еи-НИ-1.vs-îìe -):-заключающимся в том, что 6 (7)-бенз" оксипротогемин lХ формулы б С би=бКе цД Яке), СОВ 1 О 01 1 ÿàå —.ОСНгбеиз ) В1-ОН, или Rl-бНУ е

И1-ОЮНА Оев5 )(. подвергают взаимодействию с .этилхлорформиатом, полученный при этом смешанный ангидрид подвергают взаимо действию с пентафторфенолом и затем полученный активированный пентафторфениловый эфир протогемина 1Х конденс руют с N — - свободным гексапеп М тидож .в 2,5-3 молярном растворе мочевины в диметилформамиде при 40 45 а в присутствии основания.

Данный способ позволяет получить несимметричные производнйе протогемина 1Х с двумя различными функционалъными группами с высоким выходом (-604) .

Отличительным признаком способа является применение в качестве про межуточного,активированного агента пентафторфенилового эфира монозамещенного протогемина 1Х. Это производное, не применявшееся ранее в описываемом классе соединений, ак5 тивно и термодинамически устойчиво длительное время, достаточное для прохождения реакции. Пентафторфениловый эфир протогемина lX получают методом смешанных ангидридов, Кроме того, для достижения полноты реак- ции и увеличения скорости процесса используют повышение температуры реакции до 40-45 С, а в реакционную массу добавляют мочевину (3 М раст вор), которая уменьшает стерические

, затруднения в пептиде и увеличивает доступность реагирующей аминогруппы, Выход 6(7)-бензилового эфира

fN -лейцилгистидилаланил-N -бензил Й а оксикарбониллизилглицил-Я-бенэилцис, 20 теинил) -7 (6 ) -бен з оксигемина по этому методу составляет 60, 4 Ъ.

Пример 1, К раствору 0,97 г б (7) -бензилового эфира протогемина

1Х в 10 мл хлористого метилена до25 бавляют 0,6 мл триэтиламина и 0i 15мл этилхлорформиата, перемешивают 10мин при 20 С и вносят 0,355 г пентафторфенола. Реакционную массу ПеремешИвают 1 ч IIpH 20 C, Растворитель уда. ЗО ляют в вакууме. Остаток добавляют к . раствору 1,70 г трифторацетата бензилвового эфира лейцилгистидйлаланил"

-N †бЕнэилоКСИкарбониллизилглицил-

-Я-бензилцистеина в 10 мл диметилформамида, содержащего 0,42 мл триэтилaxleIIa и 1,8 г мочевины. Перемешивают

8 ч при 40 С Растворитель удаляют в вакууме, Остатбк чистят на колонке . с окисью алюминия П степени активнос4 ти,. элюируя смесью хлорофоРм;метанол .

{9 2:0,8). ВыхОд 1,3 Г (60,4Ъ)

R 0,54 (хроматогоайия в тонком слое кремниевой кислоты в системе хлором форм — метанол 9:1), 1 .пл. 136-139 С. йминокислотный анализ гидролизата:

А1а 1,05 (1) у 3, еи,0,90 (1) f Lys 1,00 (1) „ His 1,04 (1); Gly 1,015 (1 ).

Пример 2. К раствору 0,223, г

6(7)-метилового эфира (N -лейцил-N

-бензилгистидил-N -бензилоксикарбониллизил)-протогемина 1Х в 6 мл хлористого метилена при -10 С и перемешивании добавляют 0,11 мл триэтиламина и 0 04 мл этилхлорформиата. Переt о мешивают 20 мин при 10 С, 10 мин

55 при О С и вносят 0,143 r Пентафторфенола. Реакционну0:массу перемЕшиС вают 1,5 при 10 С. Растворитель удаляют в вакууме. Остаток добавляют к раствору. 0,107 r трифторацетата метиц лового эфира аланиллейцилаланидфенйл- аланилаланил-Ятбензилцистеина в 4 мл пиметилформамида, содержащему

0 018 мл триэтиламина и 0,94 r моче-. и о .вины. Перемешивают 18 ч при 20 С, 6 ч при 40 С и 24 ч при 20 С, Осадок

717039

ЙР СНе СНЗ

СН СНе

OR1

Ебе Н ;ОСНеСеНЕ ° Я1-Ои> илиНЬ ОН) е

Rj ОСне еНе >

НЗС

СНе!

Сне ю Не )е (не)е

Составитель В. Волкова

Редактор С. Лазарева Техред Й.Петко Корректор Г. Решетник

Заказ 9751/28 Тираж 495 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 отделяют. Фильтрат выпивают в 50 мл воды и экстрагируют хлороформом (2х20 мл) . Экстракт сушат безводным сульфатом натрия ° Растворитель удаляют в вакууме. Остаток очищают на, колонке с окисью алюминия Щ степени активности, элюируя; смесью хлороформ-метанол (15:1),, и затем на колонке с силикагелем, элюируя смесью хлороформ-метанол (10:1) . Выход 0,160 г (63,1 Ъ). Rf 0,7 (тонкослойная хроматография на силуфоле в системе хлороформ-метанол 8:2), 0,62 (тонкослойная хроматография на алуфоле в системе хлороформ-метанол .

50:1) . ,С,уе Н-ье Б1е О+у ГеС1 1,5Н20.

Найдено, Ъ: С 3?,58; Н 6,87, N 11,68, Fe 2,91.

Вычислено, Ъ: С 62,57, Н 6,48, N 1l,33, Fe 2,82.йминокислотный анализ гидролизатае

Ala 2,80 (3); Leu 2,36 (2); Phe 0,84 (1); Lys 0,92 (1) .

Формула изобретения

Сйособ получения несимметричнЫХ

6,7-пептидил-протогеминов 1Х общей формулы

СН-СН, СН, Соз, С»е

B2t Z

I еде Я1: — ОСне Сене,-ахеи- н1е — E ee- Оке;

2 Bzt

1 I

ЯЕ: 1 ЕМ- Hte -AtIt- t,óe — etII- бее — ОЗ2 ;

В2t

-,АИ вЂ” t eII-А! а-Phe-Ata- CIIe- OBat .)

В21 1 I ,ила Rt I-ьеи-ни-А1а — Lvs- 61з-Сее -OBIet

Bzt

I. .А1а — Leu-Ata — Рке-Ata-См- ОВъВ

32! Z

Иq t — ОСНЕСЕНŠ— Se»- ate — ЬеŠ— ОМЕ

1 l йутем взаимодействия 6 (7) -бензоксипротогемина Q формулы

;с этилхлорформиатом с образованием

2О смешанного ангидрида и применение з реакции конденсации с Ж -свободн, е гексапептидом в среде диметилформами а в присутствии основания, о т я йа ю шийся тем„ что, с целью, повышения выхода целевого продукта и расширения ассортимента целевых продуктов, смешанный ангидрид подвергают взаимодействию с пентафторфенолом и полученный пентафторфенило®О вый эфир монозамещеенного протогемина

ГХ конденсируют с N -свободным гексапептидом в 2,5-3 молярном растворе мочевины при 40-45 С.

Источники информации, принятые во внимание .при экспертизе

°, 1. Chang С. K Traylor Т. G; Neighboring Group Effect in НевеCarbon Monoxide Bonding, 3. Amer.

hem. Soc. 1973 95, с: 8475 ® 8477.

2. Warme P. K. и др. Heme Sulfu-, ric anhydrides. 1. Synthesis and

Reactions of тезоИеве suIfuric anhyd45 rids, Biochemistry, 1970, 9, Е» 1599-1606.

3. Молокоедов A. С. и др. Синтез и свойства гистидиысодержащйее пента50 координационных комплексов гемина.

Ж)Х, 1977 g вs, . 55, . сc. 1165-1172.