Способ получения пентапептидов или их эфиров или их амидов или их солей

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБР ТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 1509.77 (21) 252179 7/23-04 (5 t ) M. Ka

3 (23) Приоритет — (32) 16 . 0 9 . 7 6 (31) 30-1350 (33) BHP

С 07 С 103/52 //

А 61 К 37/02

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открыти й

Опубликовано 15.10.80Бкзллетень ¹ 38

Дата опубликования описания 153.0.80 (53) УДК 547.964. .4.07 (088.8) Иностранцы

Шандор Байюс, Андраш Ронай, Иожеф Секели, Ласло Граф и:Хужа тйохай (BHP) (72) Авторы изобретения

Иностранное предприятие

"Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр PT" (BHP) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕНТАПЕПТИДОВ

ИЛИ ИХ ЭФИРОВ, ИЛИ ИХ АМИДОВ, ИЛИ ИХ СОЛЕЙ

Tyr-А-Gly-Phe-В-Х-Y

Изобретение относится к способу получения новых пентапептидов или их солей, обладающих биологической активностью, которые могут найти 5 применение в медицине.

В пептидной химии широко известен способ получения пептидов путем постепенного наращивания пептидной цепи конденсацией аминокислот или пептидных фрагментов с использованием различных методов, например карбодиимидного, метода активированных эфиров и т.п. (11.

Цель изобретения — получение с rioмощью известных методов пептидной

15 химии новых пентапептидов или их со лей, обладающих интересными фармако-логическими свойствами.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения пентапептидов формулы1 где А - G-Alà, 0- Met 0-NLeu

В - N-Leu, изощрен, Pro, Х вЂ” О, NH, Y - Н, Me, Et, или их эфиров или их амидов, или их солей, заключающийся в том, что норлейцин, изолейцин или пролин, или их сложноэфирные, или амидные производные конденсируют с следующими, имеющими у N-конца отщепляемые защитные группы аминокислотами и/или пептидными фрагментами с последующим снятием защитных групп и выделением целевого продукта в виде эфира, амида, соли или кислоты.

В качестве предпочтительного варианта способа конденсацию проводят или карбамидным методом, или с использованием метода активированных эфиров.

В тексте использованы следующие сокращения.

Трехбуквенные сокращения аминокислот следующие:

А!а — аланин

Gly — глицин

3 le — изолейцин

Leu — лейцин

Met †метионин

Phе — фенилаланил

Pro — пролин

Tyr — тирозин

N1е — норлейцин-2-аминогексановая кислота.

772481

9:1

12:20:б:11

Сокращение само по себе означает аминокислоту в L-конфигурации (за исключением неактивного Glу), в то время как в случае 0-аминокислоты это будет отмечаться каждый раз, например, D-Иеt — D-метионин.

Z — бензилоксикарбонил-карбобензокси, Вос — трет-бутилоксикарбонил, OTCP — пентахлорфенокси, ОNP — 4-нитрофенокси, 10

Et — этил, Met — метил.

Ry значения были определены при помощи тонкослойной хроматографии на силикагеле в следующих системах растворителей: 15

Хлороформ.метанол

Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода 240:30:6:11

Этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода

Этилацетат-пиридин-уксусная кис25 лота-вода 60:20:7:11

Этилацетат-пири,дин-уксусная кислота-вода 30:20:6:11

Растворы упаривают при пониженном

О давлении на водяной бане при 40 С.

Аминокислотные анализы пептидов проводят при помощи анализатора типа

T1С-5АМ, после полного гидроциза (6N НС1, 24 ч, 110 C).

Пример 1. Получение Е--.èðîзил-D-àëàíèí-глицил-L фенилаланил-L-норлейцина.

Р,. Метиловый эфир бензилоксикарбонил-2-фенилаланил-!,-норлейцина.

К раствору 48 г (10 ммолей),113

Z-Phe-OTCP и 2 г (11 ммолей)

H-Nle-ОМе НСl в 10 мл пиридина добавляют 1,2 (11 ммолей) N-метилморфолина и смесь оставляют на 3 ч. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в 50 мл этилацетата и воды (1:1), органическую фазу отделяют и промывают 1 н.соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток промывают эфиром, фильтруют, промывают эфиром и сушат. 50

Выход 3,6 r (85Ъ),т.пл. 123-124 С, Rf 0,89-0,93.

Б. Метиловый эфир бензилоксикарбонил-глицил-L-фенилаланил-L-норлейцина. 55

5,55 г (13 ммолей) Z-Phe-Nl e-О 1е (пример 1A) растворяют в 100 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (R< 0,23-0,25) катализатор .отфильтровйвают, раствор упаривают и остаток растворяют в 25 мл пиридина. После добавления 4,66 г (12 ммолей) Z-Cly-OTCP смесь оставляют на

3 ч. Реакционную смесь упаривают, 65

Выход 0,47 г (70Ъ), Аминокислотный анализ:

Ala = 1,02, Nle = 1,02

Phe = 1 (для сравнения

0,19-0,23.

Gly = 1,0;

Tyr = 0 98;

). остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат.

Выход 5,28 г (91Ъ), т.пл. 110112 С,R 0,30-0,90.

B. Метиловый эфир бензилоксикарбонил-С-тирозил-D-аланил-глицин-L-фенилаланил-L-норлейцина.

1,92 г(4 ммолей)Š— С1у — Phe-И1е- ОМе. (пример 1Б) растворяют в 30 мл метаноле и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (R 0,10-0,20) катализатор от2 фильтровйвают, раствор упаривают и остаток растворяют в 8 мл пиридина.

После добавления 1,6 r (4 ммолей)

Z-D-A1à — OÒÑÐ смесь оставляют на 3 ч.

Реакционную маасу упаривают, остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат. Полученный продукт (R г 0,67-0,70) растворяют в

50 мл смеси метанол-вода-диметилформамид (1:1:1) H гидрируют в присутс-.âèè палладиевого катализатора.

В конце реакции (R5 0,24-0,29) катализатор фильтруют, раствор упаривают и остаток растворяют в 8 мл пиридина. После добавление 1,75 г (3,5 ммолей) Z-Tyг-OTCP смесь оставляют на 5 ч, упаривают, остаток растворяют в 30 мл этилацетата, промывают водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают, Остаток растворяют в смеси эфира и н-гептана (1:1), фильтруют, промывают водой, смесью (1:1) и сушат.

Выход 2,0 г (80Ъ), т.пл. 195 С (сморщивается при 190 С), R 0,73о 3

0,78.

Г. L-Тирозил — D-аланил-глицин-L-фенилаланил-L-норлейцин.

1,15 г (1,6 ммолей)

Z"Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Nle-ОИе (пример

1В) суспендируют в смеси 4 мл метанола и 2 мл ацетона, омыляют 0,5 н. гидроокисью натрия в присутствии тимолфталеина в качестве индикатора.

Когда поглощение щелочи замедляется, смесь разбавляют 10 мл воды и экстрагируют этилацетатом (3 5 мл).

Этилацетатный слой отделяют, упаривают, получают 0,3 г (26Ъ) защищенного эфира пентапептида. Водную фазу подкисляют 0,5 н. серной кислотой, продукт, выпавший в осадок (R< 0,250,35), суспендируют в 50 мл 80Ъ-ной уксусной кислоты и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

В процессе реакции продукт растворяется. Катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и остаток растворяют в 4 мл холодной воды. Полученное кристаллическое вещество фильтруют, промыва.от холодной водой и сушат.

77?481

Пример 2. Получение гидрохлорида метилового эфира L-тирозил-D-аланил-глицил-L-Фенилаланил-L †íîðлейцина.

0,36 г (0,5 ммолей)

g - T y r - 0- Я l а - G 1 y - Рл е-O lie (пример 1В ) суспендируют в 30 мл 80оо--ной уксус5 ной кислоты и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и остаток растворяют в 1 мл 1 н. метанольной соляной кислоты и затем разбавляют эйиоом. Выпавший в осадок продукт фипьтруют, промывают эфиром и сушат. сушат.

Выход 0,3 г (93Ъ) конечного гидро- 15 хлорида пентапептидного эфира;

R Z 0,55-О,б0.

Пример 3. Получение L-тирозил-0-метионил-глицин-L-фенилаланил— L-норлейцина. 26

1, 8 г (3, 7 ммолей)

Z-Gly-Phe-Nle-ОМе (пример 1Б) растворяют в 30 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (Rq 0,100,20) катализатор фильтруют и раствор упаривают. Остаток растворяют в 4 мл пиридина. Затем добавляют

1,56 г (3,65 ммолей) Вос- D-Net ОТСР и раствор оставляют на 5 ч. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют со смесью эфира и и-гептана (1:1), фильтруют, промывают указанной смесью и сушат. Полученный таким образом продукт (R - 0,70-0,75) оставг ляют стоять в течейие 30 мин с 5 мл

2 н. соляной кислоты в этилацетате, затем разбавляют Н-råïòàíîì, остаток отфильтровыва.от, промывают Н-гептаном, сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный продукт gQ (1, 5 г; R О, 17-0, 27) суспендируют в смеси 2 мл пиридина и 2 мл диметилформамида. После добавления 1, б r (3 ммолей) Вос-Туг-OTCP и 0,7 r (б ммолей) Н-метилморфолина смесь взбалтывают до тех пор, пока добав,ленные вещества не растворятся, и затем оставляют стоять в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и разбавляют 30 мл этилацетата и 30 мл 0,5 н. серной кислоты. Органическую фазу отделя.ют, промывают 0,5 н. серной кислотой и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в

5 мл ацетона и промывают 1 н. гид- 55 роокисью натрия в присутствии тимолфталеина в качестве индикатора.

В конце реакции раствор подкисляют

0,5 и. серной кислотои и взбалтывают с этилацетатом. Зтилацетатную 60

Фазу упаривают и затем добавляют к остатку 10 мл 2н. соляной кислоты в этилацетате и смесь перемешивают.

Через 30 мин полученную суспензию разбавляют 10 мл воды и водную Фазу 6 нейтрализуют N-метилморфолином. При охлаждении выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывают, промывают холодной водой и сушат.

Выход 1,13 r (60 .) пентапептида, R y 0,3-0,4. Аминокислотный анализ:

Gly = 1,0; Met = 0,98; Nle = 1,0, Tyr = 0,96; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 4. Получение (.-тирозил-0-аланил-глицил-L-фенилаланил— L-изолейцина.

А. Глицил-L-фенилаланил-L-изолейцин.

1,95 r (7 ммолей) Í-Phe-3 1е-ОН суспендируют в 10 мл пиридина, затем добавляют 0,98 г (7 ммолей) триэтиламина и 2,72 r (7 ммолей) Z-Gly — OTCP.

Смесь перемешивают до полного растворения, добавленные вещества оставляот стоять на ночь. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в

50 мл этилацетата и добавляют 0,5 н. серную кислоту до рН водной фазы 2-3.

Органическую фазу отделяют, промывают водой, затем N-бензилоксикарбонилпептид экстрагируют 5Ъ-ным раствором кислого карбоната натрия (3 + ?О мл), объединенные экстракты подкисляют

0,5 н. серной кислотой, выпавший в осадок пептид экстрагируют этилацетатом и раствор этилацетата упаривают.

Остаток !R 0,5-0,6) растворяют в

60 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

Катализатор отфильтровывают, промывают уксусной кислотой, Фильтрат соединяют с промывной жидкостью и упаривают. Остаток. растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия.

Выход 1,87 г (80Ъ) трипептида;

R 0,35-0 45.

Б. 0-Аланил-глицил-L-фенилаланил-L-изслейцин.

1,68 г (5 ммолей) Н вЂ” Glу-Phe-3 lе-OH (пример 4Б) суспендируют в 5 мл пиридина, затем добавляют 0,7 мл (5 ммолей) триэтиламина и 2,02 г (5 ммолей) Е-D-Аlа-ОТСР, перемешивают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают так же, как описано в примере 4А. Полученный г остаток после упаривания (Ry 0,500,55) растворяют в 50 мл 804-ной уксусной кислоты и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

Катализатор отфильтровывают и промывают уксусной кислотой. Растворы уксусной кислоты объединяют, упаривают, обрабатывают эфиром„ фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия.

Выход 1,7 r (84%) тетрапептида, R@ 0, 10-0, 15.

В. L-Тирозил-D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L èзолейцин.

772481

К суспензии 1,22 г (3 ммоля)

Н-О-Ala-Gló-Phe-3 1е-ОН (пример 4Б) н пиридине добавляют 0>42 мл(3 ммоля) триэтиламина и 1,48 r (3 ммоля)

Z-Tyr-OTCP, перемешивают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь, обрабатывают аналогично примеру 4А.

Полученный при упаринании остаток (Rg 0,55-0,60) растворяют в 50 мл

80Ъ-ной уксусной кислоты и гидрируют н присутствии палладиевого катализатора. Катализатор отфильтровывают и промывают уксусной кислотой. Растворы уксусной кислоты объединяют, упаринают, растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме н присутствии гидроокиси калия.

Выход 1,4 r (80Ъ) указанного в названии пентапептида, R g 0,08-0,12.

Аминокислотный анализ: 61у,= 1,0;

А!а = 1,0; Nle = 1,02; Tyr = 0,95;

Phe = 1 (для сравнения).

Пример 5. Получение 1-тирозил- D-аланил-глицил-L-фенилаланил- -пролина.

А. Глицил-L-фенилаланил-L-пролин.

К суспензий 5,25 г (20 ммолей)

Н-Phe-Pro-OÍ в 20 мл пиридина добавляют 2,8 мл (20 ммолей) триэтиламина и 7,77 г (20 ммолей) Z-Gly-ОТСР, перемешивают до полного растворения добанленных"веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают аналогично приме у 4А. Продукт, полученный при упаринании в виде осадка (К; 0,5-0,6), растворяют в 100 мл метанола, гидрируют н присутствии палладиевого катализатора. По окончании реакции катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, затем метанольные растворы объединяют и упаринают. Остаток кристаллизуют из эфира, фильтруют, промывают эфиром,и сушат.

Выход 5,43 r (85Ъ) указанного трипептида, Ry 00,31-0,38.

Б. D — Аланил-глицил- L-фенилаланил-1 -пролин.

3,2 r (10 ммолей) Н-G 1 y-Phe-Pro-ОН (пример 5А) суспендируют н 10 мл пиридина, затем добавляют 1,4 мл (10 ммолей) триэтиламина и 4,03 r (10 ммолей) Z-D- Ala-OTCP и перемеши- вают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь.

Реакционную смесь обрабатывают. аналогично примеру 4А. Полученный при з упаринании остаток (Р 0,42-0,53) растворяют в 80 мл метанола и гидрируют и присутстнии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, затем метанольные растворы объединяют и упаривают. Остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат.

Выход 3,2 г (82Ъ) указанного в 4 названии тетрапептида, R< 0,07-0, 11.

Выход 4,4 r (80Ъ) указанного в

15 названии защищенного пентапептида, Rg 0,3-0,4.

Г. L-Тирозил-D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин.

Раствор 2 06 г (3 моля)

;Щ Z-Tyr-D-А1а-С1у-Phe-ОН(пример 5В) н смеси 40 мл метанола и 10 мл диметилформамида гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце

d0

В. Бензилоксикарбонил-L-тирозил— D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин.

3,12 r (8 ммолей)

Н-О-Ala-Gly-Phe-ОН (пример 5Б) суспендируют в 15 ми пиридина, добавляют 1,12 мл (8 ммолей) триэтиламина и 3,95 г (8 ммолей) 2-Tyr-OTCP и.перемешивают до полного растворения добавленных веществ, оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 4А. Продукт, полученный в виде остатка при упаривании, растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром и сушат. реакции катализатор отфильтровывают., промывают смесью метанола и диметилформамида 1:1, слитые вместе растворы упаривают, остаток растворяют в эфире, фильтруют, промывают эфиром, сушат, вновь растворяют в 4 мл этанола и осаждают зтилацетатом.

Выход 1,16 г (70Ъ) укаэанного в названии пентапептида; R 0,3-0,4.

Аминокислотный анализ: Pro = 1,02;

G ló = 1,0; А1а = 0,98", Tyr =. 1,0;

Phe = 1 (для сравнения).

Пример 6. Получение -тирозил- D-аланил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин-этиламида.

0,7 r (1 ммоль)

Z-Tyr-О-Ala-Gly-Phe-Pro-OH (пример

5B) растворяют в 2 мл диметилформамида, затем добавляют 0,1 r (1,24 ммолей) этиламиногидрохлорида, 0,17 мл (1,24 ммолей) триэтиламина и 0,21 r (1 ммоль) дициклогексилкарбодиимида.

Реакционную смесь оставляют на день, фильтруют, и разбавляют 30 мл этилацетата. Раствор промывают 0,5 н. серной кислотой, водой, 5Ъ-ным раствором кислого карбоната натрия и водой, затем сушат.и упаривают. После упаривания остаток (R 0,80-0,85) растворяют в 30 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают, раствор упаривают, остаток растирают с эфиром, фильтруют, промывают эфиром и сушат.

Выход 0,.43 г (0,75Ъ) указаиного в названии пентапептида; R< 0,34-0,44; ф

Пример 7. Получение L-тирозил-О-метионил-глицил-L-фенилаланил- -пралин-гидрохлорида.

0,96 r (3 ммоля) Н-Gly-Phe-Pro-OH (пример 5А) суспендируют в 5 мл пиридина, затем добавляют 0,42 мл (3 ммоля),триэтиламина и 1,27 мл

772481 (3 ммоля) Boo-D-Met-OTCP, перемешивают до полного растворения добавленных веществ и оставляют на ночь.

Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 4А. Затем 10 мл

2- н. соляной кислоты в этилацетате

5 выливают, на вещество, полученное в результате упаривания (R 0,30-0,35), 2 и смесь перемешивают. Через 30 мин реакционную смесь разбавляют н-гептаном, фильтруют, промывают н-гептаном и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный таким образом продукт (R 1 0,16-0,24) суспендируют в 5 мл пйридина, затем добавляют 0,84 мл (6 ммолей) триэтиламина и 1,32 r (2,5 ммолей) 15

Вос-Tyr-OPCT, перемешивают до полногo растворения добавленных веществ и оставляют на ночь. Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 4А. После упаривания осадок раст- 20 воряют в 10 мл 2н. соляной кислоты, этилацетате, фильтруют, промывают этилацетатом и сушат.

Выход 1,14 г (70%) гидрохлорида пентапептида; R 0,35-0,45. Амино- 5

4. кислотный анализ: Pro = 0,98;

Met = 0,95; Tyr =- 1,0; Phe = 1 (для сравнения).

П p II M e p 8. lloIIy eHIIe L-тирозил-D-норлейцил-глицил-L-фенилаланил-L-пролин-гидрохлорида.

Используя 0,96 r (3 ммоля)

Н-Glу-Phe-Pro-OH (пример 5А) в качестве исходного продукта, следуют методике, описанной в примере 7, с той разницей, что вместо 1,27 г

Boc-Met-OTCP применяют 1,06 г (3 ммоля) Вос-О-Nle-ONP.

Выход 1,18 г (75%) гидрохлорида пентапептида; Ry 0,35-0,45. Аминокислотный анализ: Pro = 1,0; Glу = 1,0 40

N le = 1,05; Tyr = 0,98; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 9. Получение L-тирозил-D-метионил-глицил-L-фенилаланил— L-пролин-этиламида. 45

A. Глнцил- L-фенилаланил- L-пролинв э тиламид-о к салат .

3,7 r (13 ммолей) Pro-NH-Et растворяют в 50 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции (R g 0,2-0,3) ъ катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, метанольные растворы упаривают и остаток растворяют в

10 мл диметилформамида. После добавления 3,9 r (13 ммолей) Z-Phe-OH

1,75 г (13 ммолей) 1-оксибензтриазола и 2,7 r (13 ммолей) дициклогексилкарбодиимида реакционную смесь оставляют на ночь и затем упаривают.

Остаток растворяют в 50 мл этилаце- 60 тата и затем промывают 5%-ным раствором кислого карбоната натрия, водой, 0,5 н. серной кислотой и вновь водой.

Органическую фазу сушат над сульфатом натрия И. упаривают. Полученный про- 65 дукт (Rg 0,63-0,68) растворяют в

50 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. Катализатор отфильтровывают и метанольный раствор упаривают. Остаток (Ry

0,1-0,2) растворяют в 10 мл пиридина, затем добавляют 2,09 r (10 ммолей)

Z-G1y-OTCP. Реакционную смесь оставляют на ночь, затем упаривают. Остаток после упаривания растворяют в

50 мл этилацетата, промывают 0,5 н. серной кислотой и органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в 50 мл метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора. В конце реакции катализатор отфильтровывают и раствор упаривают. Остаток после упаривания растворяют в смеси 2 мл этанола и 2 мл этилацетата, затем добавляют 0,9 г (10 ммолей) щавелевой кислоты и смесь разбавляют 50 мл этилацетата. Выпавший в осадок продукт фильтруют, промывают этилацетатом и сушат.

Выход 2,7 г (62Ъ) трипептидэтиламидоксалата; т.пл. 98-100 С;

R 0,4-0,5.

Б. L-Тирозил-0-метионил-глицил— L-фенилаланил-L-пролин-этиламид.

0,9 r (2 ммоля) трипептид этиламидоксалата (пример 9А) растворяют в 3 мл пиридина, затем добавляют

0,86 г (2 ммоля) Вос-0-Met-OTCP u

0,56 г (4 ммоля) триэтиламина. Реакционную смесь оставляют на ночь, упаривают, остаток растворяют в

30 мл этилацетата, промывают 0,5 н. серной кислотОй, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток (R 0,802

0,85) оставляют с 10 мл 3 н. серной кислоты в этилацетате, после 30 мин разбавляют 30 мл н-гептана, полученный осадок фильтру эт, промывают н-гептаном и сушат в вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный продукт растворяют в пиридине (5 мл) и добавляют 1,06 r (2 ммоля)

Вос-Туг-OTCP и 0,56 мл (4 ммоля) триэтиламина. Реакционную смесь остав1ляют на ночь, затем упаривают, растворяют в 50 мл этилацетата, промывают 0,5 н. серной кислотой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток (К у 00,85-0,90) растворяют в 3 мл и трифторуксусной кислоты и оставляют на 30 мин. Раствор упаривают и остаток растирают со смесью этилацетата и бензола (1:1). Полученный продукт растворяют в смеси 5 мл 10о-ного раствора карбоната натрия и 50 мл этилацетата. Водну о фазу встряхивают с этилацегатом (3 к 10 мл), объединенные этилацетатные фазы сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток после упаривания растирают со смесью н-гептана и этилацетата (1:1), осадок фильтруют, промывают этой же смесью, затем н-гептаном и сушат.

772481

Формула изобретения

Заказ 6740/75 Тираж 495 Подписное

ВНИИПИ

Филиал ПП Патент, r. ужгород, ул. Проектная, 4

Выход 1,02 r (80%) этиламида пентапептида; R g 0,45-0,55. Аминокислотл . ный анализ: P ro = 1, 0; G l у = 1, О, Met = 0,98, Tyr = 1,02; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 10. Получение L-тирозил-О-метионил-глицил-L-фенилаланил-1.-пролин-амин ацетатгидрата.

0,96 г (3 ммоля) Н-Glу-Phe-Pro-OH (пример 5А) суспендируют в 5 мл пиридина, затем добавляют 0,42 мл (3 ммоля) триэтиламина и. 1,27 г (3 ммоля)

Boc-D-Met-ОТСР и перемешивают до полного растворения добавленных веществ.

Реакционную смесь оставляют на ночь, обрабатывают аналогично стадии A примера 4. К остатку, полученному после упаривания, добавляют 10 мл 1 н. соляной кислоты в этилацетате (R 0,300,35), смесь перемешивают в течение

30 мин, затем разбавляют Н-гептаном, фильтруют, промывают н-гептаном и сушат в вакууме в присутствии гидрооки- си калия. Полученный продукт (R 0,164

0,24) суспендируют в 5 мл пиридина, добавляют 0,84 r (6 ммолей) триэтил- . амина и 1,32 r (2,5 ммолей)Вас-Туг-OTCP и перемешивают до полного растворения добавленных веществ.

Реакционную смесь оставляют на ночь, ее обрабатывают аналогично. примеру

4А. Остаток после упаривания растирают с Н-гептаном, фильтруют, промывают.н-гептаном и сушат. Полученный

Вос-Tyr-Иес-Gly-Phe-Pro-OH (R 0,604.

0,66) растворяют в 5 мл диметилформамида, добавляют 0,52 г (2,5 ммолей) дициклогексилкарбодиимида и 0,4 г (2,5 ммоля) 1-оксибензотриазол аммониевой соли (последнюю получают следующим образом: раствор 1-оксибензотриазола в концентрированной гидроокиси аммония (0,5 г/мл) разбавляют ацетоном, затем выпавшие кристаллы отфильтровывают, проьывают ацетоном и сушат). Реакционную смесь для амидирования оставляют на ночь, фильтруют, упаривают, остаток после упаривания растворяют в метиленхлориде, промывают 5%-ным раствором кислого карбоната натрия, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток после упаривания (R% 0,53-0,58) растворяют в 10 мл трифторуксусной кислоты, оставляют на 30 мин при комнатной-температуре, затем упаривают и остаток (R4 0,50-0,60) сушат в

1 вакууме в присутствии гидроокиси калия. Полученный продукт растворяют в 30-40 мл смеси хлороформа и н-бутанола (3:1) и 5-7 мм воды. Водную фазу нейтрализуют твердым кислым карбонатом натрия, экстрагируют указанной смесью хлороформа и н-бутаиола, затем объединенные экстракты упаривают и остаток растворяют в

1 н. .уксусной кислоте и лиофилизуют.

Выход 1,46 г указанного в названии продукта (содержание пептида

84%.), который обладает активностью примерно в пятьдесят раз выше, чем морфин. Аминокислотный анализ:

Pro = 1,0; Gly = Met = 1,0;

Tyr = 0,98; Phe = 1 (для сравнения).

Пример 11. Получение 1.-тирозил-D-аланил-глицил-L-фенилаланилI

-L-пролин-амида.

К раствору 2,06 г (3 ммоля)

Z-Tyr-Alà-D-Glу-Phe-Pro-ОН (пример

5В) в 5 мл диметилформамида, добавляют 0,46 г (3 ммоля) аммониевой соли 1-оксибензотриазола и 0,62 г (3 ммоля) дициклогексилкарбодиимида.

Реакционную смесь оставляют на ночь, фиксируют и упаривают. Остаток пос20 ле упаривания растворяют в метиленхлориде, промывают 5%-ным раствором кислого карбоната натрия, сушат над, сульфатом натрия и упаривают. Остаток после упаривания растворяют в

40-50 мп метанола и гидрируют в присутствии палладиевого катализатора.

В конце реакции (Rf 0 33-,0,38) катализатор отфильтровывают, раствор упаривают и остаток растирают с эфи30 ром

Выход 1, 2 г (70% ) указанного в названии продукта. Аминокислотный анализ: Pro = l,0; Аlа = 1,0;

Tyr = 0,97; Phe = 1 (для сравнения).

Способ получения пентапептидов фор40 формулы I

Tyr-А-Gly-Phe-В-Х-У, где А - D-Ala, О-NLeu, D-Met, В - Й-Leu, vaoLeu, Pro, Х - О, NH, 45 или их эфиров, или их амидов, или их солей, отличающийся тем, что норлейцин, изолейцин или пролин или их сложноэфирные или амидные производные конденсируют с следующими, имеющими у й-конца отщепляемые защитные группы аминокислотами и/или пептидными фрагментами с последующим снятием защитных групп

55 и выделением целевого продукта в виде эфира, амида, соли или кислоты.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ыредер Э,, Любке К. Пептиды. ч. Т, M., "Мир", 1967, с. 212