Способ фракционирования гуминовойкислоты

 

CoIo3 Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОИЖ©МУ С ОЗЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 16.07.79 (21) 2827146/30-15 (щ813249 (51)М. Кл.

G 01: N 31/08 с присоединением заявки H9—

ГосудврстаенныЯ комнтет

С С С Р но делам «зобретен«А н открыт«А (23) Приоритет—

Оиу 15.0381. Бюллетень Ж 10 (53) УДК 631. 423. 4 (088. 8) Дата опубликования описания 260331 (72) Авторь4 изобретения ко Рево)пй ии а я" тленный

Московский ордена Ленина,. ордена Октябрь и ордена Трудового Красного Знамени rocy университет им. N. В. Ломоносова

Pi) Заявитель на стеклянную колонку размером 2 50, заполненную декстрановым гелем. Ааализ проводят с использованием проточного спектрофотометра UV-Моп3to r-1 при длине волны 260 нм, блока управления кЕС-1, перистальтического насоса Р-3 фирмы"ЛКБ-прибор" (Upps«fа, 5кедеп. Швеция).

На чертеже изображены гельхроматограммы гуминовой кислоты чернозема при использовании в качестве элюентов трис-буфера (а), О, 5 М (б), 1М (в), 6М (г), .7N (д) растворов мо, чевины. !

5 На оси абсцисс обозначен элюционный объем (Ч) в мл, т. е. объем выходящего из гелевой колонки раствора фракционируемого вещества. По оси ординат отложена оптическая плотность

20 .(D) выходящего элюционного раствора вещества. Каждый элюционный пик гу-.. миновой кислоты на гельхроматограммах соответствует согласно теории гельхроматографии определенной гомоген25 ной молекулярно-массовой фракции. Высокомолекулярные фракции гуминовой кислоты 1 и 2 при фракционировании выходят из колонки при меньших объемах элюции. Относительно низкомоле30 кулярные фракции 3 соответствуют отИзобретение относится к сельскому хозяйству и микробиологической промышленности, в частности к выделению и определению состава и свойств гуминовых соединений, а именно к фракционированию гуминовой кислоты.

Известны способы фракционирования гуминовой кислоты, включающие выделение гуминовой кислоты из почвы, обработку элюентом и хроматографирование на декстрановом геле, в которых в качестве элюента используют

О, 1и. йаОН и трио-НСс буфер ) 1Ди Я °

Однако известные способы не позволяют достаточно качественно фракционировать гуминовую кислоту.

Цель изобретения - повьхаение качества фракционирования.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве элюента используют водный раствор мочевины с концентра .цией 6-7 М. Пример. Гуминовую кислоту получают экстракцией 0,1 н.йаОН после декальцинирования H 5I3g из вьаае. лоченного чернозема. Препарат высушивают в вакуум-эксикаторе в атмосАере Р Ое и хранят в бюксе. Гуминовую кислоту в количестве 5-10 мг растворяют в 2 мл элиента и наносят (54) СПОСОБ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ ГУМИНОВОЯ КИСЛОТЫ

813249 носительно большим объемам выхода вещества.

При элюции из гелевой колонки гуминовой кислоты трис-HCf. буФером наблюдается необратимая адсорбция вещества на матрице геля. Величина ад сорбции составляет 6,2Ъ. Гельхроматограмма (рис. а) размыта, в объеме (V)

20-60 мл выходит относительно мало вещества, отсутствует четкость разделения Фракций 1 и 2. Наблюдается размытый "хвост" в объеме 100-140 мл, 10 который относится к веществу низкомолекулярной Фракции 3, обратимо взаимодействующей с гелем.

Применение 6-7 М раствора мочевины, как элюента для Фракционирования, позволяет полностью исключить адсорбцию гуминовой кислоты на геле, что приводит к повышению точности гельхроматограФии. Молекулярно-массовые фракции кислоты выходят из колонки с малым разбавлением в виде узких элюционных пиков,рис. г, д). Исключение адсорбции на геле приводит по сравнению с известным способом к увеличению выхода фракции 1 и 2 (рис. а, r, д). Для Фракции 3 отсутствует размытый "хвост" вещества (по сравнению с известным способом). Величина оптической плотности снижается для этой фракции до нуля при V равном 83 мл, что говорит о том, что все вещество ЗО гуминовой кислоты вышло из гелевой колонки. 6-7 М растворы мочевины позволяют получить идентичные результаты Фракционирования гуминовой кислоты. Эти концентрации являются оптима- 35 льными, так как при концентрации меньше 6М часть гуминовой кислоты необратимо адсорбируется на геле,при концентрации мочевины 0,1 N до 5 М адсорбируется ат 43,2 до 1,3% гумино- 4О вой кислоты).

Как видно на примере использования 0,5 М и 1 М мочевины (рис. б, в), гельхроматограммы не очень четкие.

В объемах 100-140 мл обнаруживается растянутая эона вещества, относящаяся к фракции 3, а величина элюционных пиков Фракции 1 и 2 больше, чем в случае известного способа (рис. а), но меньше, чем в случае 6-7 М мочевины (рис. г, д). Это связано с адсорбцией гуминовой кислоты на геле при низких концентрациях мочевины.

Концентрация выше 7 М не целесообразна, так как образуется пересыценный раствор мочевины, из которого последняя выпадает в осадок за счет кристаллизации.

Использованием 6-7 Y. раствора мочевины в качестве растворителя и элюента удалось полностью избавиться от адсорбции препарата на матрице геля и получить достаточно высокую степень разрешения для молекулярно-массовых фракций гуминовых кислЬт. Отсутствие обратимой и необрати-, мой адсорбции гуминовых кислот на геле и хорошая эФфективность разделения молекулярных фракций при элюции 67 М мочевиной дает воэможность в дальнейшем исследовать все составные молекулярно-массовые фракции гуминовых кислот, их влияние на развитие микроорганизмов и почвенное плодородие.

Формула изобретения

Способ Фракционирования гуминовой кислоты, включающий выделение гуминовой кислотЫ из почвы, обработку элюентом и хроматограФирование на декстрановом геле, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения качества фракционирования, в качестве элюента используют водный раствор мочевины в концентрации 6-7 М.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Молекулярные веса, размеры и конфигурация частиц ГК. -"Почвоведение", 1971, М 11, с. 43-57.

2. Swift R. S., Posnee А. M. Gel

chromatograhy of htmiе ас1d",- J. 5oi1

Sci, 1971, Р 22, р. 237-249 (прототиг .

813249

Составитель T. Роденкова

Редактор Н. Щинко . Техред М. Контура . Корректор А. Гриценко

Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ- Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва-, 7(-ЗЬ, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 759/53

Филиал ППП "Патент", г . УжрорОд, Ул. Проектная, 4