Способ определения гуанидина и его солей

 

м 826240

Союэ Соеетскни

Соцналистнческнк

Реслублнк

Оп ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l ) Дополнительное к ввт. свнд-ву (22) Заявлено 16.08.79 (21) 2799301/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 30.04.81. Бюллетень Рй 16

Дата опубликования описания 05.05.81 (5! )М. Кл.

С 01N 33/48

ТооударстаеииыИ комитет ао делам изооретаиий и открытий (53) УДК 616.003. . 725(088.8 ) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГУАНИДИНА

И ЕГО СОЛЕЙ

Изобретение относится к биохимии и касается количественного определения гуанидина и его солей в производстве при их наработке для определения фармакопейных препаратов, содержащих гуанидиновуто группировку (сульгин, стрептомицин);

5 гуанидинокислот (например, аргинина) в смесях с другими аминокислотами, не содержащими гуанидиновой группировки, и в белковых гидролизатах, а также для количественного определения аргинина в белках.

Известен способ определения гуанидина и его солей путем обработки исследуемого образца реагентом, взаимодействующим с гуанидиновыми группами, с после15 дующей спектрофотометрией (1).

Однако известный способ длителен по времени (40 ч), недостаточно чувствителен и не обеспечивает высокой точности.

Цель- изобретения — повьппение точности способа. . Эта цель достигается reM, что способ определения гуанидина и его солей осуществляют путем обработки исследуемого образца реагеитом, взаимодействую цим с гуанидиновыми группами, с последующей спектрофотометрией, образец обрабатывают смесью 2,4-динитробензойной кислоты с олеумом при температуре 15-70 С, затем о реакционную спесь подщелачивают до рН

11-12 и спектрофотометрию ведут при

Х 530 нм.

Количественное определение гуанидинов осуществляют взаимодействием образца, содержащего гуанидин или замешенный гуанидин, с 2,4-динитробензойной кислотой в олеуме с последующим разбавлением реакционной массы водой, подщелачиванием щелочным агентом до рН 11-12 и спектрофотометрированием при длине волны

Х 530 нм. Количество определяемых гуапидинов находят по калибровочному графику, построенному на известных количествах гуанидинов, путем сравнения величины светопоглощения. Для каждого опрепеляемого гуанидина строят свой график.

Максимальная интенсивность окрашивани з 82 раствора достигается при рН 11-12. Эффективность и чувствительность предлагаемого способа определяют путем измерения оптической плотности раствора при известных количествах определяемых гуанидинов в образце.

Пример 1. Определение гуанидина гидрохлорида.

На аналитических весах взвешивают навески гуанидина гидрохлорида 0,5; 1,0;

2,0; 3,0 мг и помешают в стеклянные пробирки. В каждую пробирку прибавляют, по 20 мг 2,4-динитробензойной кислоты и 1 мл 22%-ного олеума. Смесь размешивают стеклянной палочкой 5-10 мин, охлаждают до 15-20 С и прибавляют 1 мл о дистиллированной воды. Затем медленно, по каплям, во избежание сильного перегрева, прибавляют 4 мл 30%-ного раствора ИаОН и доводят обьем до 15 мл

0,1н. 54аОН. Из раствора отбирают пипеткой 0,2 мл и прибавляют к 2,8 мл 0,1н раствора М àÎÍ. При подшелачивании раствора до рН 11-12 образуется интенсивное красное окращивание. Ойтическую плотность раствора определаюг на спект4 рофотометре в стеклянной кювете при длине волны 3- 530 нм. По.йолученным.данным строят график зависимости оптической плотности от количества гуанидина гидрохлорида в пробе.

Аналогично определяют аргинин, сульгин, стрепгомицин. Учитывая, однако тот факт, что молекулярный вес стрептомицина значительно больший, чем у.гуанидина (мол.вес. стрептомицина 1457), навески его увеличивают. Зля указанных соедине» ний получена также прямо, пропорциональная зависимость оптической плотности от величины навески в пробе.

Пример 2. Определение аргинина в смеси с аминокислотами.

На аналитических весах взвешивают

2,0 мг :аргинина и помещают в стеклянную пробирку, в другую пробирку помешают также 2,0 мг аргинина и по 2,0мг гистидина, серина, о -аланина, лизина, орнитина, аспарагиновой кислоты и валина. В обе пробирки прибавляют по 20 кг

2,4 динитробензойной кислоты и 1 мл

6240 4

22%-ного олеума, далее вес стадии ана: логичны примеру 1. Измеряют оптическую плотность проб с аргинином и пробы со смесью аминокислот. Оптическая плотность раствора с аргинином равна 0,53, а раствора со смесью аминокислот — 0,56.

Таким образом, ошибка составляет 6%.

Пример 3. Определение аргинина в белковом объекте.

Зля этого используют бычий сывороточный альбумин (БСА), в котором известно содержание аргинина, Берут навеску БСА 20,0 мг и определение проводят аналогично примеру 1. Оптическая плотность раствора равна 0,29, что соотвегcтвуе г 1, 1 мг арг ин ин а, н ай де ни ая по калибровочному графику для аргинина. Расчетное содержание аргинина в 20,0 мг

БСА равно 1,18 мг. Разница между истинным содержанием аргинина в навеске

БСА и определенным по предлагаемому способу составляет 7%.

Для определения аргинина в белке по .известным методам, с помощью гидролиза и хроматографии, ошибка допускается

510%, однако длительность определения по известному методу в 50 раз большая.

Предлагаемый способ значительно чувствительней известного и позволяет повысить точность определения.

Ф ор мула из обр е ген ия

Способ определения гуанидина и его солей путем обработки исследуемого образца реагентом, взаимодействующим с гуанидиновыми группами, с последующей спектрофотометрией, î r л и ч а ю ш и й40 с я тем, что, с целью повышения точности способа, образец обрабатывают смесью

2,4-динитробензойной кислоты с олеумом при 1 15-70 С, затем реакционную смесь о подщелачивают до рН 11-12 и спектро45 фотометрию ведут при = 530 нм.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. ревени Т. и Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М., Мир, 1976, 50 с. 187 1 94.

«»

Заказ 2512/67 Тираж 907

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

-113035,- М сква, Ж-35,- Раушскам-иаб;, д. -4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Подписное

Сос гавитель С. Малютина

Редактор -Е.. Дячинскай- -Техред М.Табакович Корректор Г. Решетник