Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в процессах получения полирибонуклеотидов с определенной последовательностью гетеро5. циклических оснований.

Пригодность препаратов индуцируемой бактериофагом Т4 поли(рибонуклеотид)t поли(рибонуклеотид) лигаэы (образующей АМФ) или рНК-лигаэы для целей полирибонуклеотидного синтеза определяется в первую очередь уровнем активности сопутствующей 3 - экзонук-! леаэы.

Известен способ получения PHK">+ газы, включающий разрушение клеток

Е.col i, инфицированных бактериофагом

Т4, осаждение нуклеиновых кислот стрептомидинсульфатом, фракционкроваиие белков сульфатом аммония, последо- 2() вательные хроматографкческке стадии иа традиционных хроматографических носителях (ЦЭАЭ-целлюлоза, сефадекс

G-,1Î0, гидроксилапатит, ДЭАЭ-сефадекс, А-25, QAE-сефадекс А-25) и заключительную аффинную хроматографию (1).

Известны и другие аналогичные способы получения PHK-лигаэы, незначительно отличающиеся от укаэанного способа и друг от друга порядком проведения и числом хроматографических стадий, а также выбором носителя для аффннной хроматографии (2) и (3).

Однако эти способы являются многостадийными, трудоемкими, выход фермента уменьшается пропорционально увеличению числа хроматографических стадиЯ, носители для аффинной хроматографии дороги и труднодоступны, к тому же они часто нестабильны и загрязняют препараты PHK-лигазы на последней стадии очистки. Кроме того, во всех случаях получения PHK -лигазы в качестве исходного материала использованы специально сконструирован р ные двойные мутанты бактериофага

ТЯ (l) и (2) или мутантный штамм

Е.со11 В (3) .

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ получения PHK-лигазы, пригодной для целей полирибонуклеотидного синтеза, заключающийся в инкубации клеток E.coll с бактеркофагом Т4 в течение 3 ч, разрушении клеток ультразвуковом с отделением экстракта и последующей обработке экстракта стрептомицинсульфатом и сульфатом аммония, после чего для выделения целевого продукта полученный фермент910762 ный раствор подвергают последователь- чества, определяемое снижением содерно проводимой хроматографии в услови- жания 3 -экзонуклеазы в целевом про1 ях буфера рН 7,5 0,1 на следующих дукте, что делает его более пригодным сорбентах в следующих условиях: для синтеза полирибонуклеотидов. а) хроматография на диэтиламино- Поставленная цель достигается споэтилцеллюлозе с элюцией 0,3 M раство-, собом получения РНК-лигазы, который ром ИаС2 в исходном буфере (в качест- заключается в том, что проводят инкуве исходного обычно используют о 01 М бацию клеток E.col i с бактериофагом трис-HCf буфер, содержащий 10 мМ 2- Т4 в течение 90ф20 мин, после чего меркаптоэтанола, рН 7,5); клетки разрушают ультразвуковом и отб) повторная хроматография получен10 деляют экстракт;для выделения целевоного на стадии а элюата, на диэтилами- ro продукта из экстракта последний ноэтилцеллюлозе в условиях того же обрабатывают стрептомицинсульфатом исходного буфера с элюцией линейным и сульфатом аммония и затем подвергаградиентом NaCi 0-0,3 M в исходном ют хроматографии в условиях буфера буфере; 15 рН 7,5+0,1, проводимой последовательно в) хроматография полученного на на диэтиламиноэтилцеллюлозе с элюцией стадии б, элюата на сшитом эпихлоргид- исходным буфером, содержащим 0,3 М рином диэтил-2-оксипропиламиноэтил- NaCk причем перед элюцией колонку декстране (QAE-сефадекс), в колонку O с сорбентом промывают 0,12+0,01 М которым предварительно вводят раствор20 pacTaopoM Naca в исходном буфере;

КСХ в линейном градиенте концентрации говторно вЂ” на диэтиламиноэтилцеллюлозе

0,175-0,4 М в исходном буфере с элю- с элюцией линейным градиентом NaCg от цией 1 М раствором КСf, (в качестве 0 до 0,3 М в исходном буфере; на исходного обычно используют 0,1 M сшитом эпихлоргидрином диэтил-2-окситрис-HCI. буфер, содержащий 10 мМ 2- 25 пропиламиноэтилдекстране (gAE-ñå4àмеркаптоэтанола, 0,1 мМ этилендиамин- декс A-25),в колонку с которым перед тетрауксусной кислоты, рН 7,5), полу- хроматографией предварительно вводят ченный на стадии в элюат подвергают раствор KCE в линейном градиенте конгель-фильтрации с помощью сшитого центрации от 0,1+0,01 до 0,4+0,01 М эпихлоргидрином декстрана (сефадек- в исходном буФере,с элюцией 1+0,01 щ, са G-100) в условиях буфера рН 7,5+ раствором КС1 и гель-Фильтрацией

0,1 (обычно 0,02 М трис-НСЙ буфер, со- полученного элюата с помощью сшитого держащий 0,1 И Кс1, 10 мМ 2-меркапто- эпихлоргидрином декстрана (сефадекс этанола, 0;1 мМ этилендиаминтетрауксус G-100} в условиях буфера рН 7,5+0,1. ной кислоты, рН 7,5); Обычно в качества исходного буфера заключительной стадией процесса 35 при хроматографии на ДЭЛЭ- целлюлозе является изоэлектрическое Фокусирова- в обоих случаях используют 0,01 М ние на инертном носителе биогеле P-2 трис-буфер, содержащий 10 мМ 2-меркапв присутствии амфолинов (LKB, Шве- тоэтанола, рН 7,5. ция) (4) . При хроматографии на ЦАЕ-сефадексе

После проведения этой стадии из 40 в качестве исходного буфера обычно

100 г биомассы получают 2,35 нмоль используют 0,01 М трис-НСР буфер, сопрепарата, РНК-лигазы, содержащего держащий 10 мМ 2-меркаптоэтанола

4, 38 ед. активности 3 -экзонуклеазы 0,1 мМ этилендиаминтетрауксусной на 1 пмоль- РНК-лигазы, что в усло- кислоты, рН 7,5. виях синтеза полирибонуклеотидов 45 При проведении гель-фильтрации соответствует в среднем разрыву од- обычно используют 0,02 М трис-HCE ной фосфодиэфирной связи на каждые буфер, содержащий 0,1 И КСЕ, 10 мМ

250 вновь образованных (методы оп- 2-меркаптоэтанола, 0,1 мМ этилендиределения активности тестируемых аминтетрауксусной кислоты, рН 7,5. ферментов и размерности единиц спи- 50 Существенными отличиями способа саны (4). являются: продолжительность инкубаНедостатком способа является нали- ции клеток Е.coll с бактериофагом чие в схеме очистки трудоемкого изо- Т4 90+20 мин, промывка колонки с электрического фокусирования, для ДЭАЭ-целлюлозой (первая хроматогравыполнения которого необходимы дефи- фическая стадия) перед элюцией

0 12+ цитные импортные амфолины, основные 0,01 М раствором NaC в исходном

55 потери PHK-лигазы (до 75% Фермента) буфере, а также предварительное связаны также с этой стадией. Кроме- введение в колонку с QAE-сефадексом о этот способ характеризуется перед хроматографией раствора KCX того, эт т о г анедостаточно высоким выходом целево- в измененном интервале линейиог рвЂ” го продукта, и наличием высокого 60 диента концентрации данной соли в уровня примесной 3 -экзонуклеазы.. исходном буфере от 0,1, д

/ 0 «+О 01 о 04

0,01

Целью изобретения является упроще- Таким образом, установление оптиние процесса получения РНК-лигазы, . мального времени инкубации Е.coll увеличение ее выхода и улучшение ка- 65 с бактериофагом Т4, введение дополни910762 тельной ступени при хроматографии фермента на ДЭАЭ-целлюлозе и снижение ионной силы раствора преформируемого градиента концентрации соли

KCf в колонне при хроматографии на

ЯАЕ-сефадексе А-25 позволяет иэ 100 r биомассы получать 10-12 нмолей PHK5 лигазы, содержащей 1-2 ед. активносI ти 3 -экэонуклеазы на 1 пмоль РНКлигазы, препарат PHK-лигазы получают необходимой степени чистоты при одновременном 4-кратном увеличении выхода фермента и снижении трудоемкости процесса (исключена стадия изоэлектрического фокусирования, на которсй происходят основные потери продукта). 15

На чертеже изображена хроматогра- I фия РНК-лигазы на ЯАЕ-сефадексе,где поглощение при 280 нм; 2 - радиоактивность (8- Н) AMP-лигазного ком3 плексау 3 - преформируемый градиент Щ ионной силы в колонке от 0,275 до

0,5 б вЂ” то же, от 0,11 до 0,41, заштрихован объединяемый для дальнейшей очистки пул PHK-лигазы.

Способ осуществляют следующим 25 образом.

PHK-лигазу выделяют из биомассы

E.coli, инфицированной бактериофагом

Т4 am Р 82, клетки разрушают ультразвуком, экстракт обрабатывают стрептомицином и сульфатом аммония, далее проводят фракционирование н хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, гельфильтрационно-ионообменную хроматографию Hà rrLAE-сефадексе А 25 и гельфильтрацию не сефадексе (3-100. Нри этом Е.coli инкубируют с фагом

90 мин + 20 мин (экспериментально установленное время, при котором в клетках Е.coli инфицированных бактериофагом Т4 am Р 82, на единицу РНК- 40 лигазы продуцируется минимальное количество 3 -экзонуклеазы), при фракциониронании на ДЭАЭ-целлюлозе перед элюцией РНК-лигазы колонку промывают раствором NaCI c ионной силой 45

0,13+0 Ol перед хроматографией на

JAR-сефадексе A-25 в колонку вводят раствор KCE в линейном градиенте ионной силы от 0,11+0,01 до О, 41+0,01 (экспериментально установленные значе-gp ния ионной силы растворов, обеспечивающие достижение максимальной степени очистки PHK-лигазы на соответствующей стадии при сохранении высокого (более

80%) выхода Фермента).

Пример 1. Все операции проводят при 0-4 С. 100 r биомассы Е.coli й, инфицированной бактериофагом Т4

am 9 82 (время инкубацни Е,со11 c фагом 90 мин), суспендируют в 200 мл буФера A (0,05 М трис-НСf, 1 ми глутати-60 он, рН 7,5). Суспенэию клеток обрабатывают ультразвуком (мощность 250-.

280 Вт, частота 20 кГц) 30 с, после е чего выдерживают 10 мин при 0 С,Цикл разрушения (30 с, ультразвук, 10 мин 65 оХлаждение) повторяют 12 раз, затем суспензию центрифугируют (центрифуга

9-21 Beckman, ротор ЭА-20, 20000 об/мин 1 ч) и осадок отбрасывают.

K 240 мл супернатанта, полученного на предыдущей стадии, добавляют 560 mr буфера А и по каплям при непрерывном перемешинании на магнитной мешалке

60 мл 10%-ного стрептомицинсульфата, приготовленного на 0,5 М трнс-НСЯ буфере, рН 7,5 ° Смесь выдерживают 1 ч и затем центрифугируют (центрифуга

8-21, ротор 0а-14, 14000 об/r:rrr, 30 мин) . Осадок собирают и замораживают (далее из него может быть выделена полинуклеотидкиназа,, К 805 мл супернатанта, полученного на предыдущей стадии, добавляют по порциям при непрерывном перемешннании на магнитной мешалке в течение

1 ч 132 г сульфата аммония (до 30% от насыщения при О С) . pH pacer opa при добанлении сульфата аммония контролируют универсальной индикаторной бумагой Реагент и по мере необходимости подтитровынают 0,2 М

NaOH до рН 7-7,5. Раствор оставляют на 24 ч для Формирования осадка и затем центрифугируют (центрифуга

6-21, ротор GA-14, 14000 об/мин, 30 мин) . Осадок отбрасывают, а к

870 мл супернатанта добавляют 129 г сульфата аммония (до 55% от насыщения при ООС) как и в предыдущем случае.

Сформировавшийся в течение 24 ч осадок отделяют центрнфугированием (центрифуга G-21, ротор GA-14

14000 об/мин, 30 мнн), растворяют в 100 мл буфера Б (0,01 М тряс-НСХ, 10 мМ 2-меркаптоэтанол, рН 7,5), содержащего NaCE н концентрации 0,1 М, Раствор переносят н целлофановый диализный мешок и диализуют протин

2 л буфера Б в течение 24 .ч.

Отдиализованный препарат PHK-лигаэы (объем 120 мл) наносят на колонку (2,6х25 см) с ДЭАЭ-целлюлозой ДЕ-52, уравновешенную буфером Б. Колонку промь1вают последовательно со скоростью

50 мл/ч 100 мл буфера Б н 300 мл буфера Б, содержащего NaCZ н концентрации 0,12 М (0,12 М NaCК н буфере Б и числе прочих белков элюируется ДНКлигаэа). РНК-лнгазу далее элюируют аналогичным буфером, содержащим NaC 1 н концентрации 0,3 М. Скорость элюцич

50 мл/ч.

Фракции объемом 12,5 мл собирают на коллекторе, измеряют в них оптическую плотность при 280 нм и содержавЂ” ние РНК"лигазы по образованию кнслотонерастноримого (8- H) ° AMP-лигазного

5 комплекса.

Фракции, содержащие PHK-лигазу, объединяют,(объем 37,5 мл), разбавляют н, 3 раза буфером Б и наносят на колонку (5х21 см) с ДЭАЭ-целлюлозной ДЕ-52, уравновешенную буфером Б.

910762

Фракции, содержащие фермент, объединяют (объем 13 мл), переносят в целлофановый диалиэный мешок и концентрируют диалиэом против 0,5 л буфера

0,01 М трис-HCl (рН 7,5) в 503-ном глицерине с 10 мМ дитиотреитолом в течение 24 ч. Отдиализованный препарат PHK-лигаэы (4,1 мл, 12 нмоль фермента, 1 8 вд/пмоль РЙК-лигазы вЂ” акФ I тивность 3 -экзонуклеазы в препарате) хранят при -20 С в герметично закрытом флаконе в течение года беэ потери активности.

Пример 2. Поясняет выбор времеви инкубации E.coli В с бактериофагом Т4 am В 82. ,РНК-лигаэу выделяют из 100 г биомассы Е.coli В, инфицированной бактериофагом Т4 am 9 82, по примеру 1 до стадии хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе включительно. При этом Е.coif инкубируют с фагом в течение 30 мин, 90 мии, и 3 ч. В полученных препаратах определяют удельное содержание

3 -экэонуклеазы в ед. активности на

1 пмоль РНК-лигазы. Результаты приведены в табл.1.

Элюцию. осуществляют 3 л раствора NaCf в линейном градиенте концентрации от 0,1 до 0,3 М NaC1 в буфере Б со скоростью 67 мл/ч. Фракции объемом

16,75 мл собирают на коллекторе, измеряют в них оптическую плотность при 280 нм и содержание PHK-лигазы, Фракции, содержащие фермент, объединяют (объем 150 мл) и добавляют к ним по порциям при непрерывном перемешивании на магнитной мешалке 1 ч

77,4 r сульфата аммония (до 80% от о насыщения при 0 С) . рН раствора при добавлении сульфата аммония контролируют универсальной индикаторной бумагой и по мере необходимости подтитровывают твердым трио(оксиметил) 15 аминометаном до рН 7-7,5. Раствор оставляют на 24 ч для формирования осадка, который далее отделяют центрифугированием (центрифуга 0-21 ротор QA-14, 14000 o6/мин, 1 ч) и Я растворяют в 4,5 мл буфера В (0,01 И трис-HCl, 10 мМ 2-меркаптоэтанол, 0,1 мМ ЭДТА, рН 7,5), содержащего

КС1 в концентрации 0,75 И.

Колонну SP 25/45 (Pharmacia, Шве« ция), заполненнук на 35 см ЯАЕ-сефадЕксом A-25, уравновешивают 0,1 М

KCl в буфере В, Снизу вверх в уравновешенную колонку вводят со скоростью

40 мл/ч 50 мл раствора KCl в линей- ® ном градиенте концентрации от 0,1 до 0,4 М КС1 в буфере В. Далее аналогично вводят в колонку 4,5 мл раствора фермента, полученного на предыдущей стадии, и следом 10 мл

1 М KCl в 50%-ном глицерине. Элюцию осуществляют снизу вверх 1 М КС1 со скоростью 20 мп/ч. Фракции объемом

5 мп собирают на коллекторе, измеряют в них оптическую плотность при

280 нм и содержание РНК-лигазы. 40

Фракции, содержащие фермент, объединяют (объем 25 мл), переносят в центрифужный стакан (для ротора QA-20) и добавляют по порциям при непрерывном перемешивании стеклянной палочкой 45

12,9 r сульфата аммония (до 80% от насыщения при 0 С) рН раствора при добавлении сульфата аммония контролируют и подтитровывают твердым трис (оксимвтил)аминометаном до 7-7,5. 50

Сформировавшийся в течение 24 ч осадок отделяют центрифугированием (центрифуга 0-21 ротор СА-20»

20000 об/мин, 1 ч) и растворяют в,3 мл буфера Г (0,02 М трис-НС1, 0,1 М КС1, l0 мМ 2-меркаптоэтанол,0,1 мМ ЭДТА, рН 7,5) .

Колонку (2,5х60 см) с сефадексом

8-100 (сверхмелким) уравновешивают буфером 1 ., наносят на нвв 3 щ раствора фермента, полученного на првды- Щ . дущей стадии, и элюируют буфером

Г со скоростью 5,2 мл/ч. Фракции объемом 2,6 мп собирают иа коллекторе, измеряют в них оптическую плотность при 280 нм и содержание PHK-лигаэы 55

Таблица l ца активности 3 уклеазы на 1 пмоль

HK-лигаэы а 112,9 б 27,6

35 138,3

П р и м в р 3. Поясняет выбор ионной силы раствора вводимой ступени фракционирования на ДЭАЭ-целлюлозе.

РНК-лигазу выделяют из 100 г биомассы Е.coli В, инфицированной бактериофагом Т4 am 9 82 по примеру 1 до стадии фракционирования на ДЭАЭ-целлюлозе включительно. При этом перед элюиией РНК-лигазы колонку промывают раствором с ионной силой: а вЂ” 0,11 б вЂ” 0,13) в вЂ” 0,16. PHK-лигаэу далее элюируют раствором с ионной силой

0,31 аналогично примеру 1. В полученных препаратах определяют содержание (РНК-лигаэы и белка, рассчитывают выход фермента (% к нанвсвнному на ко,лонку) и степень очистки. Результаты приведены в табл.2.

Т а б л и ц а 2

3,0

9,1 6,7

910762

Таблица3

1,7

3,2

3,0 в

П р и м е ч а н и е. В случае в проведение хроматографии осложнено З0 резкой сменой ионной силы раствора в колонке и вследствие этого значительным уменьшением объема хроматографивЂ” ческого носителя при введении в ко-: лонну раствора B линейном градиенте 35 ионной еилы от 0,01 до 0,41.

Формула изобретения

1. Способ получения РНК-лигазы, 40 включающий инкубацию клеток E.coli с бактериофагом Т4, разрушение клеток ультразвуком с отделением экстракта и последующим выделением фермента из экстракта путем обработки 45 его стрептомицинсульфатом и сульфатом аммония и хроматографией ферментного раствора в условиях буфера рН 7,550,1, проводимой последовательно иа диэтиламиноэтилцеллюлозе с 50 элюцией исходным буфером с добавкой

0,3 М NaCl, повторной хроматографией полученного элюата на диэтиламид оэтилцеллюлозе с. элюцией линейньм градиентом NaC1 от 0 до .0,3 М в исходном буфере и хроматографией полученного элюата на .сшитом эпихлоргидрином диэтил-2-оксипропиламиноэтилфекстране, в колонку с которым перед

Пример 4. Поясняет выбор ионной силы раствора преформируемого градиента концентрации соли в колонке при хроматографии Hà QAL-сефадексе A-25.

PHK-лигазу выделяют из 100 г биомассы Е.coli В, инфицированной бакте5 риофагом Т4 am М 82, по примеру 1 до стадии хроматографии на ЯАЕ-сефадексе A-25 включительно. При этом перед хроматографией иа ЧАЕ-сефадексе A-25 в колонку вводят раствор в линейном градиенте ионной силыу а от 0,275 до

0,5, б от 0,11 до 0,41, в от 0,01 до

0,41.

В полученных препаратах определяют содержание РНК-лигазы и белка, рассчи-15 тывают выход . Фермента (% к нанесенному на колонку) и степень очистки. Результаты привЕдеиы в табл.3. осуществлением хроматографии пред-. варительно в одят раствор КС1 в исходном буфере, с элюцией 1+0,01 М раствором КС1 и гель-фильтрацией полученного элюата с помсщью. сшитого эпихлоргидрином декстрана с использованием буфера рН 7,5+O,l, о т л ич а ю шийся тем,.что, с целью упрощения процесса и увеличения выхода целевого продукта, улучшения его качества, инкубацию E.coli c бактериофагом Т4 проводят 90+20 мин, при осуществлении первой хроматографии на диэтиламиноэтилцеллюлозе перед элюцией РНК-лигазы колонку с сорбентом промывают 0,12+0,01 М раствором NaCl в исходном буфере, а перед хроматографией на сшитом эпихлоргидрином диэтил-2-оксипропиламиноэтилдекстране в колонку с сорбентом предварительно вводят раствор КС1 в линейном градиенте концентрации от 0,1

0,01 до 0,4 0,01 М в исходном буфере.

2. Способ по п.l, о т л и ч а ювЂ” шийся тем, что в качестве исходного буфера при двукратной хроматографии на диэтиламиноэтилцеллюлозе используют 0,01 М трис-НС1: буфер, содержащий 10 мМ 2-меркаптоэтанола, рН 7,5.

3. Способ по п ° 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве исходного буфера при хроматографии на сшитом эпихлоргидрином диэтил-2-Окси» пропиламиноэтилдекстране используют

0,01 М трис- НС1 буфер, содержащий

10 мМ 2-чйркаптоэтанола, 0,1 мМ зтилендиаминтетрауксусной кислоты, рН 7 5

4. Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем,,что при проведении гель-.фильтрации используют 0,02 M трис-ИС1 буфер, содержащий 0,1 М

KCl, 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 0,1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты рИ 7 5.

Источники информации, принятые во внимание прн экспертизе

1. Higgins N. P., Geballe A.Р., Snopek Т.I,ет airNucl. Acids, Res, 1977,4, 9 9, 3175-3186.

2. Sugiura M., Suzuki Mc, Ohtsupy E. ет аl, DEBS Letters, 1979, 97 9 1 73 76.

3. Moseman ИсСоу M.I., Lubben T.Н., Gumport P.I. Biodhim et Biophys.

Acta,1979, 562, 149-161 °

4. Василенко С.К., Веньяминоза A I .

Ямковой В. И. и Майоров В.И. PHK-лигаза бактериофага Т4. Биоорганическая химия, 1979, т.5 в 4, 621-627 (прототип).

910762

Редактор М.Петрова

20 Ю

Монар рр©щи

Составитель О. Скородумова

Техред A.Áàáèíåö

Ваиаэ 1030/2 . Тираж,505

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и откритий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Филиал ППП Патент, r.ужгород, ул.Проектная, 4

Корректор у. Пономаренко

Подписное

Способ получения фибринолитического фермента // 907070

Способ определения активности l-глутаматдекарбоксилазы в биологической пробе // 905283

Способ получения щелочной протеазы // 899646

Способ получения ферментного препарата асперазы // 891777

Способ получения ферментного препарата @ -галактозидазы // 891776

Способ получения галактозооксидазы // 889705

Способ иммобилизации сериновых протеаз // 888544

Изобретение относится к химии полимеров и химической энзимологии, а именно к способам иммобилизации ферментов на полимерных матрицах

Питательная среда для выделения продуцентов @ и @ амилаз // 888543

Способ получения ферментного препарата липоксигеназы // 888542

Способ выделения и очистки ферментного комплекса из культивируемых растительных клеток // 2102478

Последовательность днк, белок и способ получения белка // 2103364

Изобретение относится к цефалоспоринацетилгидролазному гену, белку, содержащему аминокислотную последовательность, кодируемую указанным геном и представляющему собой мультимер, предпочтительно тетрамер или октамер, а также к методу получения указанного белка

Полипептид, обладающий уратоксидазной активностью, фрагмент днк, обеспечивающий экспрессию полипептида с уратоксидазной активностью (варианты), вектор экспрессии, содержащий фрагмент днк, обеспечивающий экспрессию полипептида с уратоксидазной активностью (варианты), штамм, экспрессирующий полипептид, обладающий уратоксидазной активностью (варианты), способ получения полипептида, обладающего уратоксидазной активностью // 2105812

Фрагмент днк, кодирующий полипептид к2р со свойствами активатора плазминогена, полипептид к2р со свойствами активатора плазминогена, рекомбинантная плазмидная днк ра27.3, кодирующая полипептид к2р со свойствами активатора плазминогена и фармацевтическая композиция, обладающая фибринолитической активностью // 2107094

Рекомбинантный тканевой активатор плазминогена и способ его получения // 2107727

Изобретение относится к получению тканевого активатора плазминогена (усовершенствованный АПТ), имеющего пролонгированный биологический полупериод существования, повышенную устойчивость к воздействию тепла и кислот и эффективный в качестве ингибитора воспаления вокруг сайта, где образован тромб

Негликозилированный полипептид со свойствами проурокиназы, способ его получения, рекомбинантная плазмидная днк для экспрессии полипептида и способ ее получения // 2108387

Изобретение относится к биотехнологии и позволяет получить полипептиды, используемые в качестве плазминогенных активаторов, имеющие высокую удельную амидолитическую и фибринолитическую активность

Способ получения биомассы // 2111253

Способ получения коллагеназы // 2112036

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к препаративной биохимии, и может быть использовано в клеточной биологии, медицинской практике для лечения ожогов, остеомиелитов, пролежней и удаления рубцов коллагена в косметических целях, косметической и парфюмерной промышленности при изготовлении кремов и мазей для омолаживания кожи, в пищевой промышленности для обработки мяса с целью улучшения его качества и питательных свойств, кожевенно-меховом производстве для получения эластичных, тонких и прочных материалов, а также в научно-исследовательской работе для изучения микроструктуры коллагена, при работе с клеточными структурами, а также с различными тканями и органами для индивидуальных интактных клеток

Способ получения белкового гидролизата из мясного и мясокостного сырья убойных животных // 2112397

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения белковых гидролизатов из мясного, мясокостного, костного сырья убойных животных, и может быть использовано в пищевой и медицинской промышленности

Способ активации комплекса протеолитических ферментов поджелудочной железы убойных животных // 2112801

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для получения белковых гидролизатов