Способ определения наличия афлотоксинов в и g в продуктах растительного сырья
««928226
Союз Соавтскик
Социанистичесиик
Республик
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22)Заявлено 28,04.80 (21) 2919959/28-13 .с присоединением заявки 34 (23) Приоритет
Опубликовано 15.05.82. Бюллетень яе >8
{53)м. кл.
G 01 т1 33/10
Гоаудерстееееьй каиетет
СССР ао делам кзебретееий и открытий
{53) УДК 614. .3(088.8) Дата опубликования ояисання 18.0 .82 (72) Авторы изобретения
Я.Л. Костюковский и Д.Б. Меламед (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АФЛОТОКСИНОВ
В И G В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
Изобретение относится к анализу ми кроколичест в ор га нических соединений и может быть использовано для определения токсичных и канцерогенных веществ в объектах окружающей среды, в частности в пищевых продуктах и кормах для сельскохозяйственных животных.
Установлено, что в различных продуктах зерновых, бобовых, масличных и др. могут содержаться продуцируемые плесневыми грибами афлотоксины, обладающие выраженной канцерогенной активностью и высокой токсичностью.
Установлено, что в пищевых продуктах допустима предельная концентрация афлотоксинов в пищевых продуктах.
Наиболее близким к .предлагаемому по решаемой задаче и достигаемому ! . эффекту является способ определения наличия афлотоксинов В и G в про.дуктах растительного сырья, включающий проведение хромотографии экстракта из продуктов растительного
2 сырья на хроматографической пластинке, подтверждение наличия афлотоксинов на этой пластинке путем выявления флуоресцирующих пятен в исследуемом образце и сравнение их со стандартным образцом. При этом выявления флуоресцирующих пятен ведут с по мощью трифторуксусной кислоты (1).
Недостатком в известном способе является то, что при его применении
10 получаются недостаточно точные результаты, из-за присутствия загрязненных частиц на пластинке, часть которых также как афлотоксины обладают флуоресцирующей способностью.
При использовании трифторуксуснои кислоты образуются соединения флуоресцирующие в той we области, что и про" дукты, образующиеся из афлотоксинов
81 и G, что делает подтверждение в этом случае недостоверным, на хроматограммах получаются широкие полосы фона и размытые пятна В. и G Ä что резко затрудняет определение, 3 928226 ф нижняя часть хроматографической плас- ракта продуктов растительного сырья тинки сильно загрязнена примесными отсекают загрязненную примесями часть веществами, что мешает обнаружению пластины ниже уровня пятен афлотоксипятен образующихся 8,1 и G лежа- нов 8 и G<, а выявление флуоресцищих в этой области. рующих пятен в исследуемом образце
Цель изобретения — повышение точ- ведут продуктами бромирования. ности определения. При этом в качестве продуктов броПоставленная цель достигается тем, мирования может быть использован что согласно способу определения на- раствор брома в диоксане. личия афлатоксинов В и 6.1 в продуктах >в растительного сырья, включающему прове- Установлено, что при использовадение хроматографии экстракта из про- нии для бромирования афлотоксинов В. дуктов растительного сырья на хромато- и G раствора брома в диоксане в графической пластинке, подтверждения результате реакции, протекающей как наличия афлотоксинов на этой пластин- I5 в растворе, так и непосредственно ке путем выделения флуоресцирующих на хроматографической пластинке, обпятен в исследуемом образце и срав- разуются только продукты присоединенение их со стандартным образцом, ния брома по двойной связи терминальпосле проведения хроматографии экст- ного фуранового кольца, например;
Ст роение диброми дав афлотокси нов
8,1 и G <, обладающих интенсивной флуо ресценцией, установлено масс-спектрометри чески .
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
Экстракт из продуктов раститель» ного сырья подвергают очистке хроматографией и концентрируют его 0,050,1 мл. На хроматографическую пластинку наносят по 2-20 мкл два пятна очищенного концентрата и два пятна " смеси стандартов В и G 1 и хроматографируют, подсушивают и рассматривают в Уф при 360 нм. Отмечают Флуоресцирующие пятна стандартов и соответствующие пятна концентрата. Обрезают часть пластинки на 10- 12 мм. ниже пятен афлотоксинов. Затем по од ному отмеченному пятну стандарта и концентрата обрабатывают 10-15 ыкл
5- 10 -ного раствора брома в диокса" не, выдерживают 1-3 мин при комнатной температуре и снова хроматографируют в той ие системе. Совпадение
Rg флуоресцирующих пятен как самих афлотоксинов в стандартных и опытных пробах, так и Rg соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлот" оксинов в анализируемом продукте.
О
Пример 1. Экстракт афлотоксинов из продукта подвергают очистке колоночной хроматографией и концентрируют до 0,05-0,1 мл. На пластинку силуфол наносят по 10 мкл два пятна очищенного концентрата и два пятна смеси стандартов В и G и хроматографируют в системе хлороформ-бензолацетон 9:1:1, подсушивают и рассматривают в Уф при 360 нм. Отмечают флуоресцирующие пятна стандартов и соотО ветствующие пятна концентрата. Обре" зают часть пластинки на 10 мм ниже пятен афлотоксинов. Затем по одному отмеченному пятну стандарта и концентрата обрабатывают 10 мкл 5i-ного
5 раствора брома в диоксане, выдерживают I мин при комнатной температуре и снова хроматографируют в той же системе. Совпадение К флуоресцирующих пятен как самих афлотоксинов в стан0 ддааррттнныых х и и ооппыыттнныых х ппррооббаахх, так R соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлотоксинов в анализируемом продукте.
Пример 2. Экстракт афлотоксинов из продукта подвергают предварительной очистке, например обработкой 203-ным водным раствором сульфата аммония и гексаном, водный слой
92822б
Формула изобретения
Составитель М. Выражейкина
Редактор В. Бобков Техред g. Надь Корректор Г. Огар
Тиран 883 Под пи с ное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, ц-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 3227/55
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
5 обрабатывают хлороформом. Хлороформенную вытяжку концентрируют до
0,1 мл. На пластину силуфол на линию старта на расстоянии 15 мм от края пластинки наносят концентрат (слева) и стандарт (справа) и хроматографируют в негерметично закрытой камере в системе бензол-гексан-эфир 1:1:1 в течение 1 ч, Затем пластинку подсушивают, поворачивают на 90о, наносят стандарты слева и справа от пятна концентрата и хроматографируют в системе хлороформ-бензол-ацетон 9:1:1. Пластинку рассматривают в Уф свете, отмечают соответствующие пятна стандартов и концентрата и отрезают часть пластинки на 12 мм ниже пятен афлотоксинов. Обрабатывают пятна концентрата и правого стандарта
15 мкл 10 ь-ного раствора брома в диоксане, выдерживают 3 мин при комнатной температуре и снова хроматографируют в той же системе. Совпадение Ry флуоресцирующих пятен как самих афлотоксинов в стандартных и опытных пробах, так и Rg соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлотоксинов в анализируемом продукте.
Использование предлагаемого способа подтверждения наличия афлотоксинов В 1 и G. обеспечивает по сравнению с существующими способами следующие существенные преимущества: повышение достоверности результатов определения и подтверждения наличия афлотоксинов В и С a объектах окружающей среды; и склю чеки е ложных результатов подтверждения, что предотвращает возможность запрещения употребления кондиционных пищевых продуктов и кормов; улучшение наглядности при подтверждении наличия афлотоксинов путем получения четких пятен дибромидов и удаления загрязненной части пластинки.
Способ проверен на различных зерновых (пшеница, рожь, кукуруза, рис, овес) и масляничных (арахис, кешью) продуктах сравнительно со способом, основанным на применении трифторуксусной кислоты, и установлено, что он существенно превосходит последний.
Надежное подтверждение достигается при содержании афлотоксинов В и G
-1
0,5-1,0 нг в пятне, что обеспечивает возможность определения и подтверждения наличия афлотоксинов на уров1О не и ниже предельно допустимой концентрации порядка 2,5-5 мкг/кг.
Предлагаемый способ рекомендуется использовать для подтверждения наличия афлотоксинов В 1 и G при их on15 ределении любыми флуоресцентными методами.
1. Способ определения наличия афлатоксинов B„ G B продуктах растительного сырья, включающий проведение хроматографии экстракта из npo2s дуктов растительного сырья на хроматографической пластинке, подтверждение наличия афлотоксинов на этой пластинке путем выявления флуоресцирующих пятен в исследуемом образце и сравнение их со стандартным образцом, отличающийся тем, что, с целью повышения. точности определения, после проведения хроматографии экстракта продуктов растительного сырья отсекают загрязнен1 ую примесями, часть пластины ниже уровня пятен афлотоксинов В < и G, а выявление флуоресцирующих пятен в исследуемом образце ведут продуктами бро40 мирования
2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю— шийся тем, что в качестве продуктов бромирования используют раствор брома в диоксане.
Источники информации, принятые so внимание при экспертизе
1. "Т. Assos offic. Anal. Chem"
N 60, N 4, 1977, ?95-8 см. М, Trucicsessefa1 ТСХ (определение Афл.В.).
