Способ определения активности ферментов в сыворотке крови

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< 943577

Союз Советских

Социапнстичвских

Рвспублнк (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 22.09.80 (21) 2о84654/28 13 с присоединением заявки РЙ (23) Приоритет

Опубликовано 15.07.82. Бюллетень JA 26

Дата опубликования онисаиия 15 07 82 (51)M. Кл.

G 01 N 33/48

5кудэретеенный кэмнтет

СССР ао делам хзобретеннй н эткрытнй (53) УДК 616.07 (088.8) (72) Автор изобретения

В. И. Крупенина /

Ростовский-на-Дону государственный научно — исследовательский противочумный институт -z w (71), Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Изобретение относится к медиане, а именно к ферментной диагностике заболеваний.

Известен способ определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубировання ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последую5 щим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса f 1) .

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности. о

Цель изобретения — повышение точности способа.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последующим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса отличительной особенностью является то, что пробу разводят 2-5 М раствором рц хлористого натрия или 0,2-0,5%-ным раствором желатины.

Пример 1. Получив очень высокие экстинкции при определении активности трансаминаз в сыворотке крови, повторяют определение с разбавленной s несколько раэ сывороткой. Сыворотку разводят в 10 раэ 0,2%-ным раствором желатина и дальнейшую рабо ту проводят так же как и при полной пробе по методу Reitman S. u Frankel S.

В пробирке; контрольную, со стандартным раствором, и опытную наливают по 0,5 мл субстратного раствора, содержащего для определения алании-аминотрансферазы 1 мкМ а-кетоглутаровой кислоты и 50 мкМ L-аланина, для определения аспартат -аминотрансфераэы.

1 мкМ а-катоглутаровой кислоты и 50 мкМ

L-аспарагиновой кислоты (рН 7,4) и нагревают 15 мин при 37 С. После прогревания в контрольную пробу приливают 0,1 мл дистиллированной воды, в пробирку со стандартом

0,1 мл раствора стандарта (0,20 мкМ пирувата натрия нри определении алании-аминотрансферазы или 0,20 мкМ шавелево уксусной кислоты при определении аспартат-аминотрансферазы), в опытные пробирки добавляют по О,1 мл разведенной 1:10 исследуе943577

Составитель С, Малютина

Редактор М. Парфенова Техред А.Ач

Корректор А. Гриценко

Заказ 5097/49 Тираж 887

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий .

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 мой сыворотки. Пробы инкубируют при

37 С 60 мин.

После инкубации во все пробы прибавляют по 0,5 мл раствора динитрофенилгидразина (19,8 мг 2,4 — динитрофенилгидразина в 100 мл 1 н, HCi), выдерживают

15 мин, при комнатной температуре и добавляют 5,0 0,4 н. раствора NaOH. Через

20 мин колориметрируют против контроля в 1,0 см кюветах при сине-зеленом свето$msrpe (S«)

При расчете активности трансаминаз полученную активность умножают на степень разведения сыворотки и получают линейную зависимость активности фермента от разведения

Пример 2. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сыво- роткой. Сыворотку разводят в 10 — 20 раз

0,4%-ным раствором желатина. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.

Пример ° 3. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой. Сыворотку разводят в 10 — 20 раз

0,5 о-ным раствором желатина. Определение . активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.

Пример 4. При получении высокой активности трансаминаэ в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой. Сыворотку разводят в 10-20 раз 2М раствором хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.

Пример 5. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой. Сыворотку разводят в 10 — 20 раз 4М

4 раствором хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.

Й р и м е р 6. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой. Сыворотку разводят в 10 — 20 раз

5М раствором хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано

10 в примере 1.

Предлагаемый способ позволяет исключить епропорциональное возрастание удельной ,активности ферментов при разведении сыво1 ротки, т. е, делает возможным определить истинную активность ферментов, когда необходимо разведение сыворотки из-за высокой активности ферментов, наблюдающейся при многих патологических процессах и превышающей нормальные значения в 10 — 50 и более раз. Способ не требует дополнительных количеств крови изменений условий постановки опытов и дополнительных материальных затрат.

Формула изобретения

Способ определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, 30 внесения индикатора с последующим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса, о т л и ч а ю ш, и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, пробу разводят 2 — 5 М раствором хлористого натрия или 0,2 — 0,5%-ным раствором желатины.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Асатиани. В. С. Ферментные методы анализа. М., "Медицина™, 1969, с. 574-608.