Способ приготовления комплексов днк с белком для электронно- микроскопического исследования

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N23/225 - с использованием электронного или ионного микроскопа (трубки с электронным или ионным пучком для микроанализа H01J 37/00)

A61B10 - Прочие способы и инструменты для диагностики, например инструменты для взятия пробы клеток, для биопсии, для диагностики путем вакцинации (вакцинация для профилактики или терапии A61B 17/20); определение пола ребенка в эмбриональном периоде; определение периода овуляции (таблицы менструального цикла G06C 3/00); приборы для осмотра гортани

()946512

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное н авт. свид-ву(22) Заявлено 2906.79 (21) 2837452/28-13 с присоединением заявки МвЂ” (23) ПриоритетвЂ”

Опубликовано 300782 . Бюллетень М928

Дата опубликования описания 300782

) 51) М. Кп. з

A 61 В 10/00

G 01 N 1/28

Государственный коиитет

СССР но делам изобретений и открытий

153) УДК 615. 475 (088.8) (72) Авторы изобретения

Ю.Ю. Венгеров и В.И. Попенко

Институт молекулярной биологии AH .С (7t) Заявитель (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОМПЛЕКСОВ ДНК

С БЕЛКОМ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО

ИССЛЕДОВАНИЯ

Формула изобретения

Изобретение относится к медицине, а именно к электронно-микроскопическим исследованиям биологических макромолекул и их взаимодействия.

Известен способ определения комплексов ДНК с белком для электронномикроскопического исследования путем смешивания. растворов ДНК и белка, перенесения их на пленки-подложки и контрастирования fl).

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности, так как не позволяет исследовать динамику структурных изменений, происходящих при присоединении белка к ДНК.

Цель изобретения - повышение точности способа, выявление комплексов

) и изучение динамики их образования.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении приготовления способа комплексов ДНК с белком для электронно-микроскопического исследования осуществляют путем смешивания растворов ДНК и белка, перенесения их на пленки-подложки и контрастирования, раствор ДНК наслаи вают на поверхность гипофазы раствора белка.

Пример. Исследование структуры комплексов ДНХ с гистоном Hi.

Каплю раствора ДНК (5 мгк/мл в

25 мМ ТЭА-НСЯ буфере) осторожно наслаивают на поверхность гипофазы, содержащей 2 мкг/мл гистона Н в присутствии 0,14 M NaCC.

Образование пленки ДНК на поверхности контролируют по меткам талька. Затем через различные промежутФ ки времени касаются полученного пятна электронно-микроскопической сеточкой, покрытой коллодиевой пленкой-подложкой. Избыток жидкости отсасывают фильтровальной бумагой. Сеточку контрастируют круговым напылением сплавом Pt-Pd. Просмотр производят на электронном микроскопе.

Предлагаемый способ дает возможность исследовать динамику образования комплексов, изучать их структуру, а также прослеживать изменения конформации индивидуальных молекул ДНК при присоединении к ним молекул белка, находящегося в гипофазе, и расширяет возможности электронно-микроскопического изучения, биологических макромолекул.

Способ приготовления комплексов

ЗО ДНК с белком для электронно-микро946517

Составитель С. Малютина

Техред Т. Маточка Корректор Ю. Макаренко

Редактор Н. Кешеля

Заказ 5387/6 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 скопического исследования путем смешивания растворов ДНК и белка, перенесения их на пленки-подложки и контрастирования, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности способа; выявления комплексов и изучения динамики их образования, раствор ДНК наслаивают на поверхность гипофазы раствора белка.

Источники информации, 5 принятые во внимание при экспертизе

1. CoIe R.Î jawson С.М., Usiang М.N. Co11 Spring Harbor Symposium Quantity BioIogy. 1977, р.253.