Способ определения глюкозы

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

(ii)953564

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ .

Союз Советски к

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22)Заявлено 07.08.80 (21) 2980918/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 23. 08. 82 Бюллетень № 31

Дата опубликования описания 25.08.82 (5 3 ) M. Кл.

G 01 N 33/48

3Ьаудвретееиь и комитет

СССР

10 делам изо4ретеиий. и OTNpblTNll (53) УДК 621.122.. 1: 543. 257. 2 (088. 8) С.О. Бачурин, С.Д. Варфоломеев и И.В. Берез ,.<

Московский ордена Ленина, ордена Октябрьск Революции и ордена Трудового Красного Знамени госуда ствейный университет им. И.В. Ломоносова (72) Авторы изобретения (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ

Изобретение относится к медицине, а именно к методам биохимического анализа биологических жидкостей и предназначено для определения глюкозы ферментативным методом.

Известен способ определения глю5 козы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкоэоксидазой, иммобилизованной на электроде 11).

Однако известный способ отличается крайне низкой чувствительностью.

Величина плотности тока, снимаемого с такого электрода составляет

9,5 мкА/см . Причиной низкой чувствительности анализа является небольшая емкость электрода по ферменту и отсутствие хорошего электронного контакта между активным центром фермента и электродом.

Цель изобретения - повышение чув- gp ствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят анаэробное окисление глюкозы глюкозооксидаэой, иммобилизованной на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса тетрацианхинодиметана с полипропаргилпиридином.

Иммобилизацию глюкозооксидазы проводят с осаждением фермента с осад" ком комплексной соли полипропаргилпиридиния с тетрацианхинодиметаном

TCMQ. При этом получают препарат иммобилизованной глюкозооксидазы, содержащей 350 мг белка/г носителя.

Полимер с включенными в него молекулами фермента наносят на платиновую

953564

Формула изобретения

Составитель B. Арцатбанов

Редактор А. Козориз Техред М. Рейвес Корректор И Иуска

Заказ 2 9/73 Тираж 7 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проек сетку и используют в качестве электрода.

Пример . Изготовление электрода. Предварительную иммобилизацию глюкозооксидазы и в комплекс полимера s поли-1-пропаргилпиридила (P-1-PP) с тетрацианхинодиметаном (ТСН0) проводят по следующей методике: к раствору

60 мг бромида P-1-PP в 3 мл дистиллированной воды добавляют 4 мл водного раствора глюкозооксидазы (6,25 мл сухого препарата/мл раствора). При пос". тоянном перемешивании к полученному раствору добавляют 8 мл водного раствора LITCNQ концентрацией 10 мг 15

Е ТСИО. мл раствора. Смесь перемешивают в течение 1 r, и образующийся осадок P-1-PP TCNQ с соосажденным ферментом отделяют от супернатанта на центрифуге при 6 тыс. об/мин в тече- щ ние 30 мин. Полученный препарат дважды промывают дистиллированной водой, вновь отделяют на центрифуге и сушат при комнатной температуре. Содержа-, ние фермента в препарате. составляет д

350 мг/г носителя.

Для изготовления ферментного электрода берут платиновую сетку, на которую ровным слоем наносят препарат иммобилизованной глюкозооксидазы и помещают под пресс (150 кг/см ) на

15 мин.

Определение глюкозы. В электрохи-, мическую ячейку, допускающую продувку раствора газом, помещают 50 мл исследуемого раствора глюкозы в буфере (фосфаты=1,5 И, рН 7,35, 30 С). В качестве рабочего электрода используют электрод с иммобилизованной глюкозооксидазой, в качестве электрода сравнения - нормальный каломельный электрод. Ячейку с раствором глюкозы в течение 30 мин продувают аргоном и задают на рабочем электроде потенциал +Е=140 мВнкэ. 3a" висимость плотности тока, снимаемого с такого электрода, от концентрации глюкозы в растворе является линейной. Хорошие электропроводящие свойства носителя и высокое содержание глюкозооксидазы позволяют получить ток в 110 мкА/см, что обеспечивает в 12 раз увеличение чувствительности определения глюкозы.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает возможность определения концентрации глюкозы в анаэробных условиях, т.е. без специальной продувки проб кислородом; зна- чительное повышение чувствительности ферментного электрода по отношению к глюкозе, что расширит область применения ферментных методов анализа на глюкозу и повысит их чувствительность.

Способ определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Lahoda Е.J. (1 in С. С. апд

WIngard L.Â. вЂ” "Electrochemical

Evaluation of Glucose 0xidase Immobilized by Different Methods

"Biotechnology and BIoeng, XVII, 1975 413-422.

Способ определения компонентов кининовой системы гладкомышечного препарата при биотестировании // 953497

Способ диоптрографии органов и тканей // 953495

Способ обработки биопсийного материала,содержащего жир // 953494

Способ приготовления серийных разведений для микротитрования // 951138

Способ выявления белков // 951121

Способ определения содержания эндогенной воды в органе // 951120

Способ определения сульфгидрильных групп в белках // 951119

Способ контроля натуральности меда // 949500

Способ определения холиномиметических и холиноблокирующих свойств фармакологических средств холинергической природы // 947767

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750