Способ приготовления питательной среды для выявления дрожжей и плесеней в молоке и молочных продуктах

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК,SU„„, 13469 ую С 12 я 1 16

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCH0MV -СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0,80-0,90

0,0l-0,04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ1Ф (21) 3368455/28-13 (22) 30.12.81

-(46) 23.04.83. Бюл. Н 15 ,(72) К.А. Калунянц, Т.А. Смирнова и Н.В. Иартынова (71) Северо-Кавказский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной и сыродельной промышленности . (53) 663.15(088.8) (5Ü) 1. Скородумова А.И. Практичес" кое руководство по технической микробиологии молока и молочных продуктов. И., Пищепромиздат, 1963., с. 27.

2. ТУ 49513-78 "Среды питательные сухие для микробиологического контроля молока и молочных продуктов" (прототип).. (54)(57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ДРОл(ЖЕЙ И ПЛЕСЕНЕЙ В ИОЛОКЕ И ИОЛОЧНЫХ

ПРОДУКТАХ, предусматривающий получение питательной основы путем ферментативного гидролиза молочного белка s присутствии хлороформа, освобождение от белкового осадка, сгущение, сушку, смешивание с порошкооб разным агар-агаром, о т л и ч à ющ и й.с я тем, что, с целью улучшения дифференцирующих и ростовых свойств среды и снижения ее себестоимости, для приготовления питательной основы составляют смесь из обезжиренного молока титруемой кислотностью. 90-100 Т в количестве 68-703 и подсырной сыворотки - 30-32, гидролиэ проводят ферментом реннинопузиллином, содержащим кислотоустой" чивую протеазу, при рн 4,8-5,4 в течение.4-6 ч до содержания аминного азота 70-90 мг. Ф и редуцируецих сахаров 6,0-6,53, причем хлороформ вводят через 0,5-0,75 ч после внесения фермента, а в высушенный гидролизат дополнительно вводят индикатоа

1 бромфеноловый синий, однозамещенйый фосфорнокислый калий и двузамещенный фосфорнокислый натрий при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Сухой гидролизат смеси обезжиренного молока и подсырной сыворотки 30,00-40,00

Агар-агар 20,00-25,00

Бромфеноловый синий 0,10-0,20

Одноэамещенный фосфорнокислый калий ,Двузамещенный фосфорнокислый . натрий

1013469

Недостатком этого способа являет" ся получение питательной среды с заниженным углеводным питанием (соИзобретение относится к микробиологии, а именно к приготовлению питательных сред, предназначенных для определения общего количества дрожжей и плесеней в молоке и молочных продуктах.

Известен способ приготовления питательной среды для выявления дрожжей и плесеней в молоке и молочных

10 продуктах включающий получение пивно3 го сусла из ячменя путем длительной обработки при различных температурных режимах и приготовление на его основе суслового агара 11 ).

Недостатками этого способа являются длительность и сложность процесса и получение питательной среды нестабильного состава, срок хранения которой 10- 15 дней.

Наиболее близкими по технической сущности и достигаемому положитель. ному эффекту к предложенному является способ приготовления питательной среды для выявления дрожжей и плесе25 ней в молоке и молочных продуктах, предусматривающий получение питательной основы путем ферментативного гидролиза молочного белка в присутствии хлороформа, освобождение от белкового осадка, сгущение, сушку смешивание с порошкообразным агар-ага- ром.

Гидролиз обезжиренного молока . (титруемая кислотность (19 Т, активная кислотность рН 6,5-6,7) проводят 35 в щелочных условиях (рН 7,8-8,0) панкреатином в течение 24-48 ч при постоянном коррегировании рН среды

20 -ным раствором едкого натра в присутствии хлороформа, который вно- 40 сится одновременно с ферментом, Гидролиз проводится до содержания аминного азота 120-140 мг.

После этого белковый осадок отделяется от гидролизата. Очищенный 45 гидролизат сгущают и высушивают, При расфасовке в соответствии с рецепту" рой среды добавляется агар-агар. рН

"выпускаемой среды 7,0-7,6. При приготовлении рабочего субстрата необхо- 5р димы подкисление его до рН 4,0-4,5

403-ным раствором молочной кислоты и стерилизация, сопровождающаяся выделением обильного осадка, который удаляют фильтрацией (2 1. дер ание редуцирующих сахаров 45-503), что сопровождается недостаточно пол.ным выявлением дрожжей и плесеней, а также слабым дифференцирующим эффектом по отношению к сопутствующей молочнокислой микрофлоре, что требует проведения подтверждающего тес" та - микроскопирования колоний мйкроорганизмов. Необходимость резкого снижения рН среды (от 0,7-7,6 до

4,0-4,5) в процессе приготовления рабочих субстратов в производствен" ных условиях связана с нежелательным расхоаом молочной кислоты и отрицательным влиянием последней на состав среды и ее гелеобразующие свойства.

Кроме то -о, проведение гидролиза в щелочной среде не позволяет осадить весь белок, который при приготовлении рабочего субстрата выпадает в осадок, что приводит к увеличению расхода среды на анализы.

Цель изобретения - улучшение дифференцирующих и ростовых свойств среды и снижение ее себестоимости.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу приготовления питательной среды для выявления дрожжей и плесеней в молоке и молочных продуктах, предусматривающему получение питательной основы путем ферментативного гидролиза молочного белка в присутствии хлороформа, освобождение от белкового осадка, сгущение, сушку, смешивание с порошкообразным агар-агаром, для приготовления питательной основы составляют смесь из обезжиренного молока тит- . руемой кислотностью 90 -100ОТ в количестве 68-703 и подсырной сыворотки - 30-323, гидролиз проводят ферментом реннинопузлиллином, содержащим кислотоустойчивую протеазу, при рН 4,8-5,4 в течение 4-6 ч до содержания аминного азота 70-90 мг.3 и редуцирующих сахаров 6,0-6;54, причем хлороформ вводят через 0,5-0,75 ч после внесения фермента, а в высушенный гидролизат дополнительно вводят индикатор бромфеноловый синий, фосфаты КН Р04 и Ив НРО 2К)(0 при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной, воды:

Сухой гидропизат смеси обезжиренного молока и подсырной сыворотки 30,оо-40,0о

Агар-агар 20,00-25,00,.

D,80-О,9О

Дополнительное введение фосфатов

КН Р0-Яв„НРО обеспечивает буферность рабочих питательных субстрат тов. Стабильность состава среды достигается тем, что она имеет значение

1013469 ф

Бромфеноловый си- рН в пределах, -,5, ах 4 0-4 5 что полностью

0 10-0 20 исключает необходимость внесения маний

Э t

Однозамещенныи лочной кислоты в процессе приготовления рабочего субстрата. фосфорнокислый

П р и и е р. К 7 л обезжиренного к алий

5 от молока с титруемой кислотностью 90 Т

Двузамещенный фосфорнокислый (рН 5,4) добавляют 3 л подсырной сы- ° нат ий 0,01"0,04 воротки. Смешанные компоненты. подонатрий г евают о 60 С. В 100 мл подогретой

В процессе приготовления смеси гревают до для гидролиза соблюдается строго оп- i сме и р д с азво ят 1О г порошка реннинои зиллина-и переносят в общую массу. ределенное соотношение обезжиренно- пуз л

Смесь вто ично перемешивают. Хлоров оличестве 0 4 л добавляется го молока и молочной сыворотки. - Смесь в р

При использовании сыворотки в ко- форм в количест че еэ 0 75 ч после внесения ферменличестве, превышающем 323, содержа- через,75

Фе менте герметически закрывают, ние сахаров в смеси увеличивается, qg та. Фермент р р но и и этом снижается уровень амин- и час ги олизат перемешино при ного азота за счет соответственного вают. Внешним при

В им и изнаком получения снижения количества обезжиренного готового гидролизата является отделеи. Зто и иводит к ухуд- ние белого творожистого осадка и отмолока в смеси. Зто приводит к ухудкости. В это время следят,за нарасчае использования меньшего количест(ее 30/) и соответ- танием аминного азота и содержанием ва сыворотки (менее 3 .) и соотв и их сахаров в гидролизате. ственного увеличения обезжиренного редуцирующих сахаров в г молока в смеси ухудшаются как росто- П и со ержании аминного азота вые, так и де е

Фференцирующие свойст- 25 80 мг. 4 и редуцирующих сахаров ют П о олжительва .среды. рН смеси при указанном гидролиз прекращают. р д ность гидролиза 5 ч, конечный рН соотношении компонентов находится в пределах, -, . ид

4 8-5 О Ги ролиз осу- гидролиза 4,5. Гидролизат полностью

58-60 С с использо- освобождается от белкового д ванием фермента .реннинопузиллина, автоклавированием при имеющего оптимум действия в пределах

Гидролизат упаривается до содерактивной кислотности составленнои о,смеси. Фермент вносится в колиуест1-0 24 (25-30 ЕД/г) к объему Сгущенный гидролизат высушивается ве 0,1-0,2

Г роводят до содержа- распылительным с д

4i ота 70-90 мг.Ж и ре- ния сухих веществ 9 ния аминного азота 7 -9 мг..

Упаковка сухой питательной среды, олизат палу- предназначенной для приготовления и ю их сахаров 6;0-6,5Ж.

Ферментативный гидролизат, палу"

1 л рабочего субстрата, содержит ченный с использованием реннинопузили оз ачностью и 40 г сухого гидролизата, 25 г агарм агара, 0,1 г бромфенолового синего стабильным рН(4,0-4,5), оптимальным at eÐe вития анной группы микро-. водорастворимого, 0,9 г КН Р

О 04 г Иа НРО, Сухая питательная организмов. Хлороформ в количестве

0,5-0 75 среда содержит аминнога азота

4-0 5 вносится после, —, ч с начала гидролиза, что устраняет и " - .С е ы упаковы аются в пакеты ее ействие на фер- 603. т В выс шенный гидролизат вводит- . реды у а мент. в у полимерной пленки, обернутой в свеся инд р р икато б омфеноловый синий, и и е енциа- тонепроницаемую бумагу, и хранятся что облегчает подсчет и дифференциаколоний а также сакра- в течение мес при комн, цию выросших колонии, ат ре и относительной влажности 75 . щает вре р в мя и оведения анализа за ратуре и о

Для приготовления рабочего субстсчет исклю е ючения подтверждающего тесрата в производственных условиях со" та - микроскопирования. держимое упаковки переносится в колбу и доводится дистиллированной. водой до 1 л, нагревается до расплавления агара и стерилизуется при

10 Па в течение 10 мин, рН рабочего субстрата 4,5.

469 .

Смесь штаммов дрожжей, плесекей и молочнокислых микроорганизмов

2,4, 106

106 g,8 ° 10 6

Сыры натуральные

1 7 ° 10

499

30

Кисломолочные продукты

596

306

Смывы с оборудования

207

115

% 1013

При микробиологическом изучении среды, приготовленной согласно пред- лагаемому способу, проводили сравни-. тельные посевы на указанном субст" рате, сусловом агаре и сухой питательной среде по ТУ 49 У3 78

В качестве посевного материала испольэовали смесь штаммов дрожжей, .плесеней и молочнокислых микроорганизмов, молочные продукты, смывы с 1О производственного оборудования. Термостатировали посевы при 28 С в течение 4 сут. Результаты сравнительных . посевов приведены в таблице.

Использование среды с индикатором 1з .позволяет дифференцировать дрожжи и плесени от молочнокислых микроорганизмов, не прибегая к микроскопированию. Колонии дрожжей - серые со стальным блеском, плесени имеют инди" 20

6 видуальную окраску, колонии молочнокислых бактерий окрашиваются. в яркосиний цвет.

На среде, приготовленнои согласно предлагаемому способу,, рост дрожжей и плесеней не тормозится, учет посевов намного облегчен. Изучение колоний, вйросших на сравниваемых питательных субстратах, показало, что предлагаемый способ,приготовления среды обеспечивает более полное выявление дрожжей и плесеней за "счет улучшенных ростовых свойств и ста- бильности субстрата.

Экономический эффект от использования сухой питательной среды по предлагаемому способу составляет

233,49 руб, 1013469

Продолжение таблицы 1 кислых микроорганизмов

1 7 10

Сыры натуральные

251

1,4 10 260

1,4 10

30

Кисломолочные продукты. 211

524

560

250

Смывы с оборудования

198

200 .

Ре актор О.. Половка

° ° ак з 41 а 29 /33 Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва N-35 Ра шская наб., д. д. 4/5

Т т — ——

Ьнлнал ППП Патент, r. Улгород, ул. Проектная,,.Смесь атаммов

\ дрожжей, плесе-, ней и молочно1,0 10, 6,7 10 1,9 -10 1,1 ° 10 6.,4 10

Составитель И. Привалова

Тех ед D.:Heue Корректор А. Ильин