Штамм облигатно-термофильной бактерии @ 132-4к-продуцент щелочной фосфатазы

 

Штамм оолигафио-термофильной бактерии Thermus ruber 132-4К - (коллекция Центрального музея пркжьволён ных микроорганизмов Института ВНИИIгенетика , коллекционньй номер ЦНИИ в-2270) - прсЬуцент щелочной фосфатазы .

СО103 СОВЕТСНЙХ

З«ВЮН

РЕСПУБЛИК

ЗфН) С 12 И 15 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВМДЕ ГЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3334610/28-13 . (22) 06.07;81 (46) 15..05.83. Бюл . 9 18 (72) Л.А. Егорова, Л.г. Логинова, Л.М. Серегина и М.Л. Бобык (71) Институт микробиологии АН СССР и Институт биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР (53) 663.15(088.8) (56)1. Hassan Н.М., Pratt D. Biochemiсай and рйун1оРод1сай properties

of а1Ма11пе phosphatases in five

isogates of marine bacteria.-

Васteii àl"", 1977, 129, 3,. 1607.

2. Уег. М.F., Tre9a 3.М., — Ю;

Bio 6. Chem, 1976, 251, 3134 (прототип).,.SU„„7731 A (54) ШТАММ ОБЛИРАТНО-ТЕРМОФИЛЬНОИ . БАКТЕРИИ THERMUS RUBER 332-4К - ПРО"ДУЦЕНТ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЦ; (57) Штамм облигатно-термофилъной бактерии Thermus:iuber 132-4K - (коллекция Центрального музея промншленннх микроорганизмов Института ВНИИ генетика, коллекционный номер ПМПМ

B-2270) - прсЬуцент щелочной фосфатазы °

1017731

Изобретение относится к области микробиологической промышленности, а именно к получению Ферментов микробного происхождения, и представляет собой новый штамм бактерий — продуцент щелочной фосфатазы. 5

Фермент - щелочная фосфатаэа может быть использованЛ в медицине, в частности клинической энэимологии для диагностики различных заболеваний (раковых, эпидемического гена- fO тита, желтухи и т.д.), и в бытовой химии. Высокий температурный оптимум ,.действия фермента, равный 55-600 делает возможным применение щелочной фосфатазы в качестве одного иэ компонентов комплексных ферментов, применяемых при изготовлении стиральных порошков.

Большинство известных штаммов бактерий, способных к биосинтеэу внутриклеточной щелочной фосфатаэы, чвляются мезофильными, оптимальная температура роста их равна 28-ЗООC.

Известны, например, прадуценты щелочной Фосфатазы - мезофильные бакте-2 рии родов А) te romanes H Beneckea jl ), 25

Активность щелочной фосфатазы в бесклеточных экстрактах бактерий

АВМготопаэ В-16 и Beneckea NB-21 равна соответственно 1,00 и 0,75 E/ìã . белка/мин. Ва единицу активности ще- ЗО лочной фосфатазы принимали количество паранитрофенола образующегося из паранитрофенилфосфата под действием

; щелочной фосфатазы, рассчитанное на 1 мг белка в 1 мин. 35 . Известен штамм облигатно-термо,фильной бактерии Thermus арпа icus. УТ-1 — продуцент щелочной фосфатазы (2 ).

AKTHBHocTb неочищенной щелочной фосфатазы, полученной из клеток Т.ag-4p

naticus УТ-1, достигает 78,4 щЕ/.лг белка/мин.

Недостатком штамма Т.agnaticus

УТ"1 является необходимость выращивания его на дорогс .тоящей среде, .основным компонентом которой является глутаминовая кислота. Потребность в последней только для пищевых целей настолько велика, что использование ее для приготовления микробиологичес- gp ких сред не представляется возможным.

Целью изобретения .является штамм облигатно-термофильных бактерий, обладающий способностью к биосинтезу высокоактивного фермента - щелочной фосфатазы и культивируемый на среде ,простого состава.

Предлагаемый штамм облигатно-термофильных бактерий является новым видом бактерий рода Thermus и выделен из почвы тропической зоны. Штамм 60

Thermus ruber 132-4К имеет оптимальную температуру роста 55"60ОC.

ВНИИПИ Заказ 3481/28

Культура поддерживается на косяках с картофельно-пептонной агаризованной средой (20%-ный картофельный отвар, содержащий О, 5% пептона, 0,1% дрожжевого экстракта, 3% агарагара). Внутриклеточная щелочная фосфатаза проявляет максимальную активность через 8-10 ч роста культуры на жидкой среде вышеукаэанного состава. Активность щелочной фосфатазы в бесклеточных экстрактах достигает 33 mE.

Время генерации бактерий Т.ruber

132-4К 50-60 мин.

Морфолого-культуральные и физиолого-биохимические признаки. Бактерии грамотрицательные, неподвижные, содержат внутриклеточный каротиноидный пигмент оранжевого цвета. Размер клеток бактерий зависит от возраста культуры. В культуре 6-8-часового возраста, находящейся в переходной от логарифмической к стационарной фазе роста,.преобладают нитевидные клетки, длина которых достигает

120 мкм. В стационарной фазе роста

° клетки укорачиваются и представляют одиночные палочки размером 4-6 0,30,4 ì, Хорошо растет на жидкой и агаризованной среде (20%-ный картофельный отвар, 0", 5% пептона, 0,1Ъ дрожжевого экстракта, рН 7,6-7,8) при 55 С.

Отношение к температуре. Оптимальная температура роста на агаризованной среде 65ОCi минимальная 40 С, максимальная 70 С.

Пример. Культивирование продуцента щелочной фосфатазы — Т"- ruber 132- 4К проводят на качалке (240 об/мин) при 55ОС в конических колбах объемом 250 мл и 50 мл среды следующего состава: 203-ный картофельный отвар, 0,5В пептона, 6,13 дрожжевого экстракта, рН 7,5-7,8 до стерилизации.

Посевным материалом является культура указанных. бактерий 24-часового возраста, выращенная на агаризованной среде того же состава.

:Бактериями с одного косяка засевают две ферментационные колбы. Плитель нцсть выращивания культуры 8 ч. После 8 ч роста культуральную жидкость центрифугируют, а из полученной биомассы готовят бесклеточные экст-. ракты, разрушая клетки бактерий с .помощью деэинтегратора. Максимальная активность щелочной фосфатазы

В бесклеточном экстракте 33 mE при 60оC.

Таким образом, предложенный штамм обеспечивает синтез высокоактивной целочной фосфатазы на относительно дешевой питательной среде, что соответствует требованиям промышленносrè.

Тираж 523 Поцписное

Филиал ППП "Патент", r,ужгород,ул,Проектная,4