Способ количественного определения меланина

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАНИНА, включающий инкубацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием , отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определения , меланин инкубируют с 540i МОЗ М раствором нитросинего тетразолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО14ИАЛИСЧ ИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН. i I зсЮ С 01 Н 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 35821 21/28-13 (22) 16.04.83 (46) 07.08.84. Бюл. Ф 29 (72) В.А. Лапина, А.Е. Донцов и М.А. Островский (71) Ордена Ленина институт химической фиэики АН СССР (53) 616.07(088.8) (56) 1. К.S. Das, M.Â, Abramson, R. Katzman"J. of Neurochem, 1976, 26, Ф 4, р.р. 695-699 (прототип).. (54) (57) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАНИНА, включающий ННКу6ацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определения, меланин инкубируют с 5 10 10 М раствором нитросинего тетразолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.

11070

Вид

Меланин чернильного меш13,0

18,0

0,08

0,115 ка кальмара

0,175

27,0

0,05

0,12

4,0

9,0

ДОФА-меланин

15,0

0,20

ВЯИИПЯ Заказ 5751/31 Тираж 823 Подписное

Фщлиал ППП "Патецт", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к аналитической биохимии, а именно к способам определения концентрации пигментов меланинов,и может быть использовано в научно-исследовательской работе, а также в медицине для количественного определе-. ния синтетических и природных меланинов.:

Известен способ количественного определения меланина, включающий его выделение из биологического материала 0 инкубацию суспензии или раствора меланина с боргидридом натрия с последующим спектрофотометрированием при длине вопны 290 нм. Содержание меланина определяют по калибровочной кривой 15 в координатах: изменение оптической плотности вЂ” концентрация меланина в мкг сухого веса на 1 мл (I ).

Недостаток известного способавЂ” длительность определения. 20

Это связано с тем, что при обработке пробы боргидридом натрия образуются газовые пузырьки, которые удаляют нагре ванием пробы в водяной бане при 40 С в течение 2, 5-3, 5 ч и лишь затем проводят 25 спектрофотометрические изменения.

Цель изобретения - сокращение времени определения.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу количест- 30 венного определения меланина, включающему инкубацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием, меланин инкубируют с

5 -10 -10 M раствором нитросинего тетраэолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.

1 Способ осуществляют следующим образом.

Пробу содержащую меланиновый пиг 40 мент, добавляют к 5 -10 вЂ” 10- М раствору нитросинего тетразолия в диметилформамиде и инкубируют в течение 1015 мин. Затем добавляют дистиллированную воду для пРекращения Реакции. 4

Полученный раствор может стоять в течение нескольких часов беэ изменения интенсивности окраски. Количество образовавшегося формаэана измеряют спектрофотометрически при длине волны 520 нм. Концентрацию меланина рассчитывают по калибровочной кривой зависимости изменения оптической плотности образца от концентрации в нем меланина в мкг сухого веса на 1 мл.

Контролем служит проба, не содержащая ме53 2 ланина. Время определения меланина предложенным способом составляет 15-20 мин.

Рабочий раствор нитросинего тетразолия в диметилформамиде готовят непосредственно в день опыта и хранят в темной посуде,так как он светочувствителен.

Пример 1. Определение концентрации меланина чернильного мешка кальмара. Исследуемый образец меланина (4 мкг/мл) суспендируют в дистиллированной воде, 0,3 мл полученной суспензии добавляют в 1,5 мл 5 ° 10 М нитросинего тетразолия в диметилформамиде и инкубируют при периодическом встряхивании 15 мин. Затем добавляют

1,0 мл дистиллированной воды для прекращения реакции. Контроль вЂ” проба, содержащая 0,3 мл дистиллированной воды и 1,5 мл нитросинего тетразолия в диметилформамиде.

Результаты нескольких определений концентрации меланина кальмара приве- дены в таблице.

Пример 2.Определение концентрации синтетического ДОФА-меланина.

2 мкг/мл синтезированного ДОФАмеланина суспендируют в дистиллированной воде, 0,3 мл полученной суспензии добавляют к 1,5 мл 10 M нитросинего тетразолия в диметилформамиде и все последующие операции проводят как в примере 1.

Результаты определений приведены в таблице.

Предлагаемый способ позволяет ускорить определение меланина более чем в 19"."Раз по сравнению с известным.

Способ количественного определения меланина

Способ определения концентрации фибронектина в растворе // 1107051

Способ приготовления водородного ферментного электрода // 1107050

Способ диагностики инфаркта миокарда // 1107049

Способ отбора коров симментальской породы,устойчивых к маститу // 1105817

Способ окрашивания нейронов // 1104376

Способ определения сульфгидрильных групп в клетках крови // 1101739

Способ определения индивидуальной чувствительности к гипербарической оксигенации при лечении гнойно- воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области // 1101738

Способ подготовки гемосорбента к использованию // 1101737

Способ определения внутримозговых кровоизлияний // 1101713

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750