Способ исследования функциональной активности сердечной мышцы

 

СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ путем определения активности натрий-калий АТФ-азы с использованием уабаина, отличающийс я тем, что, с целью повышения физиологичности способа, исследование проводят на интактном перфузируемом сердце, при этом вначале определяют вес сердца/ а в перфузат добавляют хлорид натрия в концентрации 170-,200 мМ, далее ионометриЧески измеряют интенсивность поглощения ионов калия в оттекающем, перфузионном растворе, затем вносят в перфузат уабаин и повторно измеряют концентрацию ионов калия, а также скорость коронарного протока « и активность фермента определяют йо формуле (С, - С )- П А м активность АТФ-азы; А С, где концентрация ионов калия с добавлением уабаина; исходная концентрация (Л ионов калия; скорость коронарного протока; м . масса сердца.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 4(51) G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

N активность АТФ-аэы; концентрация ионов калия с добавлением уабаина1 исходная концентрация ионов калия; скорость коронарного протока1 .масса сердца. где A

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3547234/ 28-13 (22) 31.01.83 (46) 23.02 ° 85. Бюл. Р 7 (72) В.В.Алабовский, М.И.Кужман и О.Д.Олейников (71) Воронежский государственный медицинский институт им.Н.Н.Бурденко (53) 616 ° 07 (088. 8) (56) 1. Болдырев A.A. Транспортные аденоэинтрифосфатазы. Современные методы исследования, 1977,с.36-38 (прототип) . (54)(57) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СЕРДЕЧНОЙ

МЫШЦЫ путем определения активности натрий-калий АТФ-азы с использованием уабаина, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения физиологичности способа, исследование проводят на интактном перфузируемом сердце, при этом вначале определяют вес cepZ5rа, а в перфузат добавляют хлорид натрия в концентрации 170-,200 мМ, далее ионометрически измеряют интенсивность поглощения ионов калия в оттекающем. перфузионном растворе, затем вносят в перфузат уабаин и повторно измеряют концентрацию ионов калия, а также скорость коронарного протока 1 и активность фермента определяют йс формуле

1141337

М активность ATC-азы; концентрация ионов калия с добавление уабаина; исходная концентрация ионов калия; скорость коронарного протока; масса сердца. осуществляют следующим где А

С!

С

П

Способ образом.

Изолированное сердце животного (лягушки, крысы, морской свинки, кролика и т.д.) взвешивают и затем перфузируют раствором Рингера.—

Локка, в котором концентрация хлоИзобретение относится к области экспериментальной биологии, преимущественно молекулярной, а также клеточной и функциональной кардиологии, и может быть использовано при изучении процессов ионного транспорта через мембраны.

Наиболее близким к изобретению является способ исследования функциональной активности сердечной мышцы путем определения активности IO натрий-калий АТФ-аэы с использованием уабаина. Способ заключается в том, что сердечную мымру гомогенизируют, а затем в течение нескольких часов центрифугируют и экстрагируют мембранные фракции. Активность выделенного таким образом фермента оценивают по скорости накопления продуктов гидролиза АТФ (1), Недостатком известного способа являются невозможность определения активности Na-Ê АТФ-азы на целом, неповрежденном сердце, значительная ,трудоемкость, большая длительность процесса получения и измерения актив- 5 ности фермента, непригодность его для оценки активности фермента при паталогиях сердца.

Цель изобретения — повышение физиологичности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу исслецования функциональной активности сердечной мышцы путем определения активности натрий-калий АТФ-азы с использованием уабаина, Исследование проводят на интактном перфуэируемом сердце, при этом вначале определяют вес сердца, а в перфузат добавляют хлорид натрия в концентрации 170-200 мМ, далее ионометрически измеряют интен- 4О сивность поглощения ионов калия в оттекающем перфуэионном растворе, затем вносят в перфузат уабаин и повторно измеряют концентрацию ионов калия, а также скорость коронарного протока и активность фермента определяют по формуле (С,- С ) П

А рида натрия увеличена до 170-200 мМ! далее ионометрически измеряют интенсивность поглощения изолированным сердцем ионов калия в оттекающем перфуэионном растворе, после чего вносят в перфуэат 10 М .раствора уабаина и повторно измеряют в нем концентрацию ионов калия,а также скорость коронарного протока и активность фермента но формуле (c,— c ) ° rI

А (1) где А активность АТФ-аэы, мкМ/мин г;

С вЂ” концентрация ионов калия с добавлением уабаина, мкМ;

С вЂ” ис :îäíàÿ концентрация ионов калия,мкМ;

П вЂ” скорость коронарного про- тока, л/мин;

М масса сердца, r.

Пример. Перфуэируют изолированное сердце через аорту под давлением 8-8,3 кПа раствором Рингера-Локка, в котором концентрация хлорида натрия увеличена до 170200 мМ. Б оттекающем от сердца перфузате с помощью К+- селективного электрода измеряют концентрацию ионов калия. Затем серцце.продолжают перфузировать раствором того же состава, но имеющим ингибитор lla, К АТФ-азы уабаин в концентрации

10 М. Снова измеряют концентрацию ионоз калия в оттекающем от сердца перфузате. Расчет активности фермента производят по формуле (1) .

При использовании сердца крысы масой 0,9 г и скорости перфузии его раствором Рингера-Локка 0,012 л/мин концентрация ионов калия в оттекающем перфузате составляет 2810 мкМ в условиях, когда уровень хлорида натрия повышен до 170 мМ. При добавлении в этот раствор уабаина в количестве 10 М концентрация ионов калия в оттекающем перфуэате возрастает до 3180 мкМ. Отсюда активность натрий-калий ATC-аэы сердца крысы составляет 4,9.7 мкМ/мин г.

Использование способа определения

-активности натрий-калий АТФ-азы,дает возможность синхронно измерять активность фермента, физиологическое состояние сердца и его метаболизм, позволяет непрерывно в течение длительного периода времени изучать активность фермента, а также производить повторные измерений натрийкалий АТФ-аэы на одном и том же объекте, создает воэможность для скрининга новых лекарственных препаратов с целью выявления их способности влиять на активность натрийкалий АТФ-азы в целом сердце.