Способ определения влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛАЖНОСТИ В СУХИХ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОДУКТАХ путем введения активной добавки в пробу с последукнцей регистрацией физико-химического паргшетра, отличающийся тем, что, -с целью повышения точности и сохранения нативности препарата, в качестве добавки используют спиновую метку и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению с контролем определяют остаточную влажность в пробе. (Л с: ел о ел 00 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (! 1) sr. » (01 Н 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ДВтоЕСН0ММ CBNQETEJlbCTHУ

1 У

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ll0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3662904/28-13 . (22) 02.08.83 (46) 15.04.85. Бюл. )р 14 (72) В.В. Кочетков, Г.И. Лихтенштейн, В.В. Панферов и Э.Ф. Токарик (71) Отделение ордена Ленина инсти,тута химической физики AH СССР и Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (53) 616.07(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

В 161521, кл. G 01 И 33/16, 1962.

2, Авторское свидетельство СССР

У 340966, кл. G 01 N 33/48; 1972.

3. В.А. Климова. Основные микрометоды анализа органических соедине ний. И., "Химия", 1975, с. 153. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛАЖНОСТИ В СУХИХ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОДУКТАХ путем введения активной добавки в пробу с последующей регистрацией физико-химического параметра, о т л и ч à ю шийся тем, что, -с целью повышения точности и сохранения нативности препарата, в качестве добавки используют спиновую метку и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению с контролем определяют остаточную влажность в пробе.

1150538

1О

20 ф ф р

Однако данный способ имеет невысокую точность определения остаточной влажности и, кроме того, связан с облучением образца светом, что может привести к повреждению интакт- <О кости некоторых светочувствительных биологических препаратов. известен способ определения остаточной влажности в сухих и лиофили- 45 зированных биологических продуктах 31

Сущность известного способа сос.тоит в том, что остаточная влажность образца определяется с помощью специального реактива титрованием. 50

Однако известный способ не достаточно точен, требует длительного времени, трудоемок и не применим в массовом промышленном производстве.

Кроме того, после анализа образец становится не пригодным для дальнейшего использования.

Изобретение относится к исследованию и анализу биологических веществ, а именно определению остаточной влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах, и может быть использовано в медицине и сельском хозяйстве.

Известен способ определения остаточной влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах f1) .

Сущность этого способа заключается в том, что предлагается электронное устройство для определения интенсивности испарения влаги при сушке биологических материалов.

Недостатком этого способа является то,. что он не позволяет измерять остаточную влажность сухих и лиофилизированных биологических продуктов при длительном их храненИи и непосредственно перед использованием.

Известен способ определения остаточной влажности в сухих и лиофили- 25 эированных биологических продуктах )2), Сущность известного способа заключается в том, что для определения остаточной влажности биологических продуктов к ним добавляют люминесцентные красители и после облучения пробы светом измеряют интенсивность фосфоресценции красителя в ос о оскопе.

Цель изобретения — повышение точности, сохранение нативности препарата.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах путем введения активной добавки в пробу с последующей регистрацией физикохимического параметра, в качестве добавки используют спиновую метку и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению с контролем определяют остаточную влажность в пробе.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробу вводят иминоксильный радикал и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).

На фиг. 1 приведен спектр спиновых меток на высушенных образцах вакцины против ньюкаслской болезни кур при 30оС обобщенный вид, а также приведены параметры спектра

ЭПР, используемые при построении калибровочного графика зависимости параметра h1/А от относительной влажности образца, который приведен на фиг. 2.

Для определения остаточной влажности испытываемого образца необходима снять спектр этого образца на ЭПР-спектрометре, измерить по этому спектру отношение параметров

hi/A < и на калибровочном графике (фиг. 2) измерить значение относительной влажности данного образца.

Контрольные измерения, проведенные для экспериментальной проверки результатов, полученных при измерении остаточной влажности согласно предлагаемому способу, показали следующее. Точность измерения повышается вследствие того, что измерения по известному способу требуют приготовления многокомпонентного реактива Фишера, составные части которого тщательно очищаются, взвешиваются и не должны контактировать с водой, в то время как предлагаемый способ заключается в одном измерении параметра спектра ЭПР спиновой метки на спектрометре. Процесс измерения остаточной влажности по известному способу приводится в специальных боксах титрованием определенной

1150538 навески препарата, что вносит дополнительные ошибки при взвешивании и титровании и снижает точность получаемых результатов. Для приготовления реактива Фишера, используемого в известном способе, требуются

1 сут. Реактив Фишера неустойчив при хранении (7 сут) и требует постоянного обновления. Непосредственно для проведения определения остаточной влажности препарата титрованием навески готовым реактивом

Фишера необходимо около 30 мин.

Для регистрации спектра ЭПР одного образца согласно предлагаемому способу требуется 1 мин. Измерения параметра h /А, можно проводить с очень большой точностью с помощью прибора (сп ктрометра), что, однако не увеличивает время регистрации.

Введение спиновых меток в испытываемые образцы согласно предлагаемому способу не повреждает нативность препаратов, которые в дальнейшем могут использоваться по назначению, поскольку спиновые метки обладают низкой токсичностью.

Пример. Готовят экспериментальные серии эмбриональной вакцины против ньюкаслской болезни кур в чистом виде. К каждому образцу серии добавляют раствор спиновой метки (можно использовать спиновые метки любой химической природы) из расчета, чтобы конечная концентрация спиновой метки в растворе составляла 10 моль/л . В данном примере была использована спиновая метка следующей струк1 туры:

Ф

О

Смесь вакцины и спиновой метки выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем подвергают

;лиофильному высушиванию обычным способом на промьшшенной установке.

По ходу высушивания извлекают из установки контрольные образцы и оп ределяют в них остаточную влажность по методу (3) с помощью специального реактива (реактив Фишера). Па15 раллельно в этих же образцах измеряют параметр Ь,/А<спектра ЗПР спиновой метки (фиг. 1). По результатам этих измерений строят калибровочный график зависимости параметра h /A спектра

ЭПР спиновой метки от остаточной влажности для данного препарата вакцины (фиг. 2). Этот калибровочный график для данной спиновой метки и данного вида лиофилизированного

25 препарата может служить в дальнейшем для определения остаточной влажности в хпббом количестве образцов, содержание воды в которых неизвестно.

Предлагаемый способ позволяет осуществлять контроль остаточной влажности препаратов во время проведения процесса высушивания, поскольку время проведения анализа очень мало. Предлагаемый способ позволяет определить остаточную влаж35 ность в сухих и лиофилизированных биологических продуктах самой различной природы с очень высокой точ-ностью, с небольшими затратами времени и реактивов, не повреждая ин тактности испытываемого продукта.

1150538

Составитель С. Котелевцев

Редактор С. Лисина Техред Л.Микеш Корректор E. Сирохман

Заказ 2134/33 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4