Способ получения антибиотика-макролида

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА-МАКГОЛИДА общей формулы СНз ОН N-СНз СНз (Л i ООН с dH источники азота и углерода и минеральные соли, выделяют целевой продукт, где Q СНО и при необходимости переводят его химичег КИМ восстановлением в соединение, 01 где GJ-CHgCffl и/или переводят этерификадш в ащшьный сложный 1 эфир. knM QO

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

4(St) ..С 12Р 1 Об

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНЙЯ

К ПАТЕНТУ

СН

НО-CHg НЗ 2

0Н

Сн

О (21) 3345998/28 — 13 (22) 09.06.81 (31) 156854 (32) 12.06.80 (33) США (46) 15.04.85. Бюл. У 14 (72) Ричард Генри Балтц, Джен Мериел Вилд, Юджин Томас Сено. и Герберт Эндрю Керст (США)

О где Й вЂ” СНО, или СН ОН, или ацильный .сложный эфир при этом, когда в положении

3 в молекуле 0-ацетильная группа, то в положении

4 отсутствует 0 иэовалериановая группа, заключа"ся в том, что штамм Streptomyces f radiac

1. 12170 выращивают в глубинных аэробиьтя условиях в питательной среде, содержащей

„„SU„„1151 8 А (71) Эли Лиллн Энд Компани (США) (53) 615,779.931 (088.8) (56) 1. Tetrahedron Letters 2339, 1970 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА — МАКРОЛИДА общей формулы источники азота и углерода и минеральные соли, выделяют целевой продукт, где Q--ОНО и прн необходимости переводят его химичег ким восстановлением в соединение, где Q — СНтОН и/или переводят путем этери фикацин в ацильный сложный эфир.

1 1151218 2

Изобретение относится к микробиологичес- целыо изобретенная является получение анкой промьпцленности и касается получения тибиртика, подавляюгцего микроорганизмы, антибиотика-макролида с макроциклическим патогенные для животных, в частности облалактонным кольпом. дающего активностью в отношении грам-лоло

Известен способ получения антибиотика ти- 5 жителыйях микроорганизмов и микоплазм. лозина, обладающего опнеделенным антимикробным спектром (1). Эта цель достигается созданием способа поОднако известный антибиотик обладает огра.:. лучения антибиотика-мякролида общей форму" ниченным спектром антимикробного действия. .л

1 — 9

О OH «Н, 1

О

ОН

ЕН3

ОН

0,13 где Я- CHО, или СН ОН, или ацильный слож-иьй эфир, при этом, когда в положении 3 в, молекуле 0-ацетильная группа, то в положении

4" отсутствует О-иэовалериановая группа, в . котором штамм Streptomyces fradiae NRRL

12170 выращивают в глубинных аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники азота и углерода и минеральные соли, выделяют целевой продукт, где 0-CHО и при 30 необходимости переводят его химическим вос. становлением в соединение, где Q— - CH OH и/или переводят путем этерификации в ацильный сложный эфир.

Для осуществле пи способа используют. штамм 35

Streptomyces fradiae, который хранится в коллекции ИЯЯ1 под номером 12170 и получен с помощью мутагенеза.

Культурально морфологические признаки.

Спорофозы -RA, цепи спор р 10, поверх- 40 .ность. спор гладкая, форма сферическая. Бульон с трилтон-.дрожжевым экстрактом

Н 2 (ESP) .

Рост хороший, обратная сторона колоний желтая, воздушный мицелий хорошо развит, белый растворимый пигмент осутствует.

3SP М 3. Рост плохой, обратная сторона колоний белая, воздушный мицелий — следы, растворимый пигмент отсутствует.

0SP N 4: Рост хороший, обратная сторона колоний желтая, воздушный мицелий плохо развит, растворимый пигмент отсутствует.

DSP 1ч б. Рост хороший, обратная сторона колоний желтая, воздушный мицелий и 55 растворимый пигмент отсутствуют.

2SP N 7. Рост хороший, обратная сторона колоний желтая, воздушный мицелий хорошо развит„растворимый питмент светлокоричневый, серый.

Са-малат, Рост плохой, обратная сторона колоний белая, воздушный мицелий и расторимый пигменг отсутствуют.

Среда Чапека. Рост значительный, обратная сторона колоний желтая, воздушный мицелий — следы, растворимый пигмент отсутствует.

Томатная паста — овсяная мука. Рост . хороший, обратная сторона колоний желтая.

Физиолого- биохимические свойства.

Усваивает глюкозу, Р-арабинозу, Д-фрукто-. зу, Д-.галактозу, иэо-инозий, Д-маннит, .са- хар, Д-ксилозу, Д-рамнозу.

Не усваивает раффиноэу, салицин. Жела-. тин разжижает, молоко не сбраживает, крахмал гидролизует, каталаза положительная, устойчивость к хлориду натрия — 4%, фосфатаза положительная, уреаэа отрицательная.

Диапазон рН роста 6,1 — 7,8.

Диапазон температур роста 10 — 30 С.

Чувствительность к антибиотикам, хлорамфеникол, цефалоридин, тетрациклин, ванками. цин — 30 мкг, стрептомицин 10 мкг — чувствителен, слабочувствителен -- эритромипин

15 мкг, полимиксин Б — 300 ед: нечувствителен к линкалицину.

Антагонистические свойства. Обладает антимикробной активностью в отношении:

Организм мкг/мл

Streptococcus pyogenes С вЂ” 203 0,25

Streptococcus pneumo— п1ае Napu

$тгeptococcus bug (гр0) 282 0,5

1151 l 22

45

Инокулированную ферментативную среду 50 иикубируют в 50 мл бутылочках при 29 С

tt течение примерно 6 дней в закрытой трясучке, совершающей 300 об/мин.

Ферментация ДМТ в ферментерах.

Чтобы получить большой объем инокулята, 55 берут 1200 мл инкубированной среды и инокулируют 946,4 л (250 галлонов) растительной среды второй стадии, имеющей следующий состав, %:

Staphy1 ococcus aureus

3055 1,0

Staphy1ococcus aureus

209Р 0.25

Pasteuret1a mu1tocide 3,1 2 5

Pasteure11a hemo1yt ica l 2,5

Mycop1asma ga11 isept irum 0,097

Mycop1asma hynpneumon (ac 0,195

Mycop1asma hyorh inI s 0,78

Способ получения антибиотика 3--демицино- 10 эилтилозина (ДМТ) и его произв(адных иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Ферментация ЛМТ ао встряхиваемой колбе.

Лиофилиэованные таблетки St reptomyces

fradiae NRRL 12170 диспергируют в 1--2 мл стерилизованной воды. Часть этого раствора (0,5 мл) используют для инокуляций растительной среды (150 мл), имеющей следующий состав,%:

Зерновая настойка 1,0

Экстракт дрожжей 0,5

Соевая мука грубого помола 0,5

Карбонат кальция 0,3

Соевое масло (неочищенное) 0,45

Обессоленная вода 97,25

С другой стороны, растительную культуру

Streptomyces fradiae NRRL 12170,, сохраняемую в )-миллилитровых объемах в жидком азоте, быстро оттаивают и используют для инокуляции растительной среды. Инокулированную растительную среду выдерживают в 500 мл колбах

Эрленмейера при 29 С и в течение 48 ч она находится в закрытой трясучке, совершающей

300 об/мин.

Эту инкубированную растительную среду (0,5 мл) используют для инокуляцни 7 мл продуцируюшей среды, имеющей следующий состав,%;

Свекольная патока 2,0

Зерновая мука ),5

Рыбная мука 0,9

Пшеничная клейковина 0,9

Хлорид натрия 0,1 (ИН„) НРО 0,04

Карбонат кальция 0,2

Соевое масло (неочищенное) 3,0

Обессоленная вода 91,36

Зерновая настойка 1,(2 (;оевая масляная мука 05

Дрожжевой экстракт 0,5

Карбоиат кальция 01, Соевое масло (неочи(ценное) (2,5

Лицегин (неочищенный) 0,015

Вода 97,185 рН сречы доводя до 8,5 добавлением

50,ь-ного раствора едкого патра.

Эту растительную среду второй стадии инкубируют в ферментере емкостью 1325 л (350 галлонов/в течение примерно 48 ч при

28 С при умеренном аэрировании и переме,о щи ванин.

Приготовленную инкубированную среду второй стадли (545 л, т. е. 144 галлона) используют для инокуляции 3785,4 л (1000 галлонов) стерильной ферменгационной среды; имеющей следующий составЯ

Рыбпая л ука 0,875

Зерновая мука 1,5

Зерновая клейковина 0,875

Карбонат кальция 0,2

Хлорид натрия 0,1 (МН 2) 2 Нро 4 0,04

Свекольная патока 2.0

Соевое л(асло (неочишенное) 3,0

Лепитин 0,09

Вода 91,32 рН регулируют до 7,2 добавлением 50%ного раствора едкого натра.

Инокулированная продуцирующая среда сбраживается в 6057-литровом ферментере (1600 галлонов) в течение 8 — 9 дней при

28 С. Бродящую среду аэрируют стериальным о, воздухом, поддерживая концентрацию pactвореиного кислорода в пределах примерно

30 — 50%, и перемешивают стандартными мепллками со скоростью вращения 250 об/мин.

Пример 2.. Выделение ДМТ.

Культуральную жидкость (3800 л), полученную в соответствии с примером 1, фильтруют используя мелкий порошок. Мицелиальную лепешку промывают водой, а зти водные промывки. добавляют к фильтрату. рН фильтрата доводят до 9,2, йспользуяГ..

50%-ный раствор едкого патра (0,5 л) филтрат затем экстрагируют 200J л этилацетата., К этилацетатному экстракту добавляют 450 л обессоленной воды и 6,4 кг одноосновного фосфата натрия и полученный раствор тп(атель но перемешивают. рН раствора регулируют примерно от 6,0 до 4,35, используя раствор фосфорной кислоты (3300 мл, 2 ч воды иа

) ч фосфорной кислоты). Водную фазу отделяют. рН обогащенной водной фазы доводят

1151?18. до 6,5, используя 50%-ный водный раствор едкого патра (700 мл).

Полученный раствор концентрируют до объема примерно 225 л в вакууме. рН этого концентрированного раствора доводят до

9,2, добавляя 10%-ный водный едкий натр . (26л)., Полученный щелочной раствор выдерживают в течение восьми часов. Выделяющиеся . кристаллы отфильтровывают, промывают обессоленной водой (50 л) и сушат, получая при- 10 мерно 8,6 кг продукта. Часть полученного продукта (3 кгj .подвергают перекрнсталлизации из смеси ацетона — воды и получают примерно 2,07 кг ДМТ свободного основания. 15

ДМТ размягчается, примерно при 132 С о н медленно плавится примерно до 150 С;

Анализом установлено, что ДМТ приблизительно имеет следующий состав,%: углерод 61, водород 8,5, азот 2, кислород 28, следуюгцую 20 эмпирическую формулу: С Н N "О а также молекулярную массу примерно

742 (741 по данным масс спектрометрии).

Максимумы поглощения приходятся на следующие частоты (см""): 3634 (очень малый), 25

3559 (с уступом), 3423 (широкий), 2955. (интенсивный), 2907 (интенсивный), 1710 (интенсивный), 1676 (с у стулом), 1588 (интенсивный), 1447 (с уступом), 1396 (с уступом), 1359 (малый), 1309 .(очень малый),30

1178 (c уступом), 1156 (интенсивный), 1111 (c уступом), 1073 (с уступом), 1048 (интенсивный), 1013. (c уступом), 984 (с уступом), 926 (очень малый), 898 (очень малый) и 833 (очень малый).

УФ-спектр поглощения ДЫТ в нейтральном этиловом спирте обнаруживает максимум" . 1 /о поглощения при 283 нм (E 22296: — Е,.„—

= 300,9).

ДМТ-свободное основацие имеет следующее удельное вращение: () о — 53,50 (c 1, СНчОН)

Электрометрическое тнтрование ДМТ в

66%-ном водном димепшформамиде указывают на наличие титруемой группы с рК,„примерно 7,25.

ДМТ-основание является растворимым в роде и в большинстве полярных органических растворителях, таких как ацетон, метанол, . этанол, диметилформамид, хлороформ„диме50 тилсульфоксид. ДМТ-соли-аддукты кислот лучше растворяются в воде, чем ДМТ-основание.

Пример 3. Получение ОМТ(5-0-микоминозилтилонолида) .

ДМТ, приготовле шый в соответствии с методикой примера 2, растворяют в разбав ленной соляной кислоте (соляную кислоту добавляли к воде до рН раствора 1,0), Получсннь1й раствор выдерживают в течение

24 ч при комнатной температуре и затем рН регулируют до 9,0 добавлением едкого натра.

Этот щелочной раствор экстрагируют этилацетатом, пихлорметаном или хлороформом.

Экстракт сушат под вакуумом и получают.

Пример 4. Получение OMT.

ДМТ (500 r) приготовленный в соответствии с примером 2, измельчают в ступе и добавляют к обессоленной воле (1,5 л); рН поддерживают в пределах 3,5 — 7,5 при необходимости добавлением серной кислоты.

Через 30 мпн весь ДМТ растворялся, рН раствора затем доводят до 1,4 и выдерживают раствор в течение 42 ч при 22 С. После стандартной обработки получают 366 г ОМТ, идентичность которого была подтверждена . сопоставлением с тонкослойной хроматографией известной пробы.

Пример 5. Получение дигидро-ДМТ (20-дигидро-23-демицинозилтилозш|а) .

50 мг ДМТ, приготовленной в соответствии с примером 2, растворяют в водном растворе изопропилового спирта. (примерно 40%, 25 мл). В 30%-ном водном. растворе изопро-, пилового спирта растворяют 20 мг борогидрида натрия. 1 мл раствора борогидрида натрия добавляют к раствору, содержащую

ДМТ. Полученную смесь перемешивают в течение 5 мин, рН регулируют до 7,5, добавляя фосфорную кислоту, и затем концентрируют в вакууме для удаления изопропилового спирта..Затем к полученному водному концентрату добавляют воду до объема 25 мл, а затем добавляют 50 мл хлороформа. рН" водной фазы регулируют до 7,5. После экстракции отделяют хлороформ и вьшаривают досуха в вакууме, в результате чего получают дигидро-ДМТ.

Пример 6. Получение дигидро-ОМТ (20-дигидро-5-0-микалиноэтилтилонолида) .

Дигидро-ДМТ, полученный в соответствии с примером 5, обрабатывают способом, описанным в примере 3, н получают дигицроОМТ.

11 р и м е р 7. Альтернативное получение

OMT.

ОМТ получают из ДМТ путем обработки

ДМТ в ферментативном бульоне, в котором его готовили в присутствии слабой кислоты в соответствии с примером 3. Выделение

OMT достигалось процедура, аналогичной той, которая описана для ДМТ в примере 2.

Пример 8. 2 -О-Лцетил-ДМТ.

10 r ДМТ (13,5 ммоль) растворяют в

260 мл attåòîöa и обрабатывают уксусным ангидридом (1,6 мл, 15,7 ммоль), добавляя по каплям при перемешивании при комнатной температуре. После перемешивания в течение

7 1151218

18 ч растворитель выпаривают при понижен- (б) 5:4 толуола к зтнлацетату (300 л1л) ном давлении. Остаток растворяют в 200 мл и (н) 1:I толуола к этилацетату (1000 мл). зтилацетата и экстрагируют насьпценным раст- Получают 2,5 r (72%) 2; 23-ди-О-и опиовором бикарбоната натрия(2 х 200 мл). нил-ДМf.

Органический раствор сушат над сульфатом 5 Пример l2, 2- О-Ацетил-23-О-лропнонатрия, фильтруют и выпаривают. Остаток нил-ДМТ. растворяют в малом объеме этилацетата, за- В 180 мл метиленхлорпда в 15 мл пиригружают в колонку с силикагелем (Вотерс . дина растворяют 6 г (7,7 ммоль) 2 -ОПреп 500) и элюируют зтилацетатом (4л), -ацетил-ДМТ и обрабатывают 1,2 мл

Фракции, содержащие целевой продукт, иден- 10 (9,2 ммоль) ангидрида пропионовой кислоты

H . .KHcJTGThI тифицируют методом тонкослойной хроматогра- добавляемого по каплям при комнатной фии объединяют и выла ивают ос ха

I температуре. После перемешивания в течение

17 ч раствор разбавляют 300 мл толуола и

П име выпаривают досуха при пониженном давлении.

Аналогичным спосббом 6,0 r (8,1 ммоль) >5 Остаток растворяют в толуоле и экСтрагиДМТ в 120 мл ацетона обрабатывают 1,2 мл руют пасьпценным раствором бикарбоната нат- (о

9,2 ммоль) ангидрида йропионовой кисло- рия. Толуольный слой суша ф сушат над сульфатом . ты, После обработки и хроматографирования натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток выделяют 3,7 г (57%) 2 -О.-проционил-ДМТ. растворяют в малом объеме толуола, загруП р р, -Д t- ацетил-ДМТ 20 жают в хроматографическую колонку с силиП р и м е 10. 2 23-Ди-О-ацетил-ДМТ.

3 r ДМТ (4,05 ммоль) аство яют в

) растворяют в кагелем (300 мл), заполненную толуолом90 мл хлористого метилена и 7,8 мл пири- зтилацетатом (: и злюируют одним литзтилзцетатом (i:1) дина и обрабатывают 1,4 мл (13,7 ммоль) ром указанного растворителя. Фракции, соангидрида уксусной кислоты, добавляемого держащге целевой, ф по каплям при перемешивании при комнат- 25 методам тонкослоГ ной температуре. После перемешивапия в те- няют, выпаривают при пониженном давлении чение 17. ч раствор -разбавляют 15 мл толуола и получают 4,5 r (70%) 2 -О-ацетил-23.-0-про- и растворители выпаривают при пониженном . пионил-ДМТ. давлении. Остаток растворяют в малом объеме ll р и м е р 13. 2 -О-П

2 -О-Пропиойил-23-0этилацетатом, загружают в колонку с силика- Зп -ацетил-дМТ. гелем (Вотерс Преп 500) и элюируют четырь . p,íà÷îrtt÷í об б б .налогичлым образом обрабатывают 2 -О.2 О мя литрами зтилацетата, получая 2,1 г сыр" -лропполил-ДМТ (1,5 г, 2 ммоль) в хлорисго продукта. Этот материал растворяют в том метилене (45 ) 3,9 минимальном объеме толуола, загружают в с помощью О 3 мл (2,9 хРоматогРафическУю колоннУ с силикагелем с- о; кнслоть1) По (300 мл) и элюируют (а) 3:1 толуола к на слллкагеле (Вотерс Преп. 500) вьщеляют этилацетату (300 мл), (б) 5:4 толуола к этилацетату (600 мл) и (в) 1:1 толуола П р н м е р 14. 2 -0-Ацетил-23-0-фенил- к этилацетату . (1000 мл). Фракции, содер- ацетил-ДМТ. жащие целевой продукт, анализируют тонко40

1 .слойной хроматографией, объединяют и вы- 2 О-Метил-,9fT (26,5 r, 3,5 ммоль) паривают досуха, получая 1,6 г (64%) 2,23- растворяют в 75 мл хлористого метилена дигидро-О-ацетил-ДМТ. и 0,8 мл пирпдцла и обрабагывают раствором

0,56 мл (3,5 ммоль) фенплацетилхлорида и

П име 11.2 -Д-Р р .,23-Ди-О-пропионил-, 13 мл хлористого метилена, добавляемых по

- -3ЩТ.

45 каплялt при перемешинании. при комнатной температуре. Спустя 1,5 ч смесь обрабатывают

В 90 мл метиленхлорида и 7,8 мл пи и> p дополнительным количеством фенилацетилхло- дина растворяют 3 .r ДМТ (4,05 ммоль) ! рида (0,56 мл) в хлористом метилене (13 мл). и о ра атывают, мл (13,8 ммоль) ангид(13,8 ) - Спустя ettte 1,5 ч исходный материал был рица пропионовой кислоты; добавляемого по израсходован (установлено тонкослойной х окаппям при перемещивании при комнатной (р матографией). Затем раствор выпаривают дотемпературе. После перемешилания в течение суха при пониженном давлении, остаток расгночи добавляют 15 мл толуола, и раство р р воряют н хлористом мстилене и экс аги выпаривают досуха про пониженном давлении. тр р угу

° насыщенным раствором бнкарбоната на ия.

Остаток растворяют в 20 мл толуола загру- 55 О " у . ад. фатом н трганический слой сушат над. с льфатом н тл" у "" p фи тру пр а доу " ™ ерк о, мд) и элюируют ток растворяют в толуоле и хроматографиру(а) 3:1 толуола к зтилацетату (300 мл), ют на силикагельной колопке (Вотерс Преп

Ц

IIS12

500).:)кеграгироиание нрг>т>опят при линейном градиенте толуола (4 л) и этилаиета>а (4 л) при соотношении I:). Фракпии, содержаи(ие пеленой продукт, обьепи як>т и в>ит>аривают, получая 1,! г (35%) 2 -О-Ацегич-23-О-фенилацг гил-ЛМТ. Из предшсствунипих фракций также было получено 0,86 r (24%) 2 -О-ацетил>

-23,4-ди-0-фенилапетил-ДМТ.

Пример 15. 2 -О-Ацетил-23-пропионил-JIMl (1,6 г, 1,9 ммоль) растворяют в !О

95!-лом метаноле (80 мл) и ттеремешивак>т при комнатной температуре в течение 42 ч.

Раствор выпаривак>т досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в малом объеме толуола, загружают в хроматографи- 15 чсскук> колонку с силикагслсм (E. Мерк 60, 200 мл) и элюируют 2 л толуола-этилацетата (1:1), Фракции, содержащие целевой продукт, идентифицируют методом тонкослойной хроматографии, объединяют и выпаривают при тгони эр женном давлении, получая 1,2 r (79/о) 23-0-пропионил — ЛМТ.

Пример 16. 23-0-Фенилацетил-ДМТ.

0,6 г (0,67 ммоль) 2-О-апетил-23-0-фенилапетил-JlMT растворян>т в 80%-ном водном э5 растворе (50 мл) и энергично кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч. РастВор охлаждая>т до комнатной температуры и выпаривают досуха при пониженном давле-. нии, получая 0,39 г (68%) 23-О-фенилацетил- 30

-ДМТ.

Пример 17. 23,4 -ди-О-Фенилацетил.E1MT.

2 - О- Ацетил-23,4 -ди-О-фенилацетил-ДМТ (0,36 г, 0,36 ммоль) растворяют в 80%ном водном метаноле (30 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч. Раствор охлаждают до комнатной температуры и выпаривают досуха при пониженном давлении, >> получая 0,29 r (84%) 23,4 -ди-0-фенилапетил- 4

-ЛМТ.

Пример 18. 2 -О-Ацетил-3,23,4 -три>(-0- п гэпиони>т-ЛМТ.

2 -0- Аиетил-ЛМТ (2 r, 2,6 ммоль) растворятот в 40 мл ацетона и 8 мл пиридина и обрабатывают раствором 40 мл ангидрида дропионовой кислоты в 20 мл ацетона, добавляя его по каплям при перемешивании и комнатной температуре. Перемешивание осуществляют в течение 5 дней, смесь выпаривают при пониженном давлении. Остаточное масло растворяют в этилацетате и экстрагируют насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток растворяют 55 в малом объеме толуола и хроматографируют на силикагеле (Вотерс, Преп 500). Колонку з;неируют при линейном градиенте толуола!

О

l8 (4 л) и этилапетата (4 л). Фракции, содержа. шие целевой продукт, объединяют, выпаривают и получа>от 1,4 r (57 %) 2-0-апетил-3,23,4 -O-, IP

° пропионил- JIMT.

Пример !9. 3,23,4 -Три-0-нропнонил-J1MT. я

2-,0-Апетил-3,23,4 - три- О-пропионил-ЛМТ (0,7 r, 0,74 ммоль) растворяют в 80%-ном водном метаноле (55 мл) и кипятят с обраттиям холодильником в течение 5 ч. Раствор охлажпак>т и затем вьшаривают до водного при пониженном давлении. Продукт экстрагируют хлористым метштеном, органический слой отделяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и вьщариватот при пониженном давлении досуха, получатот 0,38 г (56%) 3,?3,4 -три-О-пропионил-ЛМТ.

Пример 20. 2,4,23-Три-О-ацетил.ЛМТ.

I0,О г ЛМТ (13,5 ммоль) растворяют в

I5O мл пиридина и обрабатывак>т 5,8 мл (60,7 ммоль) уксусного ангидрида при перемепптвании при комнатной температуре. После перемешивания в течение ночи растворитель выпаривают при пониженном давлении. Остаточное масло растворяют в дихлорметане и экстрагируют насыщенным .бикарбонатом натрия; органический слой отделяют, сушат нап сульфатом натрия, фильтруют и выпариваь7т при пониженном давлении. Остаточный материал хроматографируют на силикагеле (Вотерм Преп, 500), элюируют при линейном градиенте смеси толуола (4 л) и этилацетате и этилапетата (4 л) при соотношении 3:l. Фракции, содержащие целевой продукт, идентифицируют топкослойной хроматографией, объединяют и выпаривают при пониженном давлении, получают 4,5 r

2,4 -23-три-О-ацетил-Е1МТ.

Пример 21. 2 -О-Ацетил-23-О-фенокснацетил-ДМТ.

2 -О-Ацетил-ДМТ (2,75 г, 3,5 ммоль) растворяют в 75 мл дихлорметана и 0,8 мл пиридина и обрабатывают раствором 1,2 мл (88 ммоль) феноксиацетилхлорида в 25 мл дихлорметана, добавляя их по >;аплям при перемешивании и комнатной температуре.

Через один час реакционную смесь выливают в насыщенный раствор бикарбоната натрия (200 мл) и отделяют органический слой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении. Остаточную твердую пену загружатот в хроматографическую колонку с силикагелем, продукты разделяют и элюируют используя толуолэтилацетат (1:1) в качестве растворителя.

1,5 r 2 -О-ацетил-23-0-феноксиацетнл-ДМТ.вы> деляют вместе с 0,55 г 2 -О-апетил-23,ч -ди-! ф

-О-феноксиацетил-ДМТ и 0,03 г 2 -О-ацетил-3,23-ди- О- феноксиацетил- ДМТ.

115 2!8

Составитель Г, Смирнова

ТехРед М.Пароцай Корректор А. Тяско

Редактор С. Тимохина

Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Заказ .2992

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

П р и е р 22. 2 -0-Ацетил-23-0-(пара-хлорфенчлапетил) -ДМТ.

Лара -хлорфенилуксусную кислоту (4,3 г, 25 ммоль) и 1-оксибензотриазол (5,4 r, 25 ммоль) растворяют в 150 мл тетрагидро фурана. Раствор охлаждают в ледяной бане и обрабатывают 5,2 r (25,3 ммоль) дициклогексилкарбодимида. Реакционную смесь перемешивают при О C в течение 3 ч и затем помещают в холодильник на ночь. Смесь фильтруют, и фильтрат выпаривают при пониженном с

:давлении. Остаток растворяют в ацетоне (75 мл), фильтруют и обрабатывают 10 г (12,8 ммоль) 2 -0-ацетил-ДМТ и 0,87 г (!2,8 ммоль) имидазола. Добавляют ацетон до объема 1235 мл и затем добавляют

1,87 мл (12,8 ммоль) триэтнламина. После перемешнвания в течение 20 ч при комнатной температуре растворитель выпаривают при пониженном давлении, остаток загружают в коло щу с силикагелем и злюируют при градиенте толуола-этилацетата (4:1) и одного этилацетата. Получают 4,75 r 2 -0-ацетнл/

23-0- (пара-хлорфенилацетил) -ДМТ. и

Пример 23. 2 -0-Ацетил-4 -0-пропионил-ДМТ.

2 -0-Ацетил-ДМТ (1,0 г, 1,3 ммоль) растворяют в 30 мл пиридина и раствор обрабатывают 0,6 мл (4,6 ммоль) пропионового ангидрида, добавляемого по каплям при пе5 ремешнвании и комнатной температуре. Через 20 ч добавляют 3,0 мл (23 ммоль) проционового ангидрида и реакционную массу пере. мешивают в течение последующих 26. ч при г комнатной .температуре. Смесь разбавляют

30 мл толуола н при пониженном давлении выпаривают растворителн. Остаточное масло растворяют в 50 мл дихларметане и экстрагируют насыщенным раствором бикарбоната натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток загружают в колонну с силикагелем (BozepcI

Преп 500) и элюнруют при линейном градиенте толуола (4 л) н этилацетата (4 л).

Сначала элюнруют 305 мг 2 -0-ацетил-34

Ф -ди-О-пропионил-ДМТ, а затем 286 мг 2 -О-atte-. я

20. тнл-4 -О-пропионнл-ДМТ.

Предлагаемый способ позволяет получить антибиотик, обладающий определенным спектром антимнкробного действия, н может быть

25 использован для лечения сельскохозяйственных и друтих жвиотных..