Способ удаления липопротеидов из сыворотки крови

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) ЖРу, 13

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 359045 1 /28-1 3 (22) 13.05.83 (46) 23.01.86.Бюл. Кд 3 (71) Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт медицинской лабораторной техники (72) А.Н. Галушкин, С.Б ° Лебедева, В.В. Меньшиков, Е.H. Гаранина и В.П. Иванова (53) 547.15(088.8) (56) Методические указания по осуществлению контроля качества работы клинико-диагностических лабораторий.

Материалы о состоянии и перспективах развития лабораторной клиникодиагностической службы в стране.

Приказ МЗ СССР Р 380, 1975, с. 125.

Уайт А. и др. Основы биохимии.

Перев. с англ. Под. ред. акад. .Ю.А. Овчинникова. М.: Мир, 1981, т.2.

Семенов Н.Б. Биохимические компоненты и константы жидких сред и тканей человека. N. Медицина, 1971.

Титов В.Н. и др. Предложения по унификации методов определения холестерина в альфа-липопротеидах и их диагностическая значимость. В кн.:Унификация лабораторных методов исследования. Под ред. проф. В.В.Меньшикова. М., 1980, с. 3. (5D4 С 01 N 33/50//В 01 D 21/26 (54)(57) СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИДОВ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ, предусматривающий центрифугирование сыворотки и отбрасывание сконцентрированных на ее поверхности липопротеидов, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения. полноты удаления липопротеидов, центрифугирование осу-ществляют в присутствии адсорбирующего липопротеиды устройства в виде поплавка, выполненного из поролона, который удаляют после центрифугирования, 1206704

50

Изобретение относится к медицине, точнее к медицинским лабораторным методам исследования и, в частности, может быть использовано при приготовлении контрольных сывороток и определении холестерина в альфа-липопротеидах в клинико-диагностических лабораториях и лабораториях научноисследовательских учреждений медикобиологического профиля.

Цель изобретения — повышение.полноты удаления липопротеидов.

Способ заключается в использовании для удаления липопротеидов из сыворотки крови в процессе центрифугирования адсорбирующего липопротеиды устройства в виде поплавка, выполненного из поролона, который после центрифугирования удаляют.

Адсорбирующий липопротеиды поплавок состоит из двух соединенных вместе элементов: адсорбента и собственно поплавка.

В качестве адсорбента используется пористый материал, способный впитывать сыворотку вместе с липопротеидами во время центрифугирования и удерживать сыворотку при его удалении после центрифугирования, например поролон толщиной 6-8 мм и диаметром, равным внутреннему диаметру центрифужного стакана.

В качестве поплавка используется материал низкой плотности, способный удерживать адсорбент на поверхности центрифугируемой сыворотки, например пенопласт или пробковое де- . рево толщиной 6-8:мм и диаметром на 1-2 мм меньше внутреннего диаметра центрифужного стакана. Необходимость использования поплавка обусловлена тем, что адсорбент, пропитываясь сывороткой, во время центрифугирования тонет.. Адсорбент к поплавку может быть прикреплен любым способом, например приклеен клеем типа "Момент".

Пример. Исходная сыворотка разливается в любые центрифужные стаканы, На поверхность сыворотки помещается соответствующий диаметру стакана адсорбирующий липопротеиды поплавок. Сыворотку центрифугируют.

В процессе центрифугирования липопротеиды, как наиболее легкие элементы, собираются на поверхности сыворотки и вместе с ее верхней частью переходят в поры поролона. После центрифугирования поплавок вместе с липопротеидами и частью сыворотки снимается с поверхности сыворотки.

Оставшаяся в центрифужных стаканах сыворотка со сниженным содержанием липопротеидов используется для приготовления замороженной контрольной сыворотки или контрольной сыворотки на основе этиленгликоля, а

10 также для определения в ней холестерина альфа-липопротеидов. Поскольку контрольная сыворотка на основе этиленгликоля является жидкой и ее можно центрифугировать, снижение концентраl5 ции липопротеидов можно производить как в исходной сыворотке, так и в уже приготовленной контрольной сыворотке, содержащей этиленгликоль.

Адсорбирующий липопротеид поплавок после промывания проточной водой и высушивания может быть использован повторно, Толщина слоя липопротеидов, образующегося на поверхности центрифуги-руемой сыворотки, обычно составляет десятые доли миллиметров и не превышает 1-2 мм даже в случае сывороток с очень высоким содержанием липопротеидов. Поэтому при толщине слоя

30 поролона 6-8 мм липопротеиды центриУ фугируемой сыворотки полностью переходят в поролон. Экспериментально установлено, что после центрифугирования специально обогащенной липопротеидами сыворотки с начальной оптической плотностью, измеренной на спектрофотометре СФ-26 при 650 нм в кювете с длиной хода луча 10 мм, равной 1,800 единиц, ее оптическая

4 плотность снижается до 0,100 и ниже единиц оптической плотности. В естественном состоянии сыворотки крови с оптической плотностью 1,800 единиц практически не встречаются.

Можно использовать и более толстый слой поролона, но при этом вместе с липопротеидами будет теряться большой объем сыворотки. При меньшей толщине слоя поролона края его во время центрифугирования могут не плотно прилегать к стенкам центрифужного стакана и часть липопротеидов по краям поверхности сывороткф может оставаться не удаленной.

Для получения сыворотки, в.которой липопротеиды визуально не определяются и которая может быть использована для приготовления контрольной

206704

Составитель И. Привалова

Техред Л.Иикеш Корректор Л. Патай

Редактор А. Шишкина

Заказ 8704/46 Тираж 778

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 1

1 сыворотки, исходная сыворотка должна центрифугироваться при 4500 в течение 40-50 мин. Для оценки эффективности удаления липопротеидов по известному способу измерялась оптическая плотность сыворотки на спектрофотометре СФ-26 при 650 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм до и,после центрифугирования. Центрифугирование производилось при 5000 об/мин в течение 50 мин. До центрифугирования оптическая плотность сыворотки равнялась 0,540 единиц. После центрифугирования сыворотки непосредственно в кювете спектрофотометра, когда верхний слой, содержащий липопротеиды, оставался при измерении не нарушенным, оптическая плотность составляла 0,09 единиц. При отборе среднего слоя в объеме 2,5 мл из 3 мл центрифугированной сыворотки ее оптическая плотность равнялась 0,280 единиц. Да же в случае отбора среднего слоя в. объеме 3 мл из 12 мл центрифугированной сыворотки ее оптическая плотность была выше контроля {0,09 единиц) и составляла 0,150 единиц.

Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что для приготовлю,,ия контрольных сывороток могут быть использованы любые исходные сыворотки, что значительно ускоряет

Ъ процесс сбора исходных сывороток и приготовление контрольных сывороток.

Кроме того, достигается более полное удаление фракций липопротеидов низкой плотности при подготовке сыворотки для исследований .холестерина в альфа-липопротеидах. Причем при удалении липопротеидов в сыворотку не

10 вносятся никакие посторонние вещества, средства, используемые для удаления липопротеидов с поверхности центрифугируемой сыворотки, обще- °

Г доступны. При этом процесс -приготов15 ления контрольных сывороток практически не требует дополнительньж трудозатрат. Исключение составляют только очень небольшие трудозатраты по приготовлению пластинок поролона и

2б пенопласта. Центрифугирование не входит в дополнительные трудозатраты, так как оно всегда применяется для удаления нерастворимых элементов иэ .сыворотки крови. Теперь удаление

2 липопротеидов и нерастворимых элементов производится при одном центрифугировании, при этом нерастворимые элементы осаждаются на дно центрифужного стакана, а липопротеиды концентрируются в пластинке поролона, То и другое после центрифугирования удаляется.