Способ получения @ -антител с иммуносорбента

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3832741/28-14 (22) 25.12.84 (46) 23.09.87. Бюл. N - 35 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (72) Ю.А. Кузьмин, Н.Н. Беляев и Б.В. Каральник (53) 615.373(088.8) (56) Носков Ф.С. и др. Эритроцитарные диагностикумы из чистых антител/

/В кн. Реакция непрямой гемагглютинации. — Л.: 1981, т. 56, с. 3-12. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ IgG-АНТИТЕЛ С ИММУНОСОРБЕНТА путем смещения антисыворотки с соответствующим эри-, троцитарным иммуносорбентом с последующей элюцией в кислой среде и отделением целевого продукта, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода антител, перед отделением целевого продукта полученную смесь обрабатывают ультразвуком частотой 15-44 кГц, мощностью 3040 Вт/см в течение 2-4 мин.

1253299

1?00+1,6 (титр антиэхинококковых антител в элюате).

Таким образом оптимальной мощносФ 1

5 тью является 30-40 Вт/см, Оптимальное время воздействия ультразвука на иммуносорбент 2-4 мин.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Цель изобретения — повышение выхода IgG-антител с иммуносорбента в процессе элюции в кислой среде за счет обработки иммуносорбента, связавшего IgG-антитела, ультразвуком.

Пример. Эритроцитарный иммуносорбент (фиксированные эритроциты, lð нагруженные эхинококковым антигеном) предварительно отмывают по 10 мин в каждом из следующих растворов в таком порядке: 0,1 м забуференный раствор NaC1, рН 8,3; 0,1 M глицино- 15 вый буферный раствор, рН 3,0 и 0,15M забуференный раствор NaC1;pH 7,2.

Затем иммуносорбент смешивают с антисывороткой (содержащей антитела к эхинококковому антигену IgG z acca), 20 вьдерживают 30 мин при комнатной температуре. После этого смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение

10 мин и трижды отмывают при центрифугировании в этом же режиме 25

0,857-ным раствором NaC1. Затем осадок прореагировавшего иммуносорбента суспендируют в 0,1 мМ глициновом буферном растворе рН 3,0 до 10 -ной по объему концентрации и делят на две части. Одну часть суспензии вьдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают ультразвуком частотой 35 кГц и мощностью

30 Вт/см в течение 2 мин. Другую часть суспензии прореагировавшего иммуносорбента по способу прототипа выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин без обработки ультразвуком. Далее по предлагаемому и 4р известному способам иммуносорбент осаждают центрифугированием при

3000 об/мин в течение 10 мин. B надосадке измеряют активность антиэхинококковых антител. Активность антиэхинококковых антител, полученных известным способом, равна 600+1,5, а предлагаемым способом — 1600+1,7.

Влияние частоты ультразвука на выход антител, кГц: при 15 1600+1 5; 50 при 22 1600+1,6; при 35 1600+1,5; при 44 1600+1,5 (титр антител в элюате).

Мощность ультразвука оказывает существенное влияние на выход антител, Вт/см : при 10 600+1,5; при

15 800+1,5; при 20 800+1,6; при 25

1200 1,5; при 30 1600+1,5; при 35 1600+1,5; при 40 1600+1,5; при 45

Влияние времени воздействия ультразвука на выход антител, мин: при 1

800+1,5; при 2 1600+1,5; при 4 1600+

+1,6; при 6 1200+1,5; при 8 600+1,4 (титр антиэхинококковых антител в элюате).

Параллельной обработке ультразвуком в том же режиме подвергают взятую в опыт (см. пример) антисыворотку. Измерение титра РПГА до и после обработки ультразвуком показало, что активность антител в растворе при такой обработке не повышается. Значит большая активность антител в элюате с иммуносорбента, полученном по предлагаемому способу, обусловлена не увеличением активности антител, а увеличением их элюции за счет дей— ствия ультразвука. Таким образом, предлагаемый способ достоверно более эффективен для вьделения специфических антител.

Влияние частоты ультразвука на выход антител, кГц: при 15 1600+1,5 при 22 1600+1,6 при 35 1600+1,5 при 44 1600+1,5 . (титр антител в элюате).

Мощность ультразвука оказывает существенное влияние на выход антител, Вт/см

2, при 10 600+1,5 при 15 800+!,5 при 20 800+1,6 при 25 1200+1,5 при 30 1600+1,5 при 35,1600»1,5 при 40 1600+1,5 при 45 1200+1,6 (титр антиэхинококковых антител в элюате).

Таким образом оптимальной мощЭ

2 ностью является 30-40 .Вт/см . Оптимальное время воздействия ультразвука на иммуносорбент 2-4 мин.

Влияние времени воздействия ультразвука на выход антител, мин: при 1 800+1,5 при 2 1600+1,5 при 4 1600+1.,6!

253299 при 6 при 8 (титр антиэхинококковых антител в элюате).

1200+1,5

600+1,4

Составитель П. Бонарцев

Редактор JI. Лашкова Техред M.Äèäûê

Корректор С. !!!екмар

Заказ 4358 Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4