Способ определения хлоксила в биологических объектах

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N33/15 - медицинских препаратов

Изобретение относится к способам определения хлоксила в биологических объектах. Цель изобретения повышение чувствительности способа. Хомякам вводят хлоксил. Содержание препарата определяют в крови многократно . Производят экстрагирование н-гексаном. В системе, содержащей н-гексан очистку проводят хроматографическим разделением на silufol UV-254. Хроматограмму высушивают 1-2 мин при ЮО с. Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении ультрафиолетовым светом. Затем проводят элюцию хлоксила смесЫо вода - 10%-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4. Верхний слой элюата подвергают спектрофотометрии. Расчет содержания препарата проводят по калибровочному гра фику. Табл. 2.

СОЮЗ СОНЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1,.SU 1254 (51)4 G 01 N 33/15 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ к A ч р

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTWI

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3824765/28- 14 (22) 17. 12.84 (46) 30.08.86. Бюл. № 32 (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского (72) И.Е. Шумакович, Б.В. Лопатин, А.С. Найденова и Д.Г. Баяндина (53) 615 ° 7 (088. 8) (56) Медицинская паразитология и паразитарные болезни. М., 1968, т. 37, № 5, с. 549-554. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОКСИЛА

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ (57) Изобретение относится к способам определения хлоксила в биологических объектах. Цель изобретениявЂ” повышение чувствительности способа.

Хомякам вводят хлоксил. Содержание препарата определяют в крови многократно. Производят экстрагирование н-reKccLHOM. В системе, содержащей н-гексан, очистку проводят хроматографическим разделением на silufol

UV-254. Хроматограмму высушивают

1-2 мин при 100 С. Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении ультрафиолетовым светом. 3a" тем проводят элюцию хлоксила смесь1о вода вЂ” 107-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4. Верхний слой .элюата подвергают спектрофотометрии. Расчет содержания препа g

O рата проводят по калибровочному гра . фику. Табл. 2.

I Ф 12543

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения антигельминтика хлоксила в биологи25 ч е ск их тк анях и жидк остях.

Цель изобретения вЂ” повышение

5 чувствительности способа за счет использования в качестве растворителя н-гексана, проведения хроматографического разделения на silufol

UV-254 и элюции хлоксила смесью во- 10 да/10%-ный раствор н-бутанола в гексане при определенном соотношении компонентов.

Пример 1.

Хомякам вводят хлоксил или его 15 лекарственную форму перорально в

2%-ном крахмальном клейстере в дозе

0,5 r/êã. Содержание препарата определяют в крови через 1, 2, 4, б, 8, 24 и 48 ч после его введения. Опре- 20 деление проводят не менее чем трех кратно.

1-2 мл крови (точный объем) собирают во флаконы с притертой пробкой, добавляют 0,1 мл 15%-ного раствора лимоннокислого натрия и экстрагируют н-гексаном в соотношении 1:5 в течение 1 мин. Экстракты собирают пипеткой в круглодонные колбы вместимостью 50 мл и выпаривают досуха 30 на роторном испарителе. Остаток смывают с колбы сначала 0,2 мл ацетона, а затем повторно 0,1 мл ацетона.

Полученные растворы постепенно наносят на хроматографическую пластинку в виде одной линии длиной около

1-2 см. Пластинку помещают в камеру, содержащую н-гексан, и хроматографируют восходящим способом„ Когда фронт растворителя пройдет не менее

3/4 пластинки, ее вынимают и сушат на воздухе 10 мин и помещают в сушильный шкаф при 100 С на 1 мин.

Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении УФ-светом с 45 длиной волны около 250 нм по тушению флуоресценции пластинки (Rf хлоксила около 0,75). Пятна смачивают с помощью капилляра 50%-ным раствором этанола и аКкуратно соскабливают с пластинки, помещая в пробирку с притертой пробкой вместимостью 10 мл..

Затем добавляют 1 мл дистиллированной. воды и 4 мл 10%-ного раствора н-бутанола в н-гексане. Экстрагируют

81 2 однократно в течение 3 мин. Верхний слой гексана .отделяют после отстаивания в течение 2-3 мин и спектрофотометрируют при длине волны

238+2 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм, относительно

10%-ного раствора н-бутанола в и-гексане предварительно насыщенного водой. Расчет содержания препарата проводят по калибровочному графику.

С целью доказательства полноты экстрагируемости хлоксила из биологического объекта при введении его хомякам перорально, в виде взвеси в крахмальном клейстере, в дозе

0,5 r/êã, проводили его повторную экстракцию н-гексаном. В табл. 1 пр ведены данные, полученные при определении хлоксила через 4 ч после его введения. Предел обнаружения пятен хлоксила на хроматограмме

1 мкг. Чувствительность обнаружения хлоксила в пробе 2,5 мкг по способу прототипу вЂ” 15 мкг).

Выбор оптимальных условий обнаружения пятен хлоксила на хроматоррамме показан в табл. 2.

Из данных, приведенных в табл. 2, ! видно, что оптимальные условия детекции хлоксила достигаются при нагревании пластинки 1-2 мин при

100 С.

Формула и з обретения

Способ определения хлоксила в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем, очистки экстракта с последующей спектрофотометрией, о т л и ч а юшийся .тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве экстрагента используют н-гексан, очистку проводят хроматографическим разделением на silufol UV-254 в системе, содержащей н-гексан, после чего хроматограмму высушивают

1-2 мин при 100"С, выявляют зону расположения хлоксила с последующими элюцией хлоксила смесью водавЂ”

10%-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4.и спектрофо; тометрией верхнего слоя элюата.

1254381

Таблица 1

Навеска

Объект

5,5

Не обнаружено

1,8

Хровь

1000

Печень