Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику

 

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику. Цель изобретения - повышение чувствительности способа и его ускорение. Сущность способа сводится к тому,что во флуоресцентн то кювету вносят суспензию исследуемого микроорганизма, затем в кювету вносят флуоресцентный краситель 3,З-дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида и регистрируют флуоресценцию . Затем в суспензию вводят антибиотик в исследуемой концентрации, смесь инкубируют при температуре роста микроорганизмов и измеряют уровень флуоресценции. Определяют разницу в уровнях флуоресценции до и после внесения антибиотика, по которой определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику. Время исследования 10-15 мин, чувствительность - концентрация антибиотика 10 -10 М, 1 табл. e (Л со ОО Ч 4

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИ Х

РЕСПУБЛИК

411 А1 (19) (11) (51) 4 С 12 0 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3983675/28-13 (22) 29. 11,85 (46) 15,09.87. Бюл. У 34 (71) Институт микробиологии AH СССР и МГУ им. M,В.Ломоносова (72) В,П.Лыков, M.Ï.Õîâðû÷åâ и А.Н.Полин (53) 576,8.093,1 (088.8) (56) Thrupp L,D. in: Antibiotics in

Laba Ãà tory Medi c ine. Ва1 t i more, 1980, р. 73-113, S ims P. l ., Waggone r А.S., Wang

С.-Н., Hoffman !.F. - Biochemis

try 1974, 13, 3315, Журавлева Н.B. Ускоренные способы определения чувствительности патогенных бактерий к антибиотикам, Л,, 1962, Леви M.È,, Горожанина И.А., Сагатовская Л.А. Антибиотики, 1967, 1(1, с. 57 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКУ (57) Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику, Цель изобретения — повьштение чувствительности способа и его ускорение, Сущность способа сводится к тому,что во флуоресцентную кювету вносят суспензию исследуемого микроорганизма, затем в кювету вносят флуоресцентный краситель 3,3-дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида и регистрируют флуоресценцию, Затем в суспензию вводят антибиотик в исследуемой концентрации, смесь инкубируют при температуре роста микроорганизмов и измеряют уровень флуоресценции. Определяют разницу в уровнях флуоресценции до и после внесения антибиотика, по которой определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику, Время исследования

l0-15 мин, чувствительность — концентрация антибиотика 10 — 10 М. — 6

1 табл. ка °

Сравнительные данные по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Выявленный эффект действия антибиотика, М

Микроорганизм (2 .1О клеток) по предлагаемому способу

Грамицндин S по прототипу

Грами..идин S Полнмнкснн

Полнмиксин

Bordatella bronchiseptica 4,5 ° 10 — 6

6 10

5 10

7 10-6

0,8 10-

7>2-10

1,5 10

3 10

Escherichia coli

Micrococcus lysodeikticus 10 8

8.10

2,3 -10

6, 5-10

Составитель Г,Смирнова

Техред M.Ходанич

Корректор П.Король

Редактор М.Товтин

Заказ 4097/23

Тираж 499 Подписное

В1ШИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб,, д,4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г,Ужгород, ул,Проектная,4 з 13374 био ти ка, при которой выявляется эффект действия последнего на заданное количество микроорганизмов — мишеней, Эффект действия в заданном способе

5 определяется по изменению трансмембранного потенциала, который выражается в изменении уровня флуоресценции красителя diз-(,, (5), Достоверным изменением считается 101-ный сдвиг уров-10 ня флуоресценции при добавлении анти— биотика.

Применение данного способа позволяет определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в концентра-1ции 10 — 10 М. В прототипе эффект

-8 действия на клетки наблюдается при концентрации антибиотика на 2 порядка больше и в течение 240-360 мин. Получение результатов с помощью предлагаемого способа достигается в течение

10-15 мин„ Способ позволяет осуществлять выявление антибиотиков мембрано— тропного действия, Он прост в осуществлении, тестирование одного антибиотика вместе с подготовкой занимает не более 1О мин, поддается автоматизации и может быть широко ис— пользован как в лабораторных условиях, так и в микробиологической промышленности, и в медицинской практике н качестве универсального способа для одновременного определения жизнеспособности клеток микроорганизмов и чувствительности их к антибиотикам.

Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику, включающий инкубирование суспензии микроорганизмов с красителем и антибиотиком, отличающийся тем, что, с целью повьш ения чувствительности способа и его ускорения, в качестве красителя используют 3,3дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида, предварительно измеряют уровень флуоресценции смеси суспенэии микроорганизмов с красителем, затем добавляют раствор антибиотика, после инкубирования повторно измеряют уровень флуоресценции смеси и определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику по разности уровней фпуоресценции до и после внесения антибиоти—