Способ моделирования функциональных сдвигов ультраструктур клетки

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Цель изобретения - воспроизведение стрессорнообусловленных сдвигов. Определяют концентрацию катехоламинов, глюкокортикоидов и липопротеидов в крови животных после воздействия стресса. Инкубируют тканевые срезы в среде , включающей глюкокортикоиды, адреналин и один из классов липопротеидов. При этом наблюдают повьппение свободной актив1ности лизосомных ферментов, траслокацию лизосом в околоядерное пространство и снижение соматической устойчивости лизосом. 2 табл. i (Л с 4 00 to 00 СП

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК 11 4 G 01 N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3774629/28-14 (22) 21.04,84 (46) 07.10.87. Бюл. М 37 (71) Институт клинической и экспериментальной медицины СО АМН СССР (72) Л. К. Панин, Н, Н. Маянская и Т. Г. Филатова (53) 615.475(088.8) (5e) Физиология терморегуляции. Л,:

Наука, 1 84, с. 433-461.

ÄÄSUÄÄ 13432 5 А1 (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СДВИГОВ УЛЬТРАСТРУКТУР КЛЕТКИ (57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, Цель изобретения — воспроизведение стрессорнообусловленных сдвигов, Определяют концентрацию катехоламинов, глюкокортикоидов и липопротеидов в крови животных после воздействия стресса.

Инкубируют тканевые срезы в среде, включающей глюкокортикоиды, адреналин и один из классов липопротеидов.

При этом наблюдают повьппение свободной активности лизосомных ферментов, траслокаиию лизосом в околоядерное пространство и снижение соматической устойчивости лизосом, 2 табл, 1343285.> !

О

?5

ЗО

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для исследования молекчлярных механизмов стресса.

Целью изобретения является воспроизведение стрессорно-обусловленных сдвигов

Определяют концентрацию катехоламинов, глюкокортикоидов и липопротеидов различных классон н крови стрессированных животных, д»бавляя затем в среду в качестве адаптивных гормонов глюкокортикоидь> и адреналин и один иэ классон липопротеидов в концентрациях, соответствующих модели

in viva.

Пример, 11оделирун>т внутриклеточные метаболические и ультраструктурные изменения, характерные для стресса, вызванного физической нагрузкой. Этот вариант стресса характеризуется значительным увеличением глюкокортикоидов и адреналина в крови, увеличением количества липопротеидов в сыворотке крови и сдвигом липопротеидного спектра в сторону преобладания липопротеидов высо-кой плотности (Л11ВП) (табл. 1).

Срезы печени крысы помещают в

Кребс-Рингер-Бикарбонатный буфер.

Инкубационную среду продувают га«овой смесью, содержащей 957. О, и 5i, L

СО . Инкубацию произ водят в закрытых колбах объемом 0 мл при 37 С при постоянном покачивании в т чение 30мин

1 или 2 ч, Перед началом инкубации к срезам добавляют адреналин, гидрокортизон и липопротеиды высокс>и плотности, 0,1Е-ный раствор здрецалина разводят физиологическим раствором в

100 раэ и добавляют к инкубируемым срезам из расчета 0,1 мл/5 мл среды.

Конечная концентрация адреналина

10 M. Гидрокортизон растворяют в диметилсульфоксиде (3 мг/мл) и разводят в 100 раз физиологическим расч— вором, Полученный раствор добавляют к срезам из расчета 0,1 мг/1 мл среды, Конечная концентрация гидрокортизона в среде Зх10 M. Липопротеиды добавляют по 0,1 мг белка/! мл среды.

После окончания инкубации срезы отмывают от среды холодным физиологическим раствором и в дальнейшем ис пользуют для оценки состояния метаболизма и ультраструктур печеночных клеток, Инкубация срезов в указанной среде в течение 3 ч не сопровождалась потерей растворимого белка, а также снижением активности ключевых ферментов гликолиза и гликогенолиза, что свидетельствует о хорошем сохранении жизнеспособности тканевых сре- зов, В печеночных срезах исследуют . функциональное состояние лиэосомального аппарата, скорость биосинтетических процессов, активность ферментов пентозофосфатного пути и некоторые другие показатели ° Полученные данные сравнивают с результатами аналогичных исследований, проведенных на печени крыс, у которых стресс вызывали интенсивной физической нагрузкои (плавание в течение 3,5 ч с грузом, составляющим 4Х от массы тела, с> при температуре воды 32-34 С).

Биохимическими и гистохимическими методами показана полная идентичность изменений лизосомного аппарата неченочных срезов, инкубированных в течение ЗО мин в присутствии гидрокортизона, адреналина и сывороточных липопротеидов высокой плотности, тем

HçMåHåHèÿì, которые наблюдаются в печени животных, стрессированных интенсивной физической нагрузкой. В обоих случаях наблюдают повышение свободной активности лизосомных ферментов, снижение сомотической устойчивости лизосом, транслокацию лизосом в околоядерное пространство и повышение активности лизосомных ферментов в ядрах гепатоцилов. Этого не удавалось получить, если из инкубационной среды исключали ЛПВП.

Так же, как и при физической нагрузке, 2-часовая инкубация печеночных срезов с гидрокортизоном, адреналином и ЛПВП сопровождается резкой активацией биосинтетических процессов. При этом более, чем в 2,5 раза возрастает скорость включения ">Cамино кислот в растворимый белок печени и Н-уридина в РНК, в 1,5 раза

3 увеличивается скорость синтеза липопротеидоь. низкой и очень низкой плотности в гепатоцитах, возрастает активность ключевого фермента пентозоа осфатного цикла — глюкоэо-6-фосфатдегидрогеназы (табл. 2) ° Все эти явления не наблюдались или были выражены в 2-4 раза меньше, чем в инкубационную среду добавляли лишь

1343285 один гидрокортизон или один адреналин, или гидрокортизон с адреналином.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я юших модели in vivo.

Т а б л и ц а 1

ЛПОНП, 7. ЛПНП, i, ЛПВП, 7

Суммарная фракция ЛПОНП и ЛПНП, мг/л

Усло вия опытов

0,023+0,002 0,096+0,005 0,042+0,005

7,73+0,62

Интактные животные (контроль) (10)

Плавание 3,5 ч (12) 14

59

5,3+0,53

0,027+0,002 0,091+0,003 0,064+0,006

35

" Достоверное отличие от контроля (Р (0,05), ЛПОНП вЂ” липопротеиды очень низкой плотности, JIIIHII — липопротеиды низкой плотности; ЛПВП вЂ” липопротеиды высокой плотности, концентрацию липопротеидов в крови определяют электрофоретическим методом.

Т а б л и ц а 2

Условия опытов

Свободная активность, 7. от общей активности ферментов

Г-6-ФДГ, нмоль/г белка за I мин

Включение метки в белок

КФ

Кат,Д

Контроль (интактные животные) (22) 11, 5+0,90

21,1+1,72++

20,6+1,90

33,6+2,50++

26, 8+О, 88

1572+133

3609+287

Плавание (18) 34,2+2,63

Контроль (срезы беэ добавок) (1Ь)

ГК+А+ЛИВП (13) 25, 7+2,27 38) 8+2,8

30) О+1, 82

3923+400

Р (0,05. Y <0,01 по отношению к контролю: КФ вЂ” кислая фосфатаза;

Ф &

Кат,Д вЂ” катепсин jI; Г-Ь-ФДà — глюкозо-6-фосфатдегидрогенаэа; ГК+А+ЛПВП вЂ” гидрокортизон + адреналин + липопротеиды высокой плотности.

BHHHIIH Заказ 4815/43 Тира П одпис ное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ моделирования функциональных сдвигов ультраструктур клетки путем перфуэии органа или инкубации тканевых срезов в среде, содержащей адаптивные гормоны, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью воспроизведения стрессорно-обуслонлснных сдвигов, предварительно определяют концентрации катехоламинов, глюкокор5 тикоидов и липопротеидов различных классов в крови стрессированных животных, после чего инкубирунт срезы в среде, содержащей в качестве адаптивных гормонов глюкокортикоиды и

lð адреналин и один иэ классов липопротеидов в концентрациях, соответству