Способ оценки функционального состояния лимфоцитов
Изобретение относится к медицине , точнее к иммунологии. Цель изобретения - упрощенце способа и определение активности выработки факторов , влияющих на свертываемость плазкрови. Для этого из венозной гепаринизированной крови выделяют лимфоциты больного на градиенте плотности фиколл-верографина (d-1077). Выделенные клетки двукратно отмывают от сывороточных белков средой 199, доводят до рабочей концентрации 2,0-2, в среде 199. Проверяют жизнеспособность по трипановому синему. Предварительно берут пробу крови у трехчетырех доноров и получают безтромбоцитную плазму, записывают процесс ее свертывания на гемокоагулографе ГКГМ-4-02 и учитывают покааатели гет мокоагулограммы (ГКГ): R-,K,C,MA, Е. Далее записывают ГКГ без тромбоцитной плазмы с добавлением лимфоцитов. Соотношение ингредиентов, мл: плазма 0,24; лимфоциты (в концентрации 2- 2,5-10Vi ui) 0,04; 1,29%-ньА р-р хлористого кальция 0,-1, общее кол-во не превьшает 0,38 мл и обеспечивает адекватную запись процесса свертывания . Показатели процесса свертывания безтромбоцитной плазмы принимают за 100%, показатели записи ГКГ с лимфоцитами вычисляются соответственно. 1 табл. (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) SU (111
002 А1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3937515/28-14 (22) 26.07.85 (46) 30.07.87.. Бюл. В 28 (71) Семипалатинский государственный медицинский институт (72) А.И. Кусельман и А,Г. Вермова (53) 615.373(088.8) (56) Малежик Л.П., Альфонсов В.В., Будажапов Д.У. Влияние тромбина на функциональную активность макрофагов и лимфоцитов. — Гематологияи трансфузиология, 1983, У 9, с. 22-27. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЛИМФОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии. Цель изобретения — упрощение способа и определение активности выработки факторов, влияющих на свертываемость плазмы крови. Для этого из венозной гепаринизированной крови выделяют лимфо9 циты больного на градиенте плотности фиколл-верографина (1-1077). Выделенные клетки двукратно отмывают от сывороточных белков средой 199, доводят до рабочей концентрации 2,0-2,5 10 /мл в среде 199. Проверяют жизнеспособность по трипановому синему. Предварительно берут пробу крови у трехчетырех доноров и получают безтромбоцитную плазму, записывают процесс ее свертывания на гемокоагулографе ГКГМ-4-02 и учитывают показатели ге-. мокоагулограммы (ГКГ): R-,K,С,МА, Е. Далее записывают ГКГ без тромбоцитной плазмы с добавлением лимфоцитов. Соотношение ингредиентов, мл: плазма 0.,24; лимфоциты (в концентрации 22,5 -10 /мл) 0,04; 1,297.-ный р-р хлористого кальция 0 1 общее кол-во не превышает 0,38 мл и обеспечивает адекватную запись процесса свертывания. Показатели процесса. свертывания безтромбоцитной плазмы принимают за 1007, показатели записи ГКГ с лимфоцитами вычисляются соответственно. 1 табл. 1327002 Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, Цель изобретения — упрощение способа и определение активности выработ5 ки факторов, влияющих на свертываемость плазмы кровы. Способ осуществляется следующим образом. Иэ венозной гепариниэированной крови вьделяют лимфоциты больного на градиенте плотности фиколл-верографина (d-1077). Выделенные клетки двукратно отмывают от сывороточных белков средой 199, доводят до рабочей концентрации 2,0-2,5 ° 10 /мл в среде 199. Проверяют жизнеспособность по трипановому синему. Предварительно производят забор крови у 3-4 доноров и получают безтромбоцитную плазму по 20 методике Балуда. Производят запись процесса свертывания безтромбоцитной плазмы на аппарате — гемокоагулографе ГКГМ-4-02 — и учитывают следующие показатели гемокоагулограммы: R,К,С,MA, 25 Е. Затем производят запись ГКГ безтромбоцитной плазмы с добавлением лимфоцитов. Соотношение ингредиентов следующие: 0,24 мл плазмы; 0,04 мл лимфоци— тов в концентрации 2-2„5 10 /мл; 0,1 млЗ0 1,29 -ного раствора хлористого кальция, т.е. общее количество не превышает 0,38 мл и обеспечивает адекватную запись процесса свертывания. Показатели процесса сверг.ывания 35 безтромбоцитной плазмы принимаются за 1007., показатели записи ГКГ с лимфоцитами вычисляются соответственно. Пример 1. Ребенок Г., 4 мес. Диагноз: острая левосторонняя очаговая пневмония, токсикоз I,ДНг, течение среднетяжелое. Диагноз подтвержден рентгенологически. Вьделяют лимфоциты из периферической крови в градиенте плотности фиколл-верографина. Отмывают от сывороточных белков дважды в среде 199 и доводят до рабочей концентрации 2,0 " .э10 /мл. Подсчитывают жизнеспособность по трипановому синему — жизне50 способность 977. Производят запись донорской безтромбоцитной плазмы на гемокоагулометре ГКТМ-2-04, для чего в кювету на 0,36 мл вливают силоконированной пипеткой 0 26 мл плазмы сохЭ 55 раняемой при температуре тающего льда (3-4 С) в силиконированной пробирке. Прогревают плазму в течение 1 мин и добавляют 0,1 мл 1,29Х.-ного раствора хлористого кальция. Запись производят с масштабом для более четкой регистрации всех параметров, Получены следующие результаты: К 61 мм; К 18 мм; С 143 мм; МА 49 мм; Е 96,07. Затем производят вторую запись безтромбоцитной донорской плазмы с добавлением лимфоцитов больного. Для этого в кювету последовательно вводят 0,24 мл плазмы, 0,04 мл 2 10 /мл лимфоцитов 6 больного, ирогревают в течение 1 мин и добавляют 0,1 мл 1,297.-ного раствора хлористого кальция и производят запись гемокоагулограммы. Получены следующие результаты: R 51 мм; К 16 мм; С 162 мм; MA 50 мм; Е 100,0. Таким образом, результаты ГКГ с лимфоцитами по отношению к результатам ГКГ беэтромбоцитной плазмы, принятой за 1007., следующие: R 83,6; 88,88; С 113,26; МА 102,04; Е 104,09. Следовательно, у больного с острой пневмонией, со среднетяжелым течением в острый период болезни отмечается ускорение I u II фазы свертывания, увеличение концентрации тромби1 на. В то же время лимфоциты не оказали влияние на показатель С, харак-.теризующий образование фибриногена и фибринового сгустка. Этот факт подтверждается показателями MA и Е, отражающими плотность и эластичность сгустка, зависимыми в приведенных условиях только от концентрации фибриногена (плаэма баэтромбоцитная). В периоде реконвалесценции у этого же больного функциональное состояние лимфоцитов следующее: R 102,56 (в процентах по отношению к донорской плазме, принятой эа 100X), К 110,0; С 93,25; MA 109,61," Е 122,35. Т,е. показатели приближались к норме, что свидетельствует об изменении функции лимфоцитов в зависимости от стадии болезни. Весь процесс исследования (выделение клеток, запись ГКГ) занимает 45 ч, что значительно меньше реакции розеткообразования (срок инкубации при 4 С до 18 ч, реакции бласттрансо формации 48-72 ч). Пример 2. Ребенок M., 1 год 3 мес. Диагноз: острая двусторонняя бронхопневмония (слева — очаговая, справа — полисегментарная), токсикоз II ДН;,, СН,, затяжное течение, сопутствующий диагноз — гипохромная 1327002 амемия I ст., остаточные явления рахита. Диагноз также подтвержден рентгенологически в динамике заболеI вания. Последовательность вьделения лимфоцитов, записи ГКГ аналогична примеру 1. Полученные результаты отражены в таблице. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Влияние лимфоцитов больного в разные стадии болезни на ГКГ донорской плазмьi Стадии болезни 7 Донорс онорская кая Донорс кая Донорская Донорская Донорская плазма плазплазплазма плазма плазма+ ма+ ма+ +лимфоциты +лимфоциты лим фоциты Острый период заболевания 106,5 48 45,07 20 155 183 153 190, 9 134 151 Период улучшения 38 26 68,42 11 Наслоение ОРЗ и 21 ухудшение процесса в легких 43 46,23 19 14 73,68 139 169 Из таблицы видно, что у больного с тяжелой пневмонией; распространенным процессом в легких в острый период заболевания лимфоциты, вьделяя высокоактивные тромбопластические вещества, оказывают максимальное воздействие на I u II фазы свертывания, причем более выраженное, чем в примере 1. При данной форме пневмонии лимфоциты оказывают влияние и на генерацию фибриногена, показатели MA и свидетельствуют о недостаточной плотности и эластичности сгустка, что может быть связано с вьделением лимфоцитами и фибринолитических веществ. Т.е. способ помогает раскрыть многие грани влияния лимфоцитов на процессы гемостаза. Таким образом, предлагаемый спо-. соб проще в исполнении и позволяет оценить способность вырабатывать иммунокомпетентными клетками вещества, активирующие свертывающую систему, наглядно демонстрируют зависимость их функционального состояния от фазы и тяжести заболевания. Этот факт позволяет сопоставить клинические данные с функцией лимфоцитов и по их 5 состоянию судить об особенностях процесса.Помимо этого запись гемокоагулограммы позволяет наглядно проследить влияние лимфоцитов на фазы свертывания, генерацию фибрина, плотность, эластичность сгустков. Предлагаемый способ помогает в тактике ведения больных пневмонией, в частности определения длительности и эффективности назначения гепарина, иммуномодуляторов, которые влияют на функциональный статус иммунокомпетентных клеток. Способ оценки функционального состояния лимфоцитов, включающий вьделение лимфоцитов из венозной крови,о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью 25 упрощения способа и определения активности выработки факторов, влияющих на свертываемость плазмы крови, лимфоциты вводят в цитратную плазму крови донора, осуществляют запись 30 гемокоагулограммы и оценивают функциональное состояние лимфоцитов по изменению продолжительности периодов генерации тромбопластина (R) и образования тромбина (k) на гемокоагулограмме.! 327002 Продолжение таблицы Стадии болезни Донорская Донорс кая Донорская плазма, Острый период заболевания . 83,6 65 45 69,23 185,?1 81,81 44,05 43 91,48 88,67 75,43 85,06 б Период улучшения 112,68 47 55 105,7 108,33 122,2 112,8 Составитель В. Фролова Редактор М. Петрова . Техред и.Попович Корректор Н. Король Заказ 3382/40 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Донорс кая плазма Наслоение ОРЗ и ухудшение йроцесса в легких 121,58 52 плазма+ +лимфоциты плазма+ +лимфоциты
