Способ криоконсервации эмбрионов кур

 

Изобретение относится к криобиологии . Цель изобретения - повышение выхода жизнеспособных клеток от кАждого эмбриона. Из полости яйца удаляют эмбриональную жидкость в количестве 15-30 от объема внутреннего содержимого яйца и вводят такое же количество диметилсульфоксида. Перед введением препарат нагревают. (t. С ОС ос ОС СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

5D 4 С 01 И 33/48

prpñä 1 И

1

Г c ;

1 с

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А 8ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ы Р

Сл

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3980195./28-14 (22) 25.11.85 (46) 07.10.87. Бюл. У 37 (7 1) Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (72) Б.Т. Стегний, Г.А. Красников, В.С. Белоконь и П.А. Конозенко (53) 612.015(088.8) (56) N. Rathamohan and P.P. Spradbraw Preservation of Aeran Cells

at Sub sего Temperatures", Cust, Y. Biol.. Sci 1979, 32, 475-81.

„„SU„„1343357 А1 (54) СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ ЭМБРИОНОВ

КУР (57) Изобретение относится к криобиологии. Цель изобретения — повышение выхода жизнеспособных клеток от каждого эмбриона. Из полости яйца удаляют эмбриональную жидкость в количестве 15-30 от объема внутреннего содержимого яйца и вводят такое же количество диметилсульфоксида. Перед введением препарат нагревают.

1 134

Изобретение относится к криобиологии, а именно к области низкотемпературного консервирования биологических объектов, в том числе с последующим их культивированием в искусственных условиях, и может быть использовано в ветеринарии, медицине и биологической промышленности.

Цель изобретения — повышение выхода и сохранности клеток, полученных из криоконсервированных птичьих эмбрионов и упрощение состава криозащитной среды.

Пример 1. 10-дневные куриные эмбрионы из заведомо благополучного по инфекционным и инвазионным заболеваниям птицехозяйства просматривают на предмет определения жизнеспособности в овоскопе ° В работе используют эмбрионы, проявляющие в овоскопе подвижность. Затем скорлупную оболочку дважды обрабатывают 57-ной настойкой иода и со стороны путем с помощью обезвреженной инъекционной иглы делают прокол, направляя ее срезанный конец с внутренней стороны подскорлупной оболочки до среднего уровня длины яйца и отсасывают

10 мл окружающей эмбрион жидкости.

Эмбриональную жидкость удаляют и в полость вводят 10 мл диметилсульфоксида (ДМСО), то есть 207 по отношению к объему содержимого яйца с эмбрионом (50 мл). ДМСО предварительно перегоняют в вакууме, а перед введелием нагревают до 37 С. После извлечения иглы отверстие в скорлупной оболочке заклеивают расплавленным на спиртовке стеклографом и куриные эмбрионы помещают на 35 мин при 37 С.

По истечении периода эквилибрации с. криозащитной средой эмбрионы проверяют в с зоскопе на предмет их жизнеспособности (в работу берут только подвижные эмбрионы). После нарушения целостности скорлупной оболочки эмбрион с помощью пинцета извлекают из яйца и помещают в стерильной полиэтиленовый контейнер (полиэтиленовые контейнеры после тщательной промывки в 96 -ном спирте-ректификате подвергают ультрафиолетовому облучению).

Контейнеры с эмбрионами перемещают в металлические пеналы и загружают в камеру аппарата для программного замораживания биологических объеко тов, где охлаждают от 10 до — 80 С о

r o скоростью 0,3-0,5 с в минуту с

3357

50 последующим погружением биоматериала на хранение в жидкий азот. После хранения в жидком азоте контейнеры с эмбрионами перемещают для дефростао ции в водяную баню при 40 С. Затем в условиях стерильного бокса эмбрионы извлекают из контейнеров и помещают во флаконы с раствором Хэнкса (рН

7,2-7,4). После 2-кратного отмывания в растворе Хэнкса от туловища эмбриона отрезают голову, удаляют внутренности и измельчают ножницами до фрагментов величиной в 2-3 мм . Фрагменты ткани подвергают дезагрегации трипсином по общепринятой методике.

В полученной взвеси определяют процент жизнеспособных клеток и далее их культивируют на питательной среде

199 с добавлением равного количества 0,57.-ного раствора гидролизата лактальбумина в растворе Хэнкса и

107-ной сыворотки крови крупного рогатого скота. Результат: уровень жизнеспособных клеток составил 877., а выход живых клеток от одного эмбриона достиг 61 млн. По истечении 3 сут культивирования образовался монослой клеток.

Пример 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1 за исключением лишь того, что из эмбриона удаляют 2,5 мл омыващей его жидкости и вводят столько же ДМСО (57 по отношению к объему содержимого яйца). Результат: уровень жизнеспособных клеток составил 157., а выход живых клеток от одного эмбриона достиг 5 млн, По истечении 6 сут культивирования отмечалось прикрепление клеток, однако формирования монослоя не произошло °

Пример 3 ° Способ осуществляют аналогично примеру 1 за исключением лишь того, что из эмбриона удаляют 5 мл омывающей его жидкости и вводят столько же ДАССО (107. по отношению к объему содержимого яйца).

Результат: уровень жизнеспособных клеток составил 507 а выход живых клеток от одного эмбриона достиг 35

35 млн. По истечении 6 сут культивирования монослой образовался на 207 поверхности культурального сосуда.

Формула изобретения

Способ криоконсервации эмбрионов кур путем введения криопротектора B ткань эмбриона, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения

Составитель Е. Колмакова

Техред А.Кравчук Корректор М. Шароши

Редактор В. Данко

Заказ 4819/47

Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 выхода жизнеспособных клеток от каждого эмбриона, из полости яйца удаляют эмбриональную жидкость в

13433 7

4 количестве 15-307. от объема внутреннего содержимого яйца и внодят такое же количество криопротектора.