Способ получения клеток коры надпочечников человека и животных

 

Изобретение относится к медицине , в частности эндокринологии, терапии , хирургии, и касается способа получения клеток коры надпочечников. Цель изобретения - повьшение выхода жизнеспособных клеток. Извлеченную железу животных или человека отмывают средой 199, измельчают и выдерживают в течение 12-15 ч в условиях холодильника в смеси среды 199 и 0,25%-ного раствора трипсина, взятых в соотношении 1:1, с добавлением 5% бычьей сыворотки. Затем смесь подогревают , трипсинизируют, полученную ткань используют для культивирования. Выход жизнеспособных клеток 70-90%. а

СО10Э СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК дп 4 С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCH0MY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4026680/28-13 (22) 20.12.85 (46) 29.02.88. Бюл. Мд 8 (71) Киевский научно-исследовательский институт эндокринологии и обмена веществ (72) И.С.Турчин, Н.Д.Тронько, Д.С.Онищенко, И.С.Челнакова, А.В,Тищенко и P.M.Ñè÷èíàâà (53) 578,085.23 (088.8) (56) Плужников Г.Н., Дьеван А., Михаль К. Проблемы эндокринологии.

M. 1976, т.ХХП, с.75-79. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК КОРЫ

НАДПОЧЕЧНИКОВ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

„„SU„„137729! А 1 (57) Изобретение относится к медицине, в частности эндокринологии, терапии, хирургии, и касается способа получения клеток коры надпочечников.

Цель изобретения — повышение выхода жизнеспособных клеток. Извлеченную железу животных или человека отмывают средой 199, измельчают и выдерживают в течение 12-15 ч в условиях холодильника в смеси среды 199 и

0,25Х-ного раствора трипсина, взятых в соотношении 1:1, с добавлением 5Z бычьей сыворотки. Затем смесь подогревают, трипсинизируют, полученную ткань используют для культивирования.

Выход жизнеспособных клеток 70-90Х.

1377291

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в эндокринологии, терапии, хирургии, Цель изобретения — повышение выхо5 да жизнеспособных клеток.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

П. р и м е р 1. Выделение клеток коры надпочечных желез поросят суточ- 10 ного возраста.

Животных забивают гильотинированием. Стерильно забирают надпочечные железы от поросят суточного возраста и помещают в среду 199 при 4 С. Пос- 15 ле 3-кратного промывания надпочечные железы измельчают глазными ножницами до кусочков размером 0,5-1 мм, переносят во флаконы и отмывают до получения прозрачной жидкости. Отмытые фрагменты ткани заливают смесью среды 199 и 0,257-ного раствора трипсина, взятых в соотношении 1:1, с добавлением 5% бычьей сыворотки, рН 7,4 и помещают на 12-15 ч в холодильник 25 (4 С). Затем исходный материал подогревают до 32 С, трипсинизируют на магнитной мешалке 2-кратно по 25 мин при скорости вращения 120-140 об/мин.

Надосадок сливают, а ткань помещают 30 для дальнейшего культивирования.

Пример 2. Получение тканевой культуры надпочечников человека.

Гиперторифированные железы надпочечников при болезни Иценко-Кушинга и гиперфункциях яеопухолевой природы, удаленные во время операции, очищают от жировой ткани и многократно отмывают от крови, разрезают на 6-.

10 частей и снова 5-6 раз отмывают 40 средой 199.

Глазными ножницами ткань надпо- чечных желез измельчают до размеров

0 5-1 мм и отмывают средой 199 до 45 получения прозрачной жидкости, после чего заливают смесью среды 199 и

0,257-ного раствора трипсина в соотношении 1: 1 с добавлением 57. бычьей сыворотки и помещают на 12-15 ч в холодильник при 4 С, Не сливая среды, ткань с питательной средой подогревают на водяной бане до 32 С и обрабатывают на магнитной мешалке 2-кратно по 25 мин при 120-140 об/мин. На промежуточном этапе исходную среду сливают и заменяют такой же средой с температурой 32 С, Надосадочную жидкость сливают, а ткань помещают в питательную среду для дальнейшего культивирования. Выход жизнеспособных клеток составляет

70-907 (контроль 537), уровень кортикостероидов 117,9-324,2 мкг (контроль 46,6 мкг 7).

Под наименованием уровень кортикостероидов необходимо понимать уровень 11 оксикортикостероидов (гидрокортизон и кортикостерон).

Пример 3. Выделение клеток коры надпочечников взрослых и новорожденных собак.

Надпочечные железы отмывают 3-кратно от крови и глазными ножницами измельчают до фрагментов 0,5-1 мм, переносят во флаконы и отмывают раствором Хенкса до получения прозрачной жидкости. Отмытую ткань заливают смесью среды 199 и 0,25%-ным раствором трипсина с добавлением 57. бычьей сыворотки и помещают в холодильник на 12-15 ч. Не сливая среды, ткань подогревают на водяной бане до 32 С и обрабатывают на магнитной мешалке

2-кратно по 25 мин при скорости вра" щения магнита 120-140 об/мин. В промежутке между первой и второй обработкой производят замену середы на предлагаемую в изобретении, Обработанную таким образом ткань, после отмывки раствором Хенкса, заливают общепринятой при культивировании питательной средой и помещают в термостат при 37 С.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход жизнеспособных клеток коры надпочечников и соответственно уровень кортикостероидов.

Формула изобретения

Способ получения клеток коры надпочечников человека и животных, включающий забор железы, измельчение и ферментативную обработку измельченной железы с последующим выделением клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода жизнеспособных клеток, перед ферментативной обработкой измельченную железу о выдерживают 12-15 ч при 4-6 С в среде 199 с 0,257-ным раствором трипсина, взятых в соотношении 1:1, в присутствии 5 бычьей сыворотки.