Способ пересадки ранних эмбрионов птиц
Изобретение относится к области экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболочке. Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа. Для этого эмбрион отделяют от собственной желточной оболочки, выдерживая в солевом растворе, инкубируют в течение 10-20 мин в декальцинированном растворе, после чего пересаживают эмбрион эктодермой вниз на чужеродную желточную оболочку, уложенную на сухую ровную поверхность внутренней стороной вверх. 2 табл. со ел 00 СХЗ ГчЭ
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„1358872 А 1 (su 4 А 01 К 67/00, С 12 Х 5/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4094590/30-13 (2Я) 18.07.86 (46) 15.12.87. Бюл. № 46 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) А. В. Белецкая и Н. И. Сахацкий (53) 636.5 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 1253137, кл. С 12 N 5/00, 1985.
Святогор Г. П. Экспериментальная полиэмбриология амфибий и птиц: Автореф. канд. дис. Л., 1975.
Методы биологии развития. М.: Наука, 1974, с. 125. (54) СПОСОБ ПЕРЕСАДКИ РАННИХ
ЭМБРИОНОВ ПТИЦ (57) Изобретение относится к области экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболоч ке.
Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа. Для этого эмбрион отделяют от собственной желточной оболочки, выдерживая в солевом растворе, инкубируют в течение 10 — 20 мин в декальцинированном растворе, после чего пересаживают эмбрион эктодермой вниз на чужеродную желточную оболочку, уложенную на сухую ровную поверхность внутренней стороной вверх.
2 табл.
1358872
Изобретение относится к экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболочке.
Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа.
Способ осуществляется следующим образом.
Вскрывают предварительно проинкубированное в течение 12 — 42 ч яйцо, освобождают желток от белка. Желток помещают в чашку Петри или часовое стекло бластодиском вверх. Вокруг бластодиска накладывают кольцо из фильтровальной бумаги, затем в желток под бластодиск инъецируют физраствор в количестве до 5 мл. Это обеспечивает отмывку бластодиска с прилегающей желточной оболочкой от желточной массы.
Затем обрезают желточную оболочку по наружному краю кольца из фильтровальной бумаги и, взяв пинцетом за край кольца, переносят препарат в чашку Петри с солевым раствором. В качестве солевого раствора используют известные смеси, например раствор Рингера. При выдержке препарата в солевом растворе достигается отделение блас. тодиска от собственной желточной оболочки. Как правило, 30 — 60 минутной выдержки в солевом растворе достаточно для отслоения бластодиска, однако значительная часть эмбрионов отслаивается раньше указанного времени. В процессе выдержки споласкивают кольцо из фильтровальной бумаги в солевом растворе, приподымают и контролируют отслоение эмбриона визуально. Если бластодиск отслоился, добиваются его полного сползания с желточной оболочки в данный раствор, а желточную оболочку, оставшуюся на кольце из фильтровальной бумаги, удаляют. После этого бластодиск из солевого раствора штапелем переносят в другую чашку Петри с декальцинированным раствором, в качестве которого используют раствор Версена. В растворе Версена эмбрион инкубируют в течение 10—
20 мин при комнатной температуре, что обеспечивает его прикрепление и приживление к чужеродной желточной оболочке.
В течение времени, необходимого для инкубации эмбриона в растворе Версена, проводят подготовку чужеродной желточной оболочки к приему трансплантата. Для этого вскрывают яйцо, отделяют желток от белка, помещают желток бластодиском вниз в чашку Петри или другую чистую посуду.
Затем накладывают на желток кольцо из фильтровальной бумаги и инъецируют в желток под желточную оболочку внутри кольца физраствор. После этого обрезают желточную оболочку по наружному краю кольца и за край кольца переносят и укладывают внутренней стороной вверх на сухую ровную поверхность, например на предметное стекло или на дно чашки Петри.
После этого проинкубированный в течение 10 — 20 мин в растворе «Версена эмбрион шпателем переносят на край подготвленной желточной оболочки эктодермой вниз.
Затем осторожно наклоняют предметно стекло, эмбрион сползает к центру желточной оболочки и одновременно удаляется раствор Версена, занесенный шпателем вместе с эмбрионом на край желточной оболочки. После этого препарат выдерживают еще несколько секунд для частичного испарения остатков влаги на препарате, а затем за край кольца из фильтровальной бумаги
15 переносят на питательную среду камеры для культивирования.
Граничные пределы инкубации в растворе Версена определены в результате опытов на ранних куриных эмбрионах, для чего использовали предварительно проинкубированные в течение 20 — 24 ч яйца итальянских куропатчатых кур.
Экспериментальные данные представлены в табл. 1.
Как видно из данных табл. 1,10 — 25-минутная инкубация эмбрионов в растворе
Версена обеспечивает полное (по всей окружности) или частичное прикрепление их к чужеродной желточной оболочке и способствует началу развития 60 — 80® эмбрионов от числа проинкубированных. Однако, если судить по основному показателю числу эмбрионов, достигших 12 — 13-й стадии развития, когда отчетливо видны ритмические сокращения сердца, то видно, что эмбрионы перед посадкой на чужеродную желточную оболочку следует инкубировать в растворе Версена в течение 10 — 20 мин. Причем
20-минутная инкубация эмбриона в растворе Версена является оптимальной.
В табл. 2 представлены данные сравнительного испытания эффективности известного и предлагаемого способов пересадки ранних эмбрионов птиц.
Так, при использовании предлагаемого способа 69,7Я пересаженных на чужеродную желточную оболочку эмбрионов начинают развитие, в том числе 60,6Я от числа пересаженных нормально развиваются и достигают 12 в 13-й стадии развития, когда отчетливо видны у каждого эмбриона ритмические сокращения сердца. При использовании известного способа, включающего механическое отделение эмбриона от собственной желточной оболочки и посадку без инкубации в растворе Версена на ангар или чужеродную желточную оболочку, только 30,4Я эмбрионов имеют признаки начала развития, причем развитие идет с существенным замедлением темпов роста и с неправильной дифференцировкой сомитов, При этом эмбрионы погибают на 5 — 7-й стадиях развития.
1358872
Таблица 1
Продолжительность инкубации1 мин
Проннкубировано эмбрионо шт
Количестяо эмбрионов достигших 1213-й стадии раэрикрепившихся е менее чем прикрепившихся по всей прикрепившихся менее чем полонеприкрепившихся начавших раэнитие виной окружности оловиной окужности окружности шт шт
7,7
7,7
92,3
7,7
57,1
7,1
35,7
64,3
57,1
50,0
30,0
20,0
80,0
60,0
43,5
30,4
21,7
56,5
4,3
69,6
20
3ii6
36>8
21,1
68,4
10,5
68,4
13
20,0
80,0
20,0
60,0
66,6
66,6
33,3
Таблица 2
Количество эмбрионов
Способ пересадки достигших 1213-й стадии всего пересажено,шт. начавших развитие развития
) шт Е шт
7 30,4 0
46 69,7 40
Известный
60,6
Предлагаемый
Составитель И. Тареева
Редактор Л. Веселовская Техред И. Верес Корректор М. Максимишинец
Заказ 5633/4 Тираж 628 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
l 13035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Формула изобретения
Способ пересадки ранних эмбрионов птиц, включающий отделение эмбриона от собственной желточной оболочки и трансплантацию его на подложку с последующей инкубацией, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности эмбриона и упрощения способа, отделение эмбриона осу13 0
14 0
10 5
23 10
19 6
5 0
6 0 ществляют перед трансплантацией путем выдерживания его в солевом растворе Рингера, после чего эмбрион инкубируют в течение 10 — 20 мин в растворе Версена, трансплантацию эмбриона осуществляют эктодермой вниз, а в качестве подложки используют чужеродную желточную оболочку, уложенную внутренней стороной вверх.
