Способ определения асептического воспалительного процесса при повреждении ткани

 

Изобретение относится к медицине , точнее к педиатрии, касается способов диагностики асептического восг палительного процесса в организме ребенка пр различных заболеваниях ; Цель изобретения - снижение травматичности способа Для этого проводят биохимический анализ количества липидов, выд1еляемых с мочой за сутки. Обнаружено, что суммарная экскреция липидов за сутки является специфичиыы и чувствительным тестом для диагностики наличия, активности и тяжести асептического.интерстициального воспаления в ткани почек, в коже у детей. При уровне метаболитов липидов , экстрагируеьих н-бутанолом, 1200 мг/сут и более при наличии хемотаксической и цитолитической ности: определяют асептический воспалительный процесс. Предлагается безбиопсийньб атравматичный метод контроля за течением воспалительного процесса у двт. 2 табл. I (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3955550/28-14 (22) 13,06.85 (46) 29.02 ° 88 Бюл. Р 8 (71) Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии (72) Ю,Е,Вельтищев, В.И,Державин, Э.А.Юрьева, Е.К,Баландина, Е.С.Воздвиженская, И,В,Казанская, С.И.Воздвиженский, Л.И.Будкевич, А,И,Клембовский, А.В Брыдун, О.Г.Архипова, В,А,Комаров, Л.В,Гранова и Н.Б.Сельверова (53) 616.07 (088.8) (56) Серов .В.В, Морфологические основы иммунопатологии почек, И.: Медицина, 1968, с, 30-35, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА ПРИ. ПОВРЕЖДЕНИИ ТКАНИ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к педиатрии, касается спо„„SU„„1377737 А i gg 4 С 01 И 33!48 собов диагностики асептического вос.-. палительного процесса в организме ребенка при различных заболеваниях.

Цель изобретения — снижение травматичности способа, Для этого проводят биохимический анализ количества липидов, выделяемых с мочой эа сутки, Обнаружено, что суммарная экскреция липидов. эа сутки является специфичныи и чувствительным тестом для диаг ностики наличия, активности и тяжести асептического интерстициального воспаления в ткани почек, в коже у детей. При уровне метаболнтов липидов, экстрагируемах н-бутанолом, 1200 мг/сут и более при наличии xe" мотаксической и цитолитической активности определяют асептический воспалительный процесс, Предлагается безбиопсийный атравматичный метод контроля эа течением воспалительного процесса у детей. 2 табл.

1377737

Изобретение относится к медицине, s частности к педиатрии, и можета бйть использовано для определения асептического воспалительного про- 5 цесса у детей.

Целью изобретения является снижение травматичности способа за счет использования в качестве биологического материала мочи ребенка, в кото- 10 рой определяют содержание метаболитов липидов.

Способ осуществляют следующим. образом.

H-бутанольный экстракт метаболи- 15 тов липидов производят из 5 мя суточной мочи, предварительно центрифугируют мочу от клеток при 1,5 тыс. об,мин в течение 5 мин, К 5 мп надосадочной мочи добавляют 5 мп н-бутанола и оставляют на 30 мин при комнатной температуре при периодическом встряхивании. Затем помещают смесь . в делительную воронку, удивляют ниж-. ний слой обезжиренной мочи, а бута2S нольный экстракт. переносят в сахарный стаканчик и выпаривают досуха в вытяжном шкафу в.песочной (водяной) бане при 60 С, можно использовать струю сжатого воздуха или азота для ускорения выпаривания Сухой остаток взвешивают и пересчитывают на суточное количество мочи, Увеличение экскреции биологически активных метаболитов липидов более 1200 мг/сут 35 свидетельствует о наличии асептического воспаления.

Полученный сухой экстракт взвешивают, растворяют в 5 мл физраствора и используют для определения его 40 хемотаксических и цитолитических свойств методом "кожного окна" у здоровых взрослых добровольцев in vivoHa сгибательную поверхность предплечья, предварительно обезжиренную 45 спиртом, наносят экскориатором сеточку (1,0<1,0 см) так, чтобы не были

Повреждены капилляры и на коже появилась только плазма, которую снимаФ ют сухим тампоном. На ранку, сделанную проксимальнее контр олькой на

5 см, наносят каплю липидного экстракта в изотоническом растворе NaC1 °

После экспозиции, равной 1 мин, остаток капли экстракта устраняют марлевым тампоном, На обе ранки накладывают предметные стекла на 9 ч, которые меняют на вторые стекла и снимают их через 24 ч, Снятые стекла фиксируют 96 метанолом, окрашивают по Романовскому, изучают под иммер сией.

Пример 1, Больная О,, блет, поступила 16.05.85 г, Получила ожог кипятком (253 поверхности тела), перенеспа шок. Была многократно обследована, в моче постоянно определялся мелкогранулированный тканевой детрит, высокая повреждаемость клеток воспаления липидами. В результате консервативной терапии s течение 1 мес в отпечатках "кожного окна" постоянно выявлялись нейтрофилы-64, макрофаги — 28, гранулоциты4 (1), через 24 ч нейтрофилы - 60, макрофаги — 20, гранулоциты — 16 (ХТ), Все клетки воспаления имели выраженwe признаки дистрофии в виде наличия крупных вакуолей в цитоплаэме и пикноза ядер, Полярные метаболиты липидов постоянно определялись в моче: 18.05.85 1,66 г/сут, 2,06,85

6,2 г/сут, 26,06.85 7,45 г/сут.

Пример 2. Больная Н., 9 мес. поступила в отделение с подозрением на порок развития мочевой системы, Девочка от 3-й беременности, вторых родов,. протекавших с токсикозом 1 и 2-й половины. Во время беременности в 1-й половине мать была привита противогриппозной сывороткой.

Девочка родилась весом 2800 г, до

3-х мес развивалась нормально, В

3 мес появилась дизурия, подъем температуры тела до 39 С, изменения в моче, антибактериальная терапия не была эффективна, Поступила в тяжелом о состоянии, температура до 38 С, явления токсикоза, частые болезненные мочеиспускания, После проведения обследования на урограммах выявлено удвоение левой почки, функция снижена, гидронефрические изменения, мочеточиик резко расширен, извитой. На цистограмме патологии нет имеется дефект наполнения на 5 ч, Поставлен диагноз: мегауретер верхней половины удвоенной почки слева, уретроцеле.

После проведения дезинтоксикационной терапии состояние несколько улучшилось, нормализовались показатели крови. Больной проведена операция геминефруретерзктомия .слева, иссечение уретроцеле, Послеоперационный период протекал тяжело, потребовались прямые переливания крови и 4 по 50 мп, длительная инфузионная терапия, за1377737

0,0663 Белок

Сплошь все поле

Нет

2-3 в поле зр ения I 5

Белок

Эритроци ты

Посев мочи

Эритроциты Нет

Посев мочи

Нет

Кишечная 500 тыс палочка микроббактери- ных тел урия

Роста нет

Анализ крови общий

Анализ крови общий

60 ед.

6 300

Нв

Тоз

Норма

РОЭ 12 мм/ч

Биохимический анализ мочи

Биохимический анализ мочи

ФосфолипиФосфолипиды

Этаноламин

Э таноламин

250

700

4С

Фосфолипаза С О

Фо сфолипаза С 0,6

Фосфолипаза А О

Фосфолипаза А 0

Полярные метаболиты лили»

6,48 г/аут дов

Полярные метаболиты липи дов

0,58r г/сут °

50 живление раны первичное. На 20-е сут выписана домой в удовлетворительном состоянии. При обследовании в динамике через 6 и 12 мес функция оставшей- 5 ся половины удовлетворительная. Анализ мочи — норма.

Результаты исследования:

Анали мочи при Анализ мочи в капостунлении тамнезе 10 териальное воспаление и нормализует. ся метаболизм.

Пример 3. Больная И.К., 6 лет, гидронефроз, хро жческий пиелонефрит, Поступила с обострением, осенью. В моче определяются полярные липиды до 500 мг/сут, кристаллы, единичные лейкоциты. После 1,5-месячного лечения в моче липиды до 100 мг/сут, общее состояние удовлетворительное.

Пример 4. Больной П Р., 14 лет, ожог (15K) кипятком. Клиническое течение тяжелое, заявление протекало плохо, с отторжением трансплантата кожи, с нагное..жем и некроsoM образованием келоидных рубцов и наличием выраженной интоксикации.

Липидурия в моче 1900 мг/сут.

Пример 5. Больной В.В., 8 лет, ожог пламенем верхних конечностей, площадью 107., Клиническое течение средней тяжести, зпителиэация первичным натяжением без нагноения с приживлением трансплантата кожи через 8-10 дней, выписан в удовлетворительном состоянии, Липидурия в моче 230 мг/сут, Пример 6. Больная С,А., 4 года, проникающий перелом теменной области, ушиб и раэмозжение мозга, ликворея, Острый период клинически протекал тяжело, липидурия в моче

1200 мг/сут, Состояние после пластики тяжелое, длительная температура.

Пример 7. Больная К.С,, 5 лет, перелом левой теменной области, ушиб головного мозга. Острый период протекал тяжело, однако температурная реакция была только один день, проводилась инфузионная терапия, лечили нейролептиками. Уровень липидов в моче 200 мг/сут.

Проведена диагностика воспалитель. ного процесса с помощью предлагаемого способа у 40 детей с интерстициальным нефритом (биопсия), а также у больных с ожогами (30 чел) и скелетной травмой (10 чел,). Результаты представлены в табл,1 и 2, Существующее абактериальное интер- стициальное воспаление осложняется, у данного ребенка присоединением ми@робкого воспаления и нарушенным оттоком мочи. Оперативное вмешательство, направленное на нормализацию оттока мочи, приводит к клиническому выздоровлению, ликвидируется бакВ контрольных отпечатках через

9 ч воспалительный процесс характеризовался проявлением нейтрофилов, которые через 24 ч замещались макро. фагами. Признаков деструкции клеток не выявлялось. Результаты исследования морфологической картины в отпе35 часть экстрагируемых липидов мочи представлена длиноцепочечными жирными кислотами (С,qz ) эмульгированиыми этаноламином или мочевиной. Это было подтверждено проведением высо- 50 ковольтного электрофореза на бумаге; тонкослойная хроматографическая иа силикагеле в неполярной системе растворителей для разделения общих, пипидов (1) и в полярной системе 55 растворителей, используемой для раз5 1 377? чатке "опытной" кожной ранки показали наличие извращенного хемотаксичес-, кого действия биологически активных метаболитов липидов: вместо пришед5 ших в контрольную ранку нейтрофилов (норма) через 9 ч (табл,2) в опытной ранке появляются гистиоциты и макро" фаги с признаками дистрофии, а у двух обследуемых (1,3) преобладал цитоли- 10 тический эффект над хемотаксическим, так как практически все клетки, приходящие в опытную ранку, были разрушены в течение всего периода наблюдения (через 9 и 24 ч), В остальных случаях (2,4,5) во 2»й фазе воспаления в "опытном" "кожном окне" отмечалось сохранениеили усиление извращенного макрофагального хемотаксиса при выраженном цитолитическом эффекте 20 биологически активных метаболитов липидов. Лимфоциты оставались неизменными. Нормальной смены клеток воспаления не наступало, Кроме того, в отпечатках кожной ранки в опыте 25 отмечались в большом количестве мелко гранулированные липидные структуры, а в ряде случаев кристаллы уратов.

Таким обрasом, исследование 30 свойств, биологически активных метаболитов липидов на клетки воспаления

in vivo у взрослых зцоровых добровольцев методом "кожного окна" свидетельствует о хемотаксической и цитолитической активности их, что полностью подтверждает наличие зндогенного асептического воспаления в организме ребенка.

Для идентификации и характеристи- 40 ки зкстрагируемых из мочи полярных метаболитов липидов применялись следующие методы: — ИК-спектрометрия и масс-спектрометрия — показано, что основная

37 деления фосфолипидов (2), Фракция, остающаяся на старте при применении

1-й системы растворителей, во 2-й системе растворителей разделяется на ряд фракций, которые не совпадают по величине P с основными.фракциями фо сфолипидов — газожидкостная хроматография полярных метаболитов липидов показала, что 32+3,1Х от общего количества жирных кислот составляет арахидоно-г вая кислота, а также отмечается высокое содержание моно- и полиненасьпценных жирных кислот.

В моче .здоровых детей и взрослых полярные метаболиты липидов отсутствуют, появление незначительных количеств {до 500-800 мг/сут) не свидетельствует о наличии воспалительного процесса в организме, являясь разновидностью адаптации цитомембран к стрессовым ситуациям, т.е. ответной реакцией на воздействие новых факторов окружающей среды (перемена клима» тических зон, сезона года), на воздействие повреждающих факторов (местный ожог, травма). Изучение действия малых концентраций полярных метаболитов липидов в "scm oM окне показало отсутствие провоспалительного действия этих концентраций: не было отличия воспалительной реакции в ранках "кожного окна" под действием таких доз препарата и под действием изотонического раствора хлористого натрия (физраствор)

Предлагаемый способ определения асептического воспалительного процесса у детей является атравматичным, доступным для воспроизведения в клинических лабораториях, Формула изобретения

Способ определения асептического воспалительного процесса при повреждении ткани путем исследования биологического материала, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью снижения травматичности способа, определяют содержание в моче метаболитов липидов, экстрагируемых н-бутанолом, и при их уровне 1200 мг/сут и более при наличии хемотаксической и цитолитической активности определяют асептический воспалительный процесс, 1377737

Таблица

Критерии диагностики воспалительного процесса у детей с хирургической патологией

Выраженно сть деструкции

Характер хемотаксиеа в "кожном окне"

Ноэоология

Резко. повышен при на. Выражена

Ф личин цитолиза

Интерстициальный нефрит (40) 5,9+О, 7

Ожоговая болезнь (30) 5,149,61

Резко повышен при наличии цитолиза

Скелетная травма (10) 2,67+0,3

Повышен

Умеренный, нейтрофилы

Здоровые дети

Невыражена

Таблица 2

Результаты токсического действия полярных метаболитов липидов на клетки воспаления у добровольцев (метод "кожного окна") Обследуемый, В n/è

Контроль

9-ч 24 ч

Опыт

24 ч н-90

-70 и-20 г-10 м-90 н-20. м-20 л-10 л-2 Единичные м-60 н-90 л-10 м-10 м-60 м-90 н-80 н-35 н-8 м-18 л-2 эоз-15 эоз-2 л-5

Количество липидов

r/сут н-70 г-10

Клеток нет, большое количество разрушенных клеток

Большое количество.фрагментов разрушенных нейт-1, рофилов

Большое количест во фрагментов раз рушенных клеток н-40 и- 0/20 цитолиэ

Выражена

Выражена

Единичные лимфоци ты, обильный тканевой детрит

Фибриллы, обильный тканевой детрит

Клеток не выявляется, обильный тканевой детрит

1377737

Продолжение табл.2 Контроль

0666eAF4964 i .Ф а/и

20 ч м90 н-30 н-70 м-60 н-5 м-20

r-10 л-!О 10

П м е ч а н и е. н - нейтрофилы, м — макрофаги, л - лимфоци™, r - гистиоциты, ф - фибробласты, эоз — эозинофилы, Составитель В,Гудошников

Техред Л.Олийнык

Редактор 3.Слиган

Корректор М.Максимишинец. Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, М-35, Раушская наб., д,4!5

Заказ 865/40

Производственнонолиграфическое лредприятие, г,ужгород, ул.Проектная,4