Способ определения концентрации гемоглобина в крови

 

Изобретение относится к области биохимии и медицины и может быть использовано для определения концентрации гемоглобина в крови. Цель изобретения - снижение токсичности. К пробе крови добавляют додецилсульфат натрия или соль жирной кислоты (С С 2д),-феррицианид калия, ЭДТА, трис- НС1, затем смесь инкубируют десять минут и измеряют оптическую плотность при 540 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см и рассчитывают концентрацию гемоглобина с учетом коэффициентов молярной экстинкции и разведения крови. с б (f. С

Взамен ранее изданного

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 G 01 N 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTGPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

I риновой, в шестую — арахиновой, в седьмую — олеиновой и в восьмую арахидоновой кислоты. Пробы инкубируют 10 мин и регистрируют на спектрофотометре Спекорд".

В спектрах проб 3-8 наблюдается появление пика с максиМумом поглощения при 540 нм, интенсивность которого не зависит от повьш ения концентрации соли жирной кислоты.

Пример 2. Определение коэффициента экстинкции комплекса гемоглобина с миристатом, В девять пробирок помещают по

4 мл растворов, содержащих гемоглобин в разных концентрациях, по 10 мМ трис — НС1, 1 мМ ЭДТА, рН 7,4, Добавляют в каждую 1 мл раствора, содержащего 5 мМ миристат калия, 6 мМ феррицианид калия, 1О мМ трис — НС1, 1 мМ ЭДТА, рН 7,4. Пробы инкубируют

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4021802/28-14, 4021806/28-14 (22) 10 ° 02.86 (46) 15 ° 01.90. Бюл, N - 2 (71) Институт биоорганической химии

AH БССР и Белорусский государственный институт усовершенствования врачей (72) А,А. Ахрем, Г,М. Андреюк, 1I,А, Киселев, М,А. Кисель, В.Г, Колб, Т ° С. Дальнова и С.Г. Светлицкая (53) 612.015 (088.8) (56) Справочник по клиническим лабо— ратарным методам исследования. Под ред, Е.А. Каст. М.: Медицина, 1975, с. 11-14.

Изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к определению концентрации гемоглобина, Цель изобретения — снижение токсичности.

Поставленная цель достигается за счет добавления к анализируемой пробе феррицианида калия соли жирной кислоты (С, -С, ), или додецилсульфата натрия.

Пример 1. Установление жирных кислот, образующих комплекс с гемоглобином.

В восемь пробирок, содержащих по 0,2 мл 5 ° 10 N раствора метгемоглобина,приливают 4,8 мл раствора калиевой соли жирной кислоты. При этом в первую приливают раствор каприновой, во вторую — лауриновой, в третью — миристиновой, в четвертую — пальмитиновой, в пятую — стеа„„SU„, 1 38690! А 1

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ

ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ (57) Изобретение относится к области биохимии и медицины и мажет быть использовано для определения концентрации гемоглобина в крови, Цель изобретения — снижение токсичности. К пробе крови добавляют додецилсульфат натрия или соль жирной кислоты (С,,—

С,),.феррицианид калия, ЭДТА, трисНС1, затем смесь инкубируют десять минут и измеряют оптическую плотность при 540 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см и рассчитывают концентрацию гемоглобина с учетом коэффициентов малярной экстинкции и разведения крови.

1386901

Ф о р м ул а и з о б р е т е н и я

Составитель Л.Сабурова

Техред П.Олийнык Корректор lI, Патай

РФдактор О, Филитова

Заказ 152 Тираж 513 Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент",„ г.ужгород, ул. Гагарина, 101

5- 10 мин и измеряют оптическую плот1 ность при 540 нм в кювете с толщиной с оя 1 см против холостой пробы, не сддержащей гемоглобина, По данным

5 о 1тической плотности и известных концентраций гемоглобина строят калибровочный график, из которого определяют коэффициент экстинкции комплексе гемоглобина с жирной кислотой, Коэффициент равен 35920 M "см- или !

8980 М см- в расчете на 1 гем.

Пример 3. Определение концентрации гемоглобина в крови. К 20 мкл крови приливают 5 мл 15 р створа, содержащего 1 MM миристат калия, 0,6 мМ феррицианид калия, 1 (мМ ЭДТА, 10 мм трис-НCa, рН З,4.

С есь инкубируют 10 мин и измеряют о тическую плотность при 540 нм в к вете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы, не содержащей крови.

Кс1нцентрацию гемоглобина в крови определяют по формуле

НЬ (И) = ° 25 1 или

E 25

НЬ, (г/л)=1,9 E 251, г е Š— оптическая плотность пробы при 540 нм, При E=0,27 НЬ=1,9.0,27.251 129 г/v,30

Цифра 4 обозначает количество субъединиц в молекуле гемоглобина, 231 — коэффициент разведения крови, 68000

8980 4 =-1,9 — коэ и ие . для выр ния концентрации в г/л, П р.и м е р 4. Определение концентрации гемоглобина в крови, В девять пробирок, содержащих 5 мл

0,067.-ного раствора додецилсульфата натрия, добавляют по 20 мкл крови донора, энергично встряхивают, инкубируют 10 мин при комнатной температуре и измеряют поглощение при 540 нм на спектрофотометре Спекорд" в кювете с длиной оптического пути 1 см.

Рассчитывают концентрацию гемоглобина в крови по формуле, приводимой выше, учитывая что коэффициент молярной экстинкции гемоглобина с додецилсульфатом натрия равен 9860.

Способ определения концентрации гемоглобина в крови путем обработки пробы крови комплексообразователем с последующим измерением оптической плотности при 540 нм и расчетом, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности, в качестве комплексообразователя используют додецилсульфат натрия, или феррицианид калия и соли жирных кислот (С,,—

С2d)