Способ определения фенобарбитала в биологических жидкостях

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повышение чувствительности способа. В пробирку с плазмой крови вносят фенобарбитал , добавляют ацетатньй 0уфер и хлороформ . После центрифугирования отделенную органическую фазу вьтаривают. Осадок растворяют в хлороформе и наносят на пластинку. Хроматографйческое разделение фенобарбитала дят восходящим способом на пластин ках с закрепленным слоем силикагёля, Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ - диэтиловый эфир. После высушивания проявляют хроматограмьа 1 насыщенным раствором нитрата закисной ртути. Денситометрически проводят количественную оценку хроматограмм. S (Л С С5 .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН д 11 4 О 01 Б 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21 ) 3744097/28-14 (22) 28.05.84 (46) 15.06..88. Бюл. У 22 (71) Институт клинической и экспериментальной неврологии (72) Ф.Г.Ветрогон, В.M,Îêóäæàsà, З.И.Антадзе и Л.И.Сиоридзе (53) 612.015 (088.8) (56) I.Christiansen. Determination

of Hydroxymetabolites of Phenobarbitone and Phenytoin. вЂ” Хп: Clinical

Pharmacology of Antiepileptic Drugs °

N.I.Berlin, 1975, р.131-134. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОБАРБИТАЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к биохимии. Пель изобретения вЂ” повыщенне

„„SU„„1402943 А 1 чувствительности способа. В пробир" ку с плазмой крови вносят фенобарбитал, добавляют ацетатный руфер и хлороформ. После центрифугирования отделенную органическую фазу выпаривают.

Осадок растворяют в хлороформе и наносят на пластинку. Хроматографическое разделение фенобарбитала проводят восходящим способом на пластин ках с закрепленным слоем силикагйля.

Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ вЂ” диэтиловый эфир. После высушивания проявляют хроматограммы насыщенным раствором нитрата закнсной ртути. Денситометрически проводят количественную оценку хроматограмм.

140? 943 ес е (a-Ь)

bd bd

ВН16111И За=,àç "851/34

Тираж 847 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине и может быть-использовано для выявленйя фенобарбитала н биологических жидкостях.

Белью изобретения является повьш(ение чувствительности способа.

Пример. Берут две центрифужные пробирки. В первую пробирку помещают 0,2 мл плазмы крови или спинно- 10 мозговой жидкости, во вторую вЂ” 0,2 мл раствора с заданным количеством фенббарбитала. Такое же количество фенббарбитала вносят в пробирку с плазмс1й крови. В дальнейшем обработку со- !5 д ржимого обеих пробирок проводят .одинаково. Добавляют 0,1 мп ацетатнога буфера (рН 4,5) и 2,5 мл хлороформа1. Пробирки взбалтывают в течение

1 мин, затем центрифугируют 5 мин ° 20

Отделенную органическую фазу помещают на фарфоровую чашку и выпариваO. ют на водяной бане при 55 С. Оставшййся осадок растворяют в 0,2 мл хлороформа и наносят на пластинку в ко- 25 лихачестве 0,02 мл. Хроматографическое ра эделение фенобарбитала осуществляеМся восходящим способом на пластинка х с закрепленным слоем силикагеля.

Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ дйэтиловый эфир (3:1) при длине

100 мм. Повторное хроматографирование проводят через 20 мин после первого р зделения, предварительно высушив

35 п астинку при комнатной температуре.

Полученные хроматограммы после высушивания проявляют насыценным раствс1ром нитрата закисной ртути, который о разует с фенобарбиталом окрашенное 40 соединение, проявляющееся на пластинках в виде пятен с различной интенсивностью окраски (от светлых до темно-серых) на белом фоне. Количественную оценку хроматограмм проводят ден- А5 сйтометрически.

Измеряют площади пиков заданного количества фенобарбитала (Ь) и крови или спинномоэговой жидкости с заданнь1м количеством фенобарбитала (а).

Разница между этими пиками дает площадь пика биолитиче-кой жидкости

Ф т.е, с = а вЂ” b (мм . Зная количество фенобарбитала в заданной пробе крови, находят содержание фенобарбитала в опытной пробе крови путем составления пропорции

Ь-е=с:m, где е вЂ” количество фенобарбитала в заданной пробе, мкг;

m " "количество фенобарбитала в опытной пробе биологической жидкости, мкг.

Отсюда е.с ш вЂ” « °

Если обозначить количество биологической жидкости, взятой для обработки, через d, то количество фенобарбитала на 1 мл равно

Если заданное количество фенобарбитала (е) равно 50 мкг, площадь пика спинномозговой жидкости + 50 мкг фенобарбитала, введенного в пробу (a) 3735 мм, площадь пика пробы, со2 держащий 50 мкг фенобарбитала (Ь)

3680 мм, количество взятой для ана" лиза спинномоэговой жидкости (d)

0,2 мл, содержание фенобарбитала в спинномозговой жидкости составляет

Х = 3,73 мкг/мл.

Чувствительность метода по известному способу составляет 40-45 мкг, а по предлагаемому вЂ” 1,2 мкг.

Формула изобретения

Способ определения фенобарбитала в биологических жидкостях путем экстрагирования пробы органическим растворителем, центрифугирования,вы-, паривания органической фазы, раство- . рения остатка в. органическом растворителе, тонкослойной хроматографии и денситометрирования, о, т л ивЂ” ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, разделение проводят с помощью тонкослойной хроматографии с применением внутреннего стандарта и с использова" нием системы растворителей хлоро- форм вЂ” диэтиловый эфир.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано для высокочувствительного определения нуклеиновых кислот в присутствии белков, а также для определения активности ферментов, участвующих в метаболизме нуклеиновых кислот и при анализе структуры полинуклеотидов

Способ количественного определения истинного белка в кормовых дрожжах // 1401380

Изобретение относится к определению содержания истинного белка в кормовых дрожжах гидролизных производств или белково-витаминных производств или в белково-витаминных концентратах

Способ определения интенсивности дыхания дрожжей // 1401379

Изобретение относится к микробиологии и микробиологической промышленности, а именно к способам определения интенсивности дыхания микроорганизмов

Способ выявления субпопуляции лимфоцитов, экспрессирующей опиатные рецепторы // 1400277

Изобретение относится к биологии и медицине, точнее - к имуннологии, предназначено для определения рецепции ли iфoцитaми любых эьздогеннык

Способ диагностики инфаркта миокарда в поздней стадии заболевания // 1399684

Изобретение относится к кардиологии

Способ определения костно-суставной патологии при псориазе // 1399683

Изобретение относится к медицине

Способ определения каталазы в крови // 1399682

Изобретение относится к технике определения активности ферментов и может быть использовано в биологических исследованиях, а также в ветеринар но-медици не кой практике

Способ исследования сывороточной системы крови человека // 1399681

Изобретение относится к медицине , точнее к лабораторной диагностике

Способ подготовки эритроцитов к электронно- микроскопическому исследованию // 1399680

Изобретение относится к медицине, предназначено для диагностики патологии крови (напр, при иммунной несовместимости крови матери и плода)

Способ определения индивидуальной чувствительности к антиангинальному препарату у больных ишемической болезнью сердца // 1399679

Изобретение относится к медицине , точнее к кардиологии, предназначено для выбора антиангинальных препаратов для лечения больных ишемической болезнью сердца (ИБС)

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750