Способ получения производных карбапенема
Изобретение касается производных карбопенема, в частности получения соединений общей ф-лы С(0)ОК, ЩС-СН( Н где R, - Н, n-NO -С Нд-СНг или алкил при наличии противоиона; R - пиридиний, или замещенные пиридииий, иьшдазолий, тиоморфолиний, пиперазиний, морфолиний; А - этилен, незамещенный или замещенный , обладающих антибактериальной активностью и используемых в медицине. Цель - упрощение процесса. Последний ведут в одну стадию из соответствующего кетоэфира, дифенилфосфата диизопропиламина и производного меркаптана (МП) в среде органического растворителя при температуре от -15 С до комнатной, лучше при (-15)-(15) С. В качестве МП используют тиол HS -A-R,, где А и R, имеют указанные значения. Новый исходный тиол является легкодоступным соединением, позволякяцим вести процесс в одну стадию. 2 з.п. ф-лы. (У)
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н ПАТЕНТ У ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3711600/23-04 (22) 07.03.84 (31) 557295 (32) 01.12.83 (33) US (46) 15.09.88. Бюл. Н 34 (71) Бристоль-Мейерз Компани (VS) (72) Пьер Декстрейз (СА) (53) 547.712.22.07(088.8) (56) Патент ФРГ HI 3312533, кл. С 07 D 499/00, 1983 ° (54) СПОСОБ ПОЛУЧБНИЯ ПРОИЗВОДНЫУ КАРБАПЕНЕМА (57) Изобретение касается производных карбопенема, в частности получения соединений общей ф-лы К C(0)ORf Н С-CH(0 = 2 „„SU „„1424737 А 3 где R< — Н, и-NO -С Нд-СН или алкил при наличии противоиона; К вЂ” пиридиний, или замещенные пиридиний, имидазолий, тиоморфолиний, пипераэиний, морфолиний; А — этилен, незамещенный или замещенный СН, обладающих антибактериальной активностью и используемых в медицине. Цель — упрощение процесса. Последний ведут в одну стадию из соответствующего кетоэфира, дифенилфосфата диизопропиламина и производного меркаптана (ЧП) в среде органического растворителя при темо пературе от -15 С до комнатной, лучше при (-15)-(15) С. В качестве ИП используют тиол HS -А-Е,, где А и R< имеют указанные значения. Новый исходный тиол является легкодоступным соединением, позволяющим вести процесс в одну стадию. 2 з.п. ф-лы. 1424737 Изобретение относится к способам получения производных карбапенема общей формулы ОЯ S-А-R 2 соор где К вЂ” водород, паранитробензильная или аллильная защитная группа при наличии также противоиона; R< — пиридиний или замещенные пиридиний, имидаз олий, тиоморфолиний, пиперазикий, морфолиний, А — этилен, неэамещенный или замещенный метилом, циклогексил, 20 обладакицих антибактериальными свойствами. Целью изобретения является упрощение процесса за счет использования в качестве исходного продукта менее дорогого и легкодоступного тиола общей формулы л HS А R, ! где А и R HMe T K HHbie 3H eHH . 30 Пример 1. Получение 3-/2/1-пиридиний/этилтио/-60(-/1-/R/-оксиэтил/7-оксо-1-аз абицикло/3. 2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. А. 1-/2-Меркаптоэтил/пиридинийме35 тансульфонат. В суспензию пиридинийметансульфоната в пиридине, полученную при помощи добавления по каплям метан(моно)сульфокислоты (1 95 мл, 0 03 моль) 40 в пиридин (8,0 мл, 0,099 моль) при охлаждении, добавляют этиленсульфид (1,96 мл, 0,033 моль). Полученную в результате смесь перемешивают при 55 С в течение 16 ч и концентрируют 45 при пониженном давлении до густого сиропа, который смешивают с несколькими миллилитрами воды. Раствор сливают на верхнюю часть колонны (40 х х 16 см) из р -бондапэка С-18, которая элюируется водой. Лиофилизация соответствующих фракций дает бесцветный сироп 6,5 г (91X) ° В. 1-/2-Меркаптоэтйл/пиридинийхлоР ° Метод А. Водный раствор неочищенного 1-/2-меркаптозтил/пиридинийметансульфоната (9,4 r, 0,04 моль) сливают на верхннзю часть колонны (2,5 х 4 1 см) из пермутита S- 1 Cl . Колонна элюируется водой со скоростью 0,5 мл/мин, соответствующие фракции соединяют и в результате лиофилизации получают желтоватый сироп 7,0 г (100X), который используется на следующей стадии. Метод В. В предварительно охлажденный (ледяная ванна) пиридин (5,6 мп, 70 моль) добавляют хлоргидрат пиридина (4,05 r, 35 ммоль) в сульфид этилена (2, 1 мл, 35 ммоль). О Смесь нагревают до 65 С и перемешивают 75 мин, в результате чего получают двухфазную систему. Более легкую фазу удаляют. Оставшееся масло промывают простым эфиром (5 х 10 мп) и обрабатывают глубоким вакуумом, в результате чего получают искомбе соединение (90-100X), которое исйользуют на следующей стадии. С. Паранитробензил-3-(2-/1-пиридиний/этилтио)-бс - (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-аэабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатхлорид. Раствор паранитробензил-6 -(1-/R/-оксиэтил) 3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (6,09 г, 17,5 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) охлаждают до +5 С в атмосфе-, ре азота и обрабатывают последовательно диизопропилэтиламином (3,65 ип, 21,0 ммоль) и дифеиилхлорфосфатом (4,34 мп, 21,0 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивают 30 мин при 5 С, охлаждают до -5 С и обрабатывают последовательно раствором неочищенного 1-/2-меркаптоэтил/пиридинийхлорида (4,3 г, 24 ммоль) в И, N-диметилформамиде (1,0 мл) и по каплям диизопропилэтиламином (3,65 мл, 21,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч охо Ф лаждают до -30 С и перемешивают еще 15 мин. Твердое вещество отделяют фильтрацией и промывают холодным (-30 С) ацетонитрилом (5,77 г, 65X). Фильтрат и промывочную жидкость соединяют и разбавляют-простым эфиром (150 мл). Верхний слой декантнруется, а смолу растворяют в воде (40 мп), содержащей достаточное количество ,ацетонитрила для того, чтобы получить раствор, который сливается на верхнюю часть колонны (3 х 1О см) из р-бондапэка С-18. Затем колонну элюируют смесью 1АХ ацетонитрила — 907 воды (150 мл) и смесью 507 ацетонитрила50Х воды (100 мл). Соответствующие 3 14247 фракции соединяют и лиофилизуют после того, как ацетонитрил бып удален под вакуумом, что дает в результате желтоватый порошок. Его ЯМР-спектр указ. вдет на присутствие искомого соединения, смешанного с некоторым количеством паранитробензил-3/2-/i-пиридиний/этилтио/-68. †/1/R/-оксиэтил/-7-оксо-1-аэабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифени;тфосфата (2:1). Порошок растворяют в воде (в минимальном количестве) и пропускают через колонну (1,5 х 21 см) из пермутита S -1С1 с водой. Лиофилизация со" отстветствующих фракций дает 1,8 r (20X) искомое соединение. D. Паранитробензил 3-(2-/1-пиридинии/этилтиоз -6 -(1-/R/-оксиэтил1-7» -оксо-1-a=-абицикло/3.2.0/гепт-2-ен20 -2-карбоксилатдифенилфосфат. Раствор паранитробензил-6Ы-(1-/R/-оксиэтил1-3;7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (О, 174 г, 0,50 ммоль) в ацетонитриле (2 мп) ох- 25 лаждают до О С в атмосфере азота и обрабатывают последовательно диизопропилэтиламином (0,150 мп, 0,.60 ммоль) и дифенилхлорфосфатсм (01124 мл, 0,60 ммоль). Полученный в результате раствор перемешивают 30 мин при О С и обрабатывают последовательно раствором 1-(2-меркаптоэтил)пиридиний метансульфоната (О, 170 г, 0,72 ммоль) в ацетонитриле (0,6 мл) и диизопропилэтиламином (0,150 мп, 0,60 ммоль). 35 Реакционную смесь перемешивают при О С в течение 15 мин, разбавляют холодной (О С) водой (7 мл) и сливают о на верхнюю часть колонны (1,5 х х 6,4 см) из р-бондапэка С-18. Ко40 лонна элюируется смесью ацетонитрила (25-50X) в воде (75-50X). Соответствующие фракции соединяют и лиофилизуют после того, как ацетонитрил удален под вакуумом, в результате чего получают желтоватый порошок (0,33 г, 92Х). Е. 3- (2-/1-Пиридиний/этилтио|— -6 - (1-/R/-оксиэтил1-7/-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбокси- 50 лат ° Метод А. В раствор паранитробензил-3-(2-/1-пиридиний/этилтио) -6ю — (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-карбоксилат дифе- 55 нилфосфата (О, 16 r, 0,22 ммоль) в "мокром" тетрагидрофуране (10 мл) добавляют простой эфир (10 мп), кали37 4 евый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия с Н 7,4 (16 мл, 0,05 М) и 107-ный палладий на древесном угле (0,16 г). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации при давлении 2,8 12 кг/см в течение 1 ч при 25 С. Две фазы разделяют и органическую фазу экстрагируют водой (2 х 3 мл). Водные растворы соединяют, промывают простым эфиром (2 х 10 мл.) и сливают на верхнюю часть колонны (1,5 х 6,2 см) из р-бондапэка С-18 после того, как следы органических растворителей удалены под вакуумом. Элюирование колонны водой дает после лиофилизации соответствующих фракций желтоватый порошок (0,062 г, 843) . Метод В. В раствор хлорида паранитробензил-3-(2-/1-пиридиний/этилтио)-6о(; (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата (5,77 r, 11,4 ммоль) в калиевом фосфатном буфере моноосновного гидрата окиси натрия (170 мп, 0,2 М, рН 7,22) добавляют тетрагидрофуран (30 мл), простой эфир (30 мп) и 10Хный палладий на древесном угле (5,7 г). Полученную в результате смесь подверо -гают гидрогениэации при 22 С при давлении 2,812 кг/см в течение 1 ч и фильтруют на прокладке Целита. Прокладку промывают водой (2 х 15 мп):. Фильтрат и промывочную жидкость соединяют и разбавляют простым эфиром (100 мл). Водную фазу отделяют, промывают простым эфиром (3 х 100 мл) и сливают на верхнюю часть колонны (4,5 х 20 см) из р-бондапэка С-18 после того, как под вакуумом были удалены все органические растворите@ ли. Элюирование колонны водой, а затем смесью 17 ацетонитрила в воде да,ет после лиофилизации соответствую щих фракций 2,48 r (657) искомого ;соединения в виде желтоватого порош ка. Аналитические данные идентичныь тем, что были проведены для соединения, полученного методом А. П-р и м е р 2. Получение 3-(2-/1-/3,5-диметилпиридиний/этилтио) -Ы— (i-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. А. В суспензию 3,5-лутидиний метансульфоната в 3,5-лютидине, полученную при помощи добавления ме» тан(моно)сульфокислоты (0,65 мл, 0,010 моль) в холодный 3,5-лутидин 142473 (2,51 мл, 0,022 моль) добавляют сульфид этилена (0,655 мл, 0,011 моль). Полученную в результате смесь лерео мешивают в атмосфере азота при 55 С о в течение 24 ч, охлаждают до 23 С и разбавляют водой (5 мл) и простым эфиром (5 мл). Органический слой отделяют, а водный раствор промывают простым эфиром (6 х 4 мл). Следы про- 1ð стого эфира удаляют под вакуумом, а раствор наносят на верхнюю часть колонны (2,5 х 6,0 см) из ч -бондапэка С-18. Колонна элюируется водой, в результате лиофилизации соответствующих фракций получают бесцветный сироп (2,4 r, 917) . Рассчитано: С 44,09; Н 6,66; N 5 э 14 ° S 23 ° 54 ° С<ОНп НО Я 0,5Н О 20 Найдено: С 44,26; Н 6,49; N 5,17; S 24,18. В. Паранитробензил 3- (2-/1-/3, 5-диме тилпиридиний//-этилтио) -6о - (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло- 25 /3.2. О/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. о В холодный (О С) раствор паранитробензил GeL-/1-/R/-оксиэтил/-3, 7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-кар- 30 боксилата (0,523 г, 1,50 ммоль) в ацетонитриле (6,0 мл), который поддерживают в атмосфере азота, добавляют диизопропилэтиламин (0,3 14 мл, 1,8 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,373 мл, 1,8 ммоль). Реакцион" ную смесь перемешивают 30 мин и обрабатывают раствором 1-/2-меркаптоэтил-/3,5-диметил-пиридинийметансульфоната (0,493 г, 1,87 ммоль) в ацетонитриле (1,9 мл), а затем диизопропилэтиламкном (0,314 мп, 1,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, разбавляют холодной (О С) водой (26 мл) и сливают на верхнюю часть колонны (7,0 х 3,5 см) из р-бондапэка С-18. Элюирование колонны смесью 25-50Х ацетонитрила75-50Х воды после лиофилизации соответствующих фракций дает 1,01 г (90X) искомого соединения в виде желтовато- 50 ro порошка. Рассчитано: С 58,03, Н 5,26, N 5,48; S 4;j8. С 51 Н вМ О ю ЯР Нг О Найдено: С 57,98; Н 5,05; N 5,22; 55 S 4,34. С. 3-j2-/1-/3,5-Диметиппиридиний//этилтио)-6М. †(1-/К/-оксиэтил)— -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор паранитробензил-3-j2-/1-/3,5-диметилпиридиний/этилтио)-М. — (1-/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат дифенилфосфата (0,600 г, 0,80 ммоль) в "мокром" тетрагидрофуране (36 мл) добавляют простой эфир (36 мп) ° калиевый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия (0,-05 H, pH 7,4, 44 мл) и 10Х-ный палладий на древесном угле (0,60 r). Полученную в результате смесь затем подвергают гидрогенизации при давлении 2,812 кг/см D и температуре 28 С в течение 1,25 ч. Органический слой отделяют и экстрагируют буфером (2 х 5 мя). Водные слои соединяют, фильтруют через прокладку Целита, промывают простым эфиром (40 мл), обрабатывают под вакуумом с тем, чтобы удалить следы органических растворителей, и сливают на верхнюю часть колонны (2,5 х 10,0 см) из ц-бондапэка С-18. Злюирование колонны водой и лиофилизация соответствующих фракций дает искомое соединение (О, 186 r, 647) в виде желтоватого порошка. Пример 3. Получение (5R 6S)-3-((2-/3-оксиметилпиридино/этил)-тио/-6- (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. A. 3-Оксиметил-1/2-меркатоэтил/пиридинийтрифторметансульфонат. Трифторметан(моно)сульфокислоту (1,327 мп, 0,015 моль) добавляют по каплям в 3-пиридинметанол (2,91 мл, 0,030 моль), а затем в смесь добавляют сульфид этилена (0,89 мл, 0,015 моль). Полученную в результате смесь нагревают (масляная ванна) до 50-70 С в атмосфере азота в течение 20 ч. Реакционную смесь затем переносят в Н О (15 мл) и экстрагируют при помощи СН.С1 (5 х 5 мл). Водную фазу концентрируют под вакуумом, а затем наносят на колбнну обращеннофазовой хроматографии С, . Элюирование водой, а затем выпаривание соответствующих фракций дает серо-желтое масло. Этот материал снова подвергается хроматографии, в результате чего получают почти бесцветное масло. После сушки под вакуумом (В О ) это дает искомый продукт (4,50 г, 947) в виде вязкого масла. Пример 4. Получение (5R,6S)-3- (2-/4-оксиметилпиридинио/этилтио -6-(1-/R/-оксиэтил 1-7-оксо-1-аза" бицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. А. 4-Оксиметил-1-/2-меркаптоэ-н 1/пиридинийтрифторметансульфонат. В раствор 4-пиридннметанола (1,635 r, 0,015 моль) в 10 мл СИ,,С1 при 0 С в атмосфере азота по каплям добавляют трифторметан(моно)сульфокислоту (1,327 мл, 0,015 моль). Желтовато-коричневое масло быстро отделяется. В эту смесь добавляют дополнительный эквивалент 4-пиридинметанола (1,635 r, 0,015 моль) и растворитель удаляют при пониженном давлении, в результате чего получают масло. В это масло добавляют сульфид этилена (0,891 мя, 0,015 моль) и полученную в результате однородную смесь нагревают (масляная ванна) при ) ,мерно до 60 С в течение 3 ч. Затем ,реакционную смесь переносят в 15 мп воды и водный раствор промывают при помощи СН С1 (5х5мл).После удаления остаточного органическогорастворителя под вакуумомводный раствор сливают на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18. В результате элюирования водой и последующего выпаривания соответствующих фракций получают масло, которое затем сушат под вакуумом над P О при этом получают искомый npoz. дукт (4,64 r, 97X) в виде бесцветного масла. В. Паранитробензил (5R,ЬЯ)-3-(2-/4-оксиметилпиридинио/этилтно1 -6— (1-/R/-оксиэтил/-7-оксо-1-азабицнкло (3.2.0) гепт-2-ен-карбоксилатдифенилфосфат. В раствор паранитробензил /5R, 6S/-6- j1-/R/-оксиэтил/-3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (0,348 r, 1,0 ммоль) в 5 мп 7 142473 В. Паранитробензил-(5R,6S-/3- 2-/3-оксиметилпиридинио1 этилтио/-6-$1-/R/-oKcH9THJIj -7-оксо-1-азабицикло/3.?.О/гепт-2-ен-2-карбокснлат. Ь раствор паранитробенэил-/5R, 6S/-6- (1-/R/-оксиэтил) -3,7-диоксо"1-азабицикло/3,2.0/гептан-2-карбоксилата (0,174 г, 0,50 ммоль) в 2 мя сухого ацетонитрила добавляют диизопропилэтиламин (0,096 мя, 0,55 ммоль) при О С в атмосфере азота. Затем по каплям добавляют дифенилхлорфосфат (0,114 мп, 0,55 ммоль) и реакционную о смесь перемешивают при О С в течение 30 мин. Затем добавляют раствор 3-оксиметил-1-/2-меркаптоэтил/пиридинийтрифторметансульфоната (0,223 г, 0,70 ммоль) в 0,50 мл ацетонитрила и диизопропилэтиламин (0,122 мп, 20 0,70 ммоль) ° . После выдерживания при О С в течение 30 мин реакционную смесь концентрируют под вакуумом, а полученную в результате желтую смолу переносят в воду (для ускорения раст- 25 ворения смолы добавляют достаточное количество ацетонитрила) ° Этот раствор наносят на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18, которую затем элюируют смесью 153 ацетонитрила Н О. В результате лиофилизации соответствующих фракций получают продукт (0,305 r, 817) в виде твердого вещества бежевого цвета. С. (5R,6S)-З-t2-/3-оксиметилпиридинио/этилтио1-6- 1-/R/-оксиэтил) -735 -оксо-1-аз а бицикло /3. 2. О / гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор паранитробензил %,5R,6S)-3-/2-/3-оксиметилпиридинио/этилтио/40 -6-/1-/R/-оксиэтил/-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат дифенилфосфата (О, 145 r, О, 194 ммоль) в 10 мп ТГФ, содержащего 5 капель воды добавляют 6,0 мп фосфатного буфера (0,05 М, рН 7,4), 0,145 г 10Хt 45 ного палладия на древесном угле и 10 мп простого эфира. Смесь подверга ют гидрогенизации (Парр) при давлении 2,812 кг/см в течение 1 ч, а затем фильтруют через прокладку Целита. 50 Фильтровальную лепешку промывают небольшим количеством воды и простого эфира, а затем водную фазу отделяют и экстрагируют простым эфиром. Водный о раствор затем охлаждают до О С, обес- 55 печивают рН 7,0 при помощи буфера с рН 7,4. После удаления остаточных летучих материалов под вакуумом водный раствор наносят на колонну обращеннофазоной хроматографии С 18, старую затем элюируют водой. В результате лиофилизации соответствующих фракций получают продукт (36 мг, 517) в виде светло-желтого твердого вещества. В результате очистки с использованием обращенно-фазовой жидкостной хроматографии под высоким давлением получают чистый продукт (31 мг, 412) в виде твердого вещества ° 14247 о сухогo ацетонитрила при 0 С в атмосфере азота добавляют по каплям диизопропилэтиламин (О, t 91 мл, 1, 1 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,228 мп, 1, 1 ммоль). Полученный в результате раствор желтовато-золотистого цвета о перемешивают при 0 С в течение 40 мин. В этот раствор добавляют раствор 4-оксиметил-1-/2-меркаптозтил/пиридиний трифторметансульфс пата (0,447 r, 1,4 ммоль) в 1 мл ацетонитрила, а затем диизопропилэтиламин (О, 191 мл, 1, 1 ммоль). Красновато-черную смолу отделяют из реакционной смеси. После выдерживания в течение 20 мин при о 0 С реакционную смесь фильтруют и концентрируют под вакуумом. Остаток переносят в минимальный объем смеси ацетонитрил — вода (1:1) и затем наносится на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18. В результате элюирования смесью 257. ацетонитрил — вода и последующей лиофилизации соответветствующих фракций получают продукr (0,353 r, 477) в виде твердого вещества кремового цвета. С. /5R,6S/-3-(2-/4-Окспметилпиридинио/этилтио) -6- (1-/К/-оксиэтнл)— -7-оксо-1-азабипикло/3.2.0/reII -230 -ен-2-кар боксилат. Смесь паранитробензил /5R, 68/-Э (2-/4-оксиметилпиридинио/этилтио)-6- (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (0,348 r, 0,465 ммоль) и 107.-ного палладия на древесном угле (0,35 г) в 11 мп фосфатного буфера (0,05 М, рН 7,4), 5 мп ТГФ и 10 мп простого эфира подвергают гидрогениэации при давлении 2,812 кг/см в те. чение 1,25 ч. Затем смесь фильтруют через прокладку Целита, а, водную фазу промывают простым эфиром (3x). 3а-45 тем рН водного раствора обеспечивают на уровне 7,0 при помощи дополнительного количества буфера с рН 7,4. После удаления остаточных летучих материалов под вакуумом водный раствор наносят на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18. В результате элюирования.смесью 27. ацетонитрил - вода и последующей лиофилизации получают желто-коричневое твердое вещество. 55 Этот материал подвергают хроматографии (С-18, обращенная фаза/Н О), в результате чего получают искомый про-, 37 0 дукт (0,060 г, 367) в виде светложелтого твердого вещества. Пример 5. Получение 3-(2-/1-/2-метиппиридиний/этилтио) -6 — (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-карбоксилата. Л. 1-!2-Меркаптоэтил/-2-метилпиридинийметансульфонат. В суспензию 2-метилпиридиннйметансульфонаTà в 2-метилпиридиHe полученную в результате добавления метан(моно)сульфокислоты (0,65 мп, 0,050 моль) в холодный 2-метилпиридин (2, 17 мп, О, 022 моль), добавляют сульфид этилена (0,655 мл, 0,011 О 011 моль). Реакционную смесь переУ о мешивают в атмосфере азота при 55 С в течение 21 ч, охлаждают до 23 С и разбавляют водой (5 мл). Водный раствор промывают простым эфиром (6 х х 4 мл), обрабатывают под вакуумом с целью удаления следов органических растворителей и сливают на верхнюю часть колонны (2,5 х 10,0 см) иэ р-бондапэка С-18. Колонну элюируют водой, соответствующие фракции подвергают лиофилизации, в результате чего получают 2, 13 r (857) искомого соединения. В. Паранитробенэил-3-(2-/1-/2-метилпиридиний/этилтио) -6К-(1-/R/-оксиэтил1 -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. В холодный (О С) раствор паранитробензил-6 - (1-/R/"îêñèýòèë)-3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (0,523 г, 1,50 ммоль) в ацетонитриле (6 мп), который поддерживается в атмосфере азота, добавляют диизопропилэтиламин (О, 314 мп, t,80 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,373 мп, 1,80 ммоль) . Реакционную смесь перемешивают 30 мин при 0 С и обрабатывают раствором 1-/2-меркаптоэтил/-2-метилпиридинийметансульфоната (0,530 г, 2, 16 ммоль) в ацетонитриле (18 мп), а затем дииэо« пропилэтиламином (0,314 мп, 1,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, разбавляют холодной (О С) водой (26 ип) и сливают на верхнюю часть колонны (3,5 х 7,0 см) иэ Р -бондапэка С-18. В результате элюирования колонны смесью 257 ацетонитрипа — 757, воды и ему сью 507! I I 14247 ацетонитрила — 507. воды получают после лиофилизации соответствующих фракций 1,06 r (96X) искомого соединения в виде желтоватого порошка. С. 3-(2-/1-/2-Метиллиридиний//5 /этилтио) -6 - (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабацикло/3.2.0/гент-2-ен-2-карбоксилат. В раствор паранитробензил-3- (2-/1-/2-метилпиридиний//этилтио) -6aL1-/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (0,66 г, 0,90 ммоль) в "мокром" тетрагидрофуране (34 мл) добавляют простой эфир (34 мл), калиевый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия (0,15 М, 16,5мл, рН 7,22) и 107,-ный палладий на дре- 20 весном угле (0,66 г). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации при давлении 2,812 кг/см при 23 С в течение 1,25 ч. Органический слой отделяют и экстрагнруют буфером (2 х 6 мл). Водные слои соединяют, фильтруют через прокладку Целита, промывают простым эфиром (40 мл), обрабатывают под вакуумом с целью удаления следов органических растворителей и сливают на верхнюю часть колонны (2,5 х 10 см) (u "áoíäàпэка С-18. В результате элюирования колонны водой и лиофилизации соответствукицих фракций получают искомое соединение (0,098 r 317) в виде желе товатого порошка. Пример 6. Получение 3-(2-/1-/4-метилпиридиний/этилтио -6a<- (1-/М-окснэтил) -7-оксо-1-азабицик- 40 ло/3.2.0/гепт-2-ен-2-кар боксилата. А. 1-/2-Меркаптоэтил/-4-метилпиридинийметансульфонат. В суспензию 4-пиколинийметансульфоната в 4-пиколине, полученную при помощи добавления метан(моно)сульфокислоты (0,65 мл, 0,010 моль) в 4-пиколин (2,14 мл, 0,022 моль), при охлаждении добавляют сульфид этилена (0,655 мл, 0,011 моль). Реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота при 55ОС в течение 24 ч, охлаждают до 23 С и разбавляют водой (5 мл) и простым эфиром (10 мл). Органический слой отделяют, а водный слой промывают простым эфиром (5 х 5 мл) и нано55 сят на верхнюю часть колонны (2,5 х х 1О см) из р -бондапэка С-18 после того, как предварительно при пониженном давлении бьши удалены следы простого эфира. В результат элюнрования смесью 157 ацетонитрила — 857 воды колонны получают после лиофилизации соответствующих фракций бесцветный сироп (2,66 г, 1007). В. 1-/2-Меркаптоэтил/-4-метилпиридиний и паратолуолсульфонат. В суспензию пара-толуол(моно)суль" фокислоты (1,72 г, 0,01 моль) в бензоле (6,5 мл) добавляют 4-пнколин (1,17 мл, 0,012 моль) Полученную в, результате смесь перемешивают в атмосфере азота при 23 С в течение 30 мин, обрабатывают сульфидом этилена (0,65 мл, 0,011 моль) и перемешивают при 75 С в течение 24 ч. Еще добавляют сульфид этилена (0,65 мл, О 011 моль) и перемешивание продолжаУ о ют еще 24 ч лри 75 С. Реакционную о смесь охлаждают до 23 С и разбавляют водой (5 мл) и простым эфиром (8 мл) . Водный слой отделяют и промывают простым эфиром (3 х 8 мл). Следы органических растворителей удаляют под вакуумом, а соединение подвергают хроматографии на р -бондапэке С-18 с использованием воды в качестве элюирующего растворителя, в результате получают 2,94 г (907) искомого соединения в виде бесцветного сиропа. С. Паранитробензил-3-|.2-1-/4-метилпиридиний//этилтио -6d. — (1-/R-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. о В холодный (О С) раствор паранитробензил-6 -/1-/К/-оксиэтил/3,7-диоксо-1-азабицикло/3.1.0/гептин-2-карбоксилата (0,522 r, 1,5 ммоль) в ацетонитриле (6 мл), поддерживаемый в атмосфере азота, добавляют диизопропилэтиламин (0,314 мл, 1,8 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,373 мл, 1,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 45 мин и обрабатывают по каплям раствором 1-/2-меркаптоэтил/-4-метилпиридиний метансульфоната (0,539 г, 2, 16 ммоль) в ацетонитриле (1,8 мл), а затем диизопропилэтиламином (0,314 мл, 1,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при о О С в течение 1 ч, разбавляют холодной (О С) водой (24 мл) и сливают на верхнюю часть колонны (2,5 х 8,5 см) из р -бондапэка С-18. В результате элюирования колонны сначала смесью 25Х ацетонитрила — 75X воды (100 мл),,затем смесью 507 ацетонитрила — 50X 4737 !4 13 142 воды (100 мл) и в результате лиофилизации соответствующих фракций получают 0,91 r (837) искомого соединения в виде желтоватого порошка. Рассчитаное С 56,84, H 5,17, N 5,52; S 4,21. C36HqsN50,о SP ° 1,5Н20 Найдено: С 56,89, Н 5, 13", N 5, 19; S 4,41. О. 3- (2-/1-/4-Метилпиридиний//этилтио)-бс - (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор паранитробензил 3-(2-. -/1-/4-метилпиридиний-этилтио -боев (1-/R/-оксиэтил -"-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (0,587 r, 0,80 ммоль), в "мокром тетрагидрофуране (30 мл) добавляют простой эфир (30 мл), калиевый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия (О, 15 М, 14,7 мп, РН 7,22) и 10Х.-ный палладий на древесном угле (0,59 r). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации при давлении 2,812 кг/см и температуре 23 С в течение 1,25 ч. Органический слой отделяют и экстрагируют буфером (2 х 6 мл) . Водные экстракты соединяют, фильтруют через . прокладку 11елита, промывают простым эфиром (3 х 20 ьп), обрабатывлоч под вакуумом с целью удаления следов органических растворителей и сливают на верхнюю часть колонны (2,5 х х 10 см) иэ р -бондапэка С-18, В результате элюирования водой и лиофилизации соответствующих фракций получают О, 136 r (497) искомого соединения в виде желтоватого порошка. Пример 7. Получение /5R/3-/2-/4-Метилтиопиридинио/этилтио/"/6S/-//1К/-оксиэтил/-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. 10 ! А. 4-Метилтиопиридин. 4-Меркаптопиридин (5,55 r, 50,0 ммоль, Элдрич) растворяется в кипящем абсолютном Е tOH (50 мл). Нерастворимый материал удаляют фильтрацией через Целит. Фильтрат нагревают с целью повторного растворения, и . о когда он нагревается до 50 С, одной порцией добавляют метилиодид (3, 17 мл, 51,0 ммоль, Элдрич) . Смесь охлаждают с целью кристаллизации. Фильтрация твердого вещества дает 6,77 r (26,7 ммоль, выход 53,5X) искомого соединения в виде иодгидрата. Иодгидрат (6,33 r, 25,0 ммоль) растворяют в Н О (40 мл), а нерастворимый материал удаляют и промывают водой (10 мл) . В фильтрат добавляют при 0-5 С таблетку NaOH (5 r) и экстрагируют при помощи Ес 0 (3 х 25 мл), насыщая водный слой хлористым натрием. Соединенные органические экстракты промывают соляным раствором (х 2), сушат (Hg$04) и выпаривают, в результате чего получают 2,92 г (23,4 ммоль, общий выход 50X) искомого соединения в виде масла. В. 4-Метилтио-N-/2-меркаптоэтил/пиридинийметансульфонат. 4-Метилтиопиридин (2,75 r, 22,0 ммоль) медленно добавляют в метансульфокислоту (0,65 мл, 10,5 ммоль) при охлаждении в ледяной ванне. В этот раствор добавляют сульфид этилена (0,66 мл, 11,0 ммоль, Элдрич) и смесь нагревают до температуры 50о 60 С, которую поддерживают 21 ч. Во время реакции твердое вещество пере" ходит в раствор. После охлаждения реакционную смесь растворяют в воде (5 мл) и промывают Е,20 (5 х 4 мл). Мутный водный слой фильтруют через Целит, а фильтрат подвергают очистке при помощи обращенно-фазовой хроматографической колонны на силикагеле (С-18 р-бондапэк, 10 г), которая элюируется водой. Собирают фракции объемом 10 мл. Фракции 2 и 3 соединяют и вновь подвергают очистке при помощи обращенно-фазовой колонны для хроматографии. фракция 2 дает 1,258 г (2,48 ммоль, выход 42,67) искомого соединения .в виде вязкого масла. Метансульфокислоту и сульфид этилена предварительно подвергают дистилляции. С. Хлорид /5R/-паранитробензил-3-1 2-/4-метилтиопиридино/-этилтио)-/6$/-(/1К/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. В раствор /5R/-паранитробензил-3:7-диоксо-/6S/- (/1R/-оксиэтил) -1-азабицикло/3.2.0/гептан-/ZR/-карбоксилата (475 мг, 1,36 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,24 мп, 1,4 ммоль) о в СН CN (5 мл) добавлян т при 0-5 С Ъ ( азотдифенилхлорфосфат,О, 29 мл, 1,41 ммоль) . Смесь перемешивают при 0-5 С в течение 30 мин, В эту смесь 1424737 15 добавляют маслянистую суспензию 4-метилтио-N-/2-меркаптоэтил/пиридинийметансульфоната (678 мг, 1,45 ммоль, чистота 607) в CH CN (1,5 мп), а затем диизопропилэтиламин (0,24 мп, 1,4 ммоль). Смесь перемешивают при а 0-5 С в течение 1 ч. Сразу же после добавления основания образуется желтоватый осадок. Осадок выделяют фильтрацией и проьывают холодным CH CN (3 мп), в результате чего получают 413 мг желтоватого твердого вещества. Он растирается с 107. МеОН в воде (5 мп) с тем, чтобы получить 341 мг (0,618 ммоль, выход 45,4X) искомого соединения в виде белых кристаллов, т.пл. 118-120 С: Рассчитано: С 50,56 ; Н 4,95, И 7,37. С Н а ИзОьБ С1" Н О Найдено: С 50,63; Н 4,72, N 6,89. D. /5R/-3- 2-/4-Метилтиопиридино/этилтио/-/6S/-P/1R/-оксиэтил1-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. /5R/-паранитробензил-3-/2-/4-метилтиопиридинио/этилтио/-/6$/- (/1М-оксиэтил) -7-оксо-1-аз абнцикло/3 . .2. О/гепт-2-ен-2-карбоксилатхлорид (380 мг, 0,688 ммоль) растворяют в ТГФ (31,5 мл) и фосфатном растворе (31,5 мп) и фосфатном буфере с рН 7,40 (31,5 мп, 0,05 МФишер) и разбаваляют при помощи Е, О (31,5 мп). Этот раствор смешивают с 10Х-ным Pd/С (380 мг, Энгельхард) и подвергают гидрогенизации при давлении 2р461 кг/ /cH на вибраторе Парра при комнатной температуре в течение 1 ч. Водный слой фильтруют через Целит с целью удаления катализатора, а затем прокладку Целита промывают водой (2 х 5 мп). Фильтрат и промывочную жидкость соединяют и промывают при помощи Et О (2 х 30 мл). Водньф слой обрабатывают под вакуумом с целью удаления органических растворителей и подвергают очистке на обращеннофазовой хроматографической колонне (С-18 р -бондапэк, 13 r Уотерз Ассосиэйтс), которую элюируют водой. Фракции, содержащие поглощение в УФ-спектре в диапазоне 307 нм, собирают (примерно 1 л) и в результате лиофилизации получают 127 мг (0,334 ммоль, выход 48,5X) искомого соединения в виде желтого порошка. Пример 8. Получение 3- 2-/3-метокси-1-пиридиний/этилтио)— -6М-(1 -/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-аза5 бицикл о /3. 2 . О /ге пт-2-е н-2-кар Г о кг плата. А. 1-/2-Меркаптоэтил/-3-иетоксипиридинийметансульфонат. о В предварительно охлажденный (5 С) метоксипиридин (698 мг, 6,4 ммоль) по каплям добавляют метан(моно) сульфокислоту (0,216 мп, 3,05 ммоль) и сульфид этилена (О, 19" мп, 3,2 ммоль), Затем смесь нагревают до 60" С и гндерживают при, этой температуре 18 ч, О охлаждают до 20 С, разбавляют водой (1О мп) и Промывают простым эфиром (3 х 10 мл). Водную фазу обрабатывают под глубоким вакуу;юм !5 мин, а затем сливают на обращенно-фазовую хроматографическую колонну С-18. Искомое соединение элюируют водой. Соответствующие фракции соединяют и выпаривают под глубоким вакуумом, в ре25 эультате чего получают искомый тиол (61, 6 мг, выход 76, 3X) . В. Паранитробензил-3- (2-/3-метокс и-1-пир иди нийхлор ид / э тил ти о) -6 oL-/1 -/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азаби30 цикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. Холодный (О С) раствор паранитробенэил-бо -/1 -/R/-оксиэтил/-3,7-дп-! оксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (1,04 г, 3 ммоль) в ацетонитриле (12 мл) обрабатывают по каплям диизопропилэтиламином (0,63 мп, 3,6 ммоль) и дифенилхлорфосфатом (0,75 мл, 3,6 ммоль) и перемешивают при 0 С в течение 30 мин. Полученный 40 в результате этанолфосфат обрабатывают 1-2-/меркаптоэтил/-3-метоксипиридинийметансульфонатом (1, 14 r, 4,30 ммоль) в СН, СИ (7 мп), диизопропилэтиламином (0,63 мл, 4,30 ммоль), перемешивают 30 мин и охлаждают до о температуры -10 С, которую поддерживают 30 мин. Твердое вещество, которое выпадает в осадок из смеси, выделяют фильтрацией, промывают холодным ацетонитрилом (2 мп) и сушат, в результате получают искомое соединение (1,32 г, выход 82X) . С. 3-(2-(3-Метокси-1-пиридиний/этилтиО)-66 -/1 -/R/-оксиэтил -7-оксо1-asабицикло/3.2,0/гепт-2-ен-255 -карбоксилат. Раствор паранитробензил-3 (2-/3-метокси-1-пиридинийхлорид/-этилтио)-6 -/1 -/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азатуры 0 С, которую поддерживают 30 мин. В результате фильтрации этой смеси получают дополнительно 1, 139 r продукта в виде светло-желтого твердого вещества. Общий выход 0,594 r (72X). С. /5R,6S/-3- 2-/3-Метилтиопиридино/этилтио) -6-(1-/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло (3.2.0) гепт-2-ен-2-карбоксилат. В смесь паранитробензил /5R,6S/"3- (2-/З-.метилтиопиридинио/этилтио -6- (1-/R/-оксиэтил/-7-оксо-1-аэабицикло f3. 2. 0) ге пт-2-е н-2-кар боксилатхлорида (0,551 r, 1,0 ммоль) н 107.— ного палладия на древесном угле (0,55 r) в 25 мл фосфатного буфера (0,05 М, рН 7,4) добавляют 5 мл ТГФ 17 14247 бицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата (600 мг; 1, 12 ммоль) в ТГФ (25 мл, простом эфире (25 мл) и фосфатном буфере с рН 7, 4 (О, 1 М, 25 мл) под5 вергается гидрогенизацни на вибраторе Парра с использованием 107,-ного Pd/С (1,1 r) в течение 1 ч при давлении 2,8 12 кг/см . Смесь разбавляют простым эфиром и водную фазу фильтруют через фильтровальную бумагу. Водный слой промывают простым эфиром (2 х 20 мл), обрабатывают под вакуумом и сливают на обращенно-фазовую хроматографическую колонну на силикагеле. Искомое соединение элюируют водой, содержащей 2 и 57 ацетонитрила. Соответствующие фракции соединяют и подвергают лиофилизации, в результате чего получают желтое твер- 20 дое вещество, которое вновь подвергают очистке при помощи жидкостной хроматографии высокого давления, в результате чего получают пенемкарбоксилат (150 мг, 387) . 25 П р и и е р 9. Получение /5R;6S/-3- (2-/3-метилтиопиридинио/этилтио)— -6-(1-/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло(3.2.01гепт-2-ен-2-карбоксилата. А. 3-Метилтио-1-/2-меркаптоэтил/пиридинийхлор ид . В раствор 3-метилтиопиридина (2,00 r, 0,016 моль) в 10 мл простого эфира добавляют 15 мл 1N раствора НС1 и смесь помещают на вибратор. Водную фазу отделяют, промывают 10 мл простого эфира и затем выпаривают. Остаточный хлоргидрат затем cymar под вакуумом (Р О ), в результате чего получают белое твердое вещество. В 40 этот твердый хлоргидрат добавляют 3-метилтиопиридин (1,88 r, 0,015 моль) и сульфид этилена (0,89 мл, 0,015 моль) и полученную в результате смесь нагревают (масляная ванна) до темпера- 45 туры 55-65 С в атмосфере азота, которая поддерживается 15 ч. В результате получают слегка мутную маслянистую жидкость, которая переносится в 125 мл воды, затем ее промывают при помощи СК С1 . Водный раствор концентрируют примерно до 25 мп, а затем несколько капель ацетонитрила добавляют для того, чтобы сделать смесь гомогенной. Полученный в результате водный раствор наносится на обращенно-фазовую хроматографическую колонну С-18. Элюирование водой и последующее выпаривание соответствующих 37 l8 фракций дает искомьп продукт (2,66 r, 807) в виде серо- келтого вязкого масла. В. Паранитробензил/5R,6S/-3-(2-/3-метилтиопиридино/этилтио)-6- (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло (3.2.0 гепт-2-ен-2-карбоксилатхлоРид ° Раствор паранитробензил/5R,6$/-6- (1-/R/-оксэтил)-3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (0,522 r, 1,50 ммоль) в 7 мл сухого о ацетонитрила охлаждают до О С, затем по каплям добавляют диизопропилэтиламин (0,287 мл, 1,65 ммоль) . В полученный в результате желто-коричнегый раствор добавляют по каплям дифенилхлорофосфат (0,342 мл, 1,65 ммоль), реакционную смесь выдерживают при о 0 С в течение 30 мни. Затем добавляют диизопропилэтиламин (0,313 мп, 1,80 ммоль) и раствор 3-метилтио-1-/3-меркаптоэтил/пиридинийхлорида (0,398 r, 1,80 ммоль) в 0,70 мл сухого ДМФ. Примерно через 1 мин после того, как добавление закончено, осадок отделяют из реакционной смеси и а затем охлаждают до температуры -10 С, которая поддерживается 10 мин, в результате чего получают твердую массу оранжевого цвета. Это твердое вещество растирают с ацетонитрилом и остаток отделяют фильтрацией ° Остаток промывают ацетонитрилом,. затем ацетоНоМ и сушат под вакуумом, в результате чего получают продукт (0,455 г, 557) в виде твердого вещества кремового цвета. Собранный фильтрат выпаривают, получают желтое масло, которое переносят в минимальный объем ацетонитрила и охлаждают до темпера1424737 и 25 мл простого эфира. Эту смесь подвергают гидрогенизации (Парр) при давлении 2,812 кг/см в течение 1 часа. Далее реакционную смесь фильтру5 ют через Целит и фильтровальную леi.åøêó промывают водой и простым эфиром. Водную фазу отделяют и промывают дополнительным количеством простого эфира (3 х). После удаления остаточных органических растворителей под вакуумом водный раствор охлаждают до О С и рН обеспечивается на уровне 7,0 при помощи насыщенного водного раствора NaHCO> Этот раствор сразу же наносят на обращенно-фазовую хроматографическую колонну С-18. В результате элюирования водой и последующей лиофилизации соответствующих Фракций получают 0,25 г ярко-желтого 20 твердого вещества. Этот материал вновь подвергают очистке при помощи обращенно-фаэовой жидкостной хроматографии высокого давления, в результа- те чего получают искомый продукт 25 (0,210 г, 55X) в виде светло-желтого твердого вещества. Пример 10. Получение 3-(2-/1-/2,6-диметилпиридиний/этилтио)— -61- 1-/К/-оксиэтил1-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата. А. 1-/2-Меркаптоэтил/-2,6-диметилпиридинийметансульфонат. Смесь 2,6-диметилпиридина (19,2 мп, О, 165 моль) и метан(моно)сульфокислоты (3,27 мл, 0,050 моль) перемешивают 42 ч при 100 С в атмосфере азоо та. После охлаждения до 25 С реакционную смесь разбавляют простым эфиром (45 мп) и водой (30 мп). Два слоя разделяются, и органический слой экстрагируют водой (2 х 5 мл). Водные слои соединяют, фильтруют через прокладку Целита, промывают простым эфиром (2 х" 15 мл) обрабатывают под вакуумом с целью удаления следов органических растворителей и сливают на верхнюю часть колонны (3,0 х 12 см) из р -бондапэка С-18. В результате элюирования смесью ЗЖ ацетонитрила— 97Х воды получают после лиофилизации соответствующих фракций 2,5 г неочищенного искомого соединения в виде сиропа. Он вновь подвергается очистке при помощи жидкостной хроматографии 55 высокого давления (p-бондапэк С- 18), в результате чего получают 0,90 г (7X) искомого соединения. В. Паранитробензил-3- 2-/1-/2,6-дифенилпиридипий/этилтио1-6d. — P1— -/R/-оксизтил1 -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-карбоксилатдифепилФосфат. о В холодный (О С) раствор паранитробензил-6 = (1-/R/-оксиэтил5-3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептаи-2-карбоксилата (0,658 г, 1,89 ммоль) в ацетонитриле (6 мп), который поддерживают в атмосфере азота, добавляют диизопропилэтиламин (0,394 мл, 2,26 ммоль) и дифенилхлорфосфат (0,468 мл, 2,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 30 мин и обрабатывают раствором 1-/2-меркаптоэтил/-2,6-диметилпиридинийметансульфоната (0,720 r, 2,73 ммоль) в ацетонитриле (3 мл), затем диизопропилэтиламином (0,994 мл, 2,26 м1оль). Реакционную смесь перемешивают при О С в течение 2 ч, разбавляют холодной (О С) водой (27 мл) и сливают на верхнюю грант, колонны (2,5 х 9,0 см) из ш-бондапэка C-18. В результате элюирования смесяMH ацетонитрил — вода и лиофилизации соответствующих фракций получают 0,92,r (65Е) искомого соединения ° С. 3-(2-/1-/2,6-диметилпиридиний//этилтио) -6oL- (1-/R/-оксиэтил1 -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор паранитробензил-3- (2-/1-/2,6-диметилпиридиний//этилтио1— -6oL- (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2"карбоксилат дифенилфосфата (0,80 r, 1,07 ммоль) в "мокром" тетрагидрофуране (42 ил) добавляют простой эфир (42 мп), калиевый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия (О, 15 М, рИ 7,22, 21 мл) и 10Х-ный палладий на древесном угле (0,8 г). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации в течение 1 ч при давлении 2,812 кг/см и температуре 23 С и фильтруют через прокладку Целита. Два слоя разделяются, а органическими слой экстрагируют буфером (3 х 8 мп). Водную фазу соединяют, промывают простым эфиром (50 мл), обрабатывают под вакуумом с целью удаления следов органического растворителя и сливают на верхнюю часть колонны (3,0 х х 10,2 см) из @ -бондапэка С-18. В результате элюирования колонны смесью 57 ацетонитрила - 957. воды и лиофилнэации соответствующих фракций по2) 14247 лучают искомое соединение (0,246 r 637) в виде желтоватого порошка. Рассчитано: С 55,51, Н 6,47, N 7,19. С Нх ИгО Б. 1,5Н О Найдено: С 55,14; Н 6,23; N 6,46. Пример 11. Получение /5R,6S/-3- (2-/2-метил тио-3-метилимидаз олио/-этилтио -6- (1-/R/-оксиэтил1-710 -оксо-1-азабицикло (3. 2. Oj гепт-2-ен-2-.карбоксилата. А. 2-Метилтио-3-метил-1/2-меркаптоэтил/имидазолийтрифторметансульфонат. t5 Трифторме тан (моно) сул ьфокислоту (1, 38 мп, О, 015 моль) добавляют по каплям в 2-метилтио-1-метилимидазол (4,0 г, 0,03 моль) при О С в атмосфере азота. Затем добавляют сульфид этилена (0,9 мл, 0,015 моль), смесь о нагревают до 55 С в атмосфере азота и выдерживают при этих условиях 24 ч. Реакционную смесь растирают в порошок с простым эфиром (3 х), а остаток пе- 25 реносят в ацетон, фильтруют и выпаривают. В результате получают продукт (4, 2 r, 827) в виде полукристаллического твердого вещества, который используют как таковой без последующей очистки. В. Паранитробензил/5R, 6S/-3- j2-/2-метилтио-3-метилимидаз олио/этилтио) -6-/1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло {3 2.01 гепт-2-ен-2-карбоксилат дифенилфосфата. 35 В раствор паранитробензил/5R,6S/"6- (1-/R/-оксиэтил)-3,7-диоксо-1-азабицикло (3. 2. 0) гептан-2-карбоксипата (1,40 r, 4,0 ммоль) в 50 мл сухого ацетонитрила при 0 С в атмосфере азота по каплям добавляют диизопропилэтиламин (0,76 мл, 4,4 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,91 мл, 4, 1 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 1 ч добавляют диизопропилэтиламин (0,76 мп, 4,4 ммоль), а затем добавляют по каплям раствор 2-метилтио-3-метил-1-/2-меркаптоэтил/имидазолийтрифторметансульфоната 50 (2,0 r, 5,9 ммоль) в 5 мл ацетонитрила. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 1,5 ч, а затем концентрируют под вакуумом, в результате чего получают смолу. Эту смолу переносят в воду и наносят на обращенно-фазовую колонну С-18. В результате элюирования водой, 37 22 затем смесью 207. ацетонитрила — вода, н, наконец, смесью ЗОХ ацетонитрила— вода после лиофилизации соответствующих фракций получают искомый продукт (0,90 г, 30X) в виде светло-желтого твердого вещества ° С. /5R,6S/-3- (2-/2-метилтио-3-метилимидазолио/этилтио(-6-1-/R/-оксиэтил/-7-оксо-1-азабицикло(3 ° 2.0) гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор параннтробензил /5R,6S/— 3-(2-,/2-метилтио-3-метилимидазолио/" этилтио) -6-/1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло (3.2.0j гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (1,20 г, 1,56 ммоль) в смеси 70 мп ТГФ, 70 мп простого эфира н 31 мл фосфатного буфера (0,05 М, рН 7,4) добавляют 1,2г 107.-ного. палладия на древесном угле. Эту смесь подвергают гидрогенизации (Парр) при давлении 2,461 кг/см в течение 55 мин. Реакционную смесь затем фильтруют через Целит, а фильтровальную решетку промывают водой и простым эфиром. Водную фазу отделяют, охлаждают до О С, а рН обеспечивается на уровне 7,0 при помощи насыщенного .,водного раствора NaHCO . После удаления остаточных органических растворителей под вакуумом водный раствор наносят на обращенно-фаэовую хроматографическую колонну С-18. В результате элюирования водой, а затем сме.сью 8Х ацетонитрипа — Н О после лиофилизации соответствующих фракций получают 0,25 г твердого вещества. Этот материал вновь подвергают очистке при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии высокого дав ления, в результате чего получают искомый продукт (0,114 r, 19X) в виде не совсем белого твердого вещества. Пример 12, Получение /SR,6S/-З-(2-/3-аминопиридино/этилтио/-6— (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-аэабицикло (3. 2.0) гепт-2-ен-2-карбоксипата. А. 3-Амино-1-/2-меркаптоэтил/пиридинийхлорид. 3-Аминопиридин (1,50 r, 0,016 моль) помещают в 15 мл 1 метанолового раствора НС1 и полученный в результате раствор выпаривают, в результате чего получают хлоргидрат в виде масла. В это масло добавляют 3-аминбпиридин (1,32 r, 0,015 моль) и сульфид этилена (0,89 мл, 0,015 моль), а полученную в результате смесь нагревают (масляная ванна) до температуры 6023 1424737 24 о 65 С в атмосфере азота, которую поддерживают 2 ч. Лобавляют еще один эквивалент сульфида этилена (0,89 мл, 0,015 моль) и нагревание продолжают о при 55-65 С в течение 65 ч. Реакционную смесь промывают СН С1, а затем переносят в воду (25 мл). Водный раствор наносят на обращенно-фазопую хроматографическую колонну С-18, ко- 10 торую затем элюируют водой. Выпаривание соответствующих фракций дает искомый продукт (1,26 г, 44X) в виде бесцветного вязкого масла. В. Паранитробензил 52,6SJ -3"(2-/3-аминопиридинио/этилтио) -6-(1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло3.2.0 гепт-2-ен-2-карбоксипатдифенилфосфат. В раствор паранитробензил /5R,6S/- 20 -6-/1-/В./-оксиэтил/-3,7-pnogco-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (0,696 r 2,0 ммоль) в 10 мл сухого ацетонитрила при 0 С в атмосфере азота по каплям добавляют диизопропилэтиламин (0,382 мп, 2,2 ммоль), затем дифенилхлорфосфат (0,457 мл, 2,2 ммоль). После перемешивания при 0 С в течение 30 мин добавляют раствор 3-амино"1-/2-меркаптоэтил/пиридинийхлорида (0,475 r, 2,5 ммоль) в 1 мл сухого ДМФ, затем дополнительное количество диизопропилэтиламина (0,435 мп, 2,5 ммоль). Реакционную о смесь выдерживают при 0 С в течение 1,5 ч, а затем концентрируют под ва35 куумом. Полученную в результате смолу переносят в смесь ацетонитрнл — вода (1:1) и наносят на обращенно-фазовую хроматографическую колонну С-18. В результате элюирования водой, затем смесью 207 ацетонитрила — вода и последующей лиофилизации соответствующих фракций получают искомый продукт (0,730 г, 50X) в виде твердого веще45 ства бежевого цвета. С. /5R,6S/-3-/2"/3-аминопиридинио/этилтио/-6-/1-/R/-оксиэтил/-7-ок со-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. В смесь паранитробензил /5R,6S/-3-/2-/3-аминопиридинио/этилтио/-6-/1-/R/-оксиэтил/-7-оксо-1-аэабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (0,730 r 1,0 ммоль) и 10Х-ного палладия на древесном угле 55 (0,7 r) в 25 мп фосфатного буфера (0,05 М, рН 7,4) добавляют 8 мл ТГФ и 20 мл простого эфира. Затеи эту смесь подвергают гидрогеннза;у и (Парр) при давлении 2,812 кг/см2 в течение 1 ч. Полученную в результате смесь фильтруют через прокладку Целита, а фильтрональную лепешку промывавт водой и простым эфиром. Водную фазу отделяют, промывают простыи эфиром (2), а затем остаточные летучие материалы удаляются под вакуумом. Водный раствор сразу же наносят на обращенно-фазовую хроматографическую колонну С-18, которую элюируют водой. В результате лиофилизации соответствующих фракций получают 0,45 r не совсем белого твердого вещества. Этот материал вновь подвергают очистке при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии высокого давления, в результате чего получают искомый продукт (0,123 г, 357) в виде твердого вещества цвета слоновой кости. Пример 13. Получение /5R,68/3-(1-/S/-метил-2-/1-пириднний/этилтио)-6-/1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата (А).и /5R,6$/3- (1-/R/-метил-?-/1-пиридиний/этилтио)-6- (1-/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата (В). А, dl-1-/2-Меркапто-2-метилэтил/пиридиннйметанс льфонат, dl-1-/2-меркапто-1-метилэтил/пиридинийметансульфонат. Метан(моно)сульфокислоту (1,95 мл, 0,030 моль) медленно добавляют в холодный пиридин (7,83 мп, 0,097 моль), а полученную в результате смесь перемешивают при 40 С в течение 15 мин, обрабатывают dl-пропиленсульфидом (2,59 мл, 0,033 моль) и перемешивают при 60 С в атмосфере азота 90 ч. Пиридин удаляют под вакуумом, остаток смешивают с водой и подвергают очистке при помощи хроматографии (жидкостная хроматография высокого давления, бондапэк С-18). Соответствующие фрак-! ции соединяют и подвергают лиофилизации, в результате чего получают dl-1-/2-меркапто-2-метилэтил/пиридинийметансульфонат (1,14 г, 152) в виде бесцветного сиропа. Рассчитано: С 37,88; Н 6,71, N 4,91; S 22,47. С Н„ 10,8, 2Н О Найдено: С 37,49; Н 6,85, N 4,86; S 22,09. Получают также dl-1-/2-меркапто-1-метилэтил/пиридинийметансульфонат 14247 Рассчитано: С 46,88; Н 6,881 N 4.,56. СпН » N0»Sz HÐ Найдено: С 46,61; H 6,46, N 4,65 ° В. /5К,6S/паранитробензил-3-1 2-(/R или S/-/1-пиридиннй -1-/К или S/-циклогексилтио) -6-/1-/К/-оксиэтил/-7-оксо-1-аэабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. (0,82 r, 11X) в виде бесцветного сиропа. Рассчитано: С 39,11, Н 6,56, N 5,07. С Н,» NO S ° 1,5Н О Найдено: С 39, 13, Н 5,92; N 5,20. В. /5К,6S/паранитробензил 3-(1-/R,S/-метил-2-/1-пиридиний/-этилтио)-6- 1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азà- 10 бицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. В холодный (О С) раствор /5R,6S/ паранитробензил-6-(1-/R/-3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (0,523 г, 1,5 ммоль) в ацетонитриле (6 мл), который содержат в атмосфере азота,, добавляют диизопропилэтиламин (0,314 мл, 1,8 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,373 мл, 20 1,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 30 мин и обрабатывают раствором dl-1/2-меркапто-2-метилэтил/пирндинийметансульфоната (0,539 г, 2, 16 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) и 25 диизопропилэтиламином (0,314 мл, 1 ° 8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, разбавляют холодной водой (О С, 25 мл) и подвергают хроматографии на бондапэкю С-18, имеющем форму колонны (2,5 х 8,5 см), с использованием 2550Х ацетонитрила в воде в качестве элюирующих растворов., в результате чего получают 1,07 г (97X) искомого соединения в виде желтоватого порошка 35 после лиофипизации. Рассчитано: С 57 52 Н 6,10; N 5,59; $ 4,27 ° С» » Р Б 40 Найдено: С 57,76; Н 4,96; N 5,36; S 4,35. С. /5R,6S/3-11-/К и S /метйл-2-/1-пиридиний/этилтио) -6-! 1-/R/-оксиэтил /-7-оксо-1-аз абицикло /3. 2. О /г епт45 -2-ен-2-карбоксилат. В раствор /5К,7S/паранитробензил-3- (1-/R,S/метил-2-/1-пиридиний/этилтио1-6- (1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-asaбицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (0,60 r, 0,82 ммоль) 50 в "мокром" тетрагидрофуране (33 мл) добавляют простой эфир (33 мп)., калиевый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия (17 мп, 0,15 N, рН 7,22) и 10Х-ный палладий на древесном угле (0,60 r). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации в течение 1 ч при давлении 37 26 2,812 кг/см и температуре 23 С. Два слоя разделяются, и органический слой экстрагируют водой (3 х 7 мл) . Водные слои соединяют, фильтруют через прокладку 1(еллита, промывают простым эфиром (3 х 20 мл) и подвергают хроматографии на бондапэке С-18 в форме колонны (2,5 х 9,5 см) с использованием воды в качестве элюирующего areнта, в результате чеro получают О, 18 г (63X) смеси диастереоизомеров. Два диастереоизомера разделяют при помощи жидкостной хроматографии высокого давления (преп. бондапэк С-18) с использованием воды в качестве элюирующего растворителя: изомер с малым временем удерживания, 0,068 г (23X), соединение В, изомер с более продолжительным. временем удерживания, 0,081 r (28X) соединение А. Пример 14 ° Получение /5R, 6S/3-(2-((S)-/1-пиридиний/)-1-/S/-циклогексилтио) -6-(1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата (А) и /5R,6S/3-t2-(/R/-/1-пиридиний/)-1-/R/-циклогексилтио)-6-(1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилата (В). А. d1-1-/2-Меркапто-1-циклогексил/пиридинийметансульфонат. Метан(моно)сульфокислоту (0,65 мл, 0,01 моль) добавляют по каплям в пиридин (2,42 мл, 0,03 моль) при охлаждении. Смесь перемешивают в атмосфере азота в течение 10 мин, обрабатыаахм dl-циклогексенсульфидом (1,377 г, чистота 85Х, 0,0102 моль) и перемешивают при 72 С в течение 25 ч. Избыток пиридина удаляют под вакуумом, а следы отгоняют с использованием воды. Остаток смешивают с водой и подвергают хроматографии через колонну из преп. бондапэка С-18 (5 х 13 см) с использованием 6-2Х ацетонитрипа в воде в качестве элюирующего растворителя, посде лиофилизации получают бесцветный сироп, 1,57 r (53X). 27 14247 В холодный (О С) раствор /5R,6$/паранитробензил-6- (1-/R/-оксиэтил)— -3,7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2-карбоксилата (1,37 r,3,93 ммоль? в ацетонитриле (15 мп), который поддерживают в атмосфере азота, добавляют динзопропилэтиламин (0,822 мл, 4,7 ммоль) и дифенилхлорфосфат (0,979 мп, 4,7 ммоль). Полученный 10 в результате раствор перемешивают 30 мин и обрабатывают раствором d l-1-/2 "меркапто-1-ц.: клогексил/пиридинийметансульфоната (1,64 г, 5,66 ммсль) в ацетонитриле (4,7 мл), а затем диизопропилэтиламином (0,822 мл, 4,7 ммоль). Реакционную о смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, разбавляют холодной (О С) водой (75 мп) и подвергают хроматографии 20 на преп. бондапэке С-18 с использованием 25-50Х ацетонитрила в воде в качестве элюирующего растворителя, после лиофилизации соответствующих фракций получают 1,9 г (537) искомого соединения. Рассчитано: С 59, 16; Н 5,35, N 5,31. СьчНю" Р $Р "z0 Найдено: С 58,95; Н 5,15; N 5,57. 30 С. /5К,6$/-3-(2-3/R или S/ /1-пиридиний/)-1-/R или $/-циклогекснлтио)-6-(1-/R/-оксиэтил) -7-оксо-1"азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор /5R,6S/паранитробензил-3-(2-(/К или $/-/1-пиридиний/)-1-/R или S/-циклогексилтио) -6-(1-/R/-оксиэтил1 -7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксипатдифенилфосфата 40 (1,85 r, 2,34 ммоль) в "мокром" тетрагидрофуране (96 мл) добавляют простой эфир (96 мп), калиевый фосфатный буфер моноосновного гидрата окиси натрия (0,15 М, рН 7,22, 50 мл) и 10Х-ный палладий на древесном угле (1,9 г). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации при температуре 23 С, давлении 2,812 кг/ /см в течение 1,25 ч. Органический слой отделяют и промывают водой 50 (3 х 20 мл). Водные растворы фильтруют через прокладку Целита, промывают простым эфиром (2 х 60 мл), обрабатывают под вакуумом с целью удаления следов органических растворителей и подвергают хроматографии на колонне из преп. бондапэка С-18 (4,5 х 9 см) с использованием 0-5Х 28 ацетонитрила в воде в качестве элюнрующего растворителя, после лиофилизации получают 0,705 г (76Х) смеси диастереоизсмеров. Днастереоизомеры разделяют при помощи жидкостной хроматографии высокого давления (преп, бондапэк С-18) с использованием ацетонитрила (47) в воде в качестве элюирунжего растворителя, диастереоиэомер с малым временем удерживания, соединение А (0,29 г, 31X). Рассчитано: С 56 59 Н 6,55, N 6,60; S 7,55. С о Цг Я О $. 2Н О Найдено: С 56,83, Н 6,47; N 6,59; S 7,43. Получают также диастереоиэомер с более продолжительным временем удерживания, соединение В (0,35 г, 38X).. Пример 15. А. /5R/Аллил-3— P2-пиридиниоэтил/тио1-/6S/-(1R/-оксиэтил) -7-оксо-1-аэабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. В раствор /5R/аллил-3,7-диоксо-/6S/- /1R/-оксоэтил) -1-азабицикло 3.2.0 гептан-/2R/-карбоксилата (473 мг, 1,87 ммоль) в СПЛАСИ (6 мл) добавляют при температуре примерно -10 С в атмосфере азота диизопропилэтиламин (0,42 мл, 2,4 ммоль), а затем дифенилхлорфосфат (0,50 мл, 2,4 ммоль). Смесь перемешивают при О С в течение 30 мин, затем охлаждают Р до температуры -15 С. В эту смесь добавляют маслянистую суспензию N-/2-меркаптоэтил/пиридинийхлорида (527 мг, 3,00 ммоль) в СН.,СК (1 ил), содержащем,5 капель ДИФ, затем ди" изопропилэтнламин (0,42 мл, 2,4 ммоль). Смесь перемешивают прн - 15 С в течение 30 мин, а затем разбавляют водой (20 мл). Эту смесь непосредственно подвергают очистке на обращенно-фазовой хроматографической силикагелевой колонне, элюирование осуществляют водой (200 мл), смесями 107 СН,СК/Н О (100 мл), 20Х СНч,СК/Н О (100 мл)у 307. СНЪСН/НгО (100 мл), 40Х СНъСК/НъО (100 мп). Соответствующие фракции собирают, органический растворитель удаляют под вакуумом и после лиофилиэации получают 786 мг (1,26 ммоль, выход 67,3X) искомого соединения в виде коричневатого порошка. В. /5R/-3- (/2-пирилиниоэтил/тно)-/6S/-(/1R/-оксиэтнл)-7-оксо-1-аэабицикло (3.2.0) гепт-2-ен-2-карбоксилат. 29! 4247 В раствор /5R/аллил-3- (/2-пиридиниоэтил/тио -/6S/- (/!К/-оксиэтил) -7-оксо-1-аз аби цикл о (3. 2. 0 гепт-2-е н-2-карбоксилатдифенилфосфата (156 мг, 0,25 ммоль) в СН. С1! (2 мл) последовательно добавляют при температуре о приблизительно 22 С раствор 2-этилгексаноата калия в EtOAc (0,5 М, 0,6 мл, 0,3 ммоль), трифенилфосфин (15 мг, 0.057 ммоль) и тетракистрифе нилфосфинпалладий (15 мг, 0,013 ммоль). Смесь перемешивают при о температуре примерно 22 С в атмосфере азота 2 ч. После добавления безводной Et О (7 мл) фильтрацией отде- ляют осадок, промывают безводной & О (7 мл) и сушат под вакуумом, в результате чего получают 101 мг коричневатого твердого вещества. его подвергают очистке при помощи обращеннофазовой хроматографической колонны (С-18 ПрепПАК, 12 r, Уотерз Ассосиэйтис) с использованием воды в качестве элюента. Соответствующие 25 фракции (фракции с 7 по 12, каждая объемом 20 мл) собирают и подвергают лиофилизации, в результате чего получают 53 мг (О, 16 ммоль, выход 64 ) искомого соединения в виде желтоватого порошка. Пример 16. Получение 3- 2-/N-метил-тиоморфолиний/зтилтио)t -ба!.-/1 -/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло (3. 2, 0) гепт-2-ен-2-карбоксилата. А. Я-метил-N-/2-меркаптоэтил/тиоморфолиний метансульфонат. В предварительно охлажденный (ле дяная ванна) N-метилтиоморфолин (5,00 r, 42,7 ммоль) добавляют метан(моно)сульфокислоту (1,47 мп, 20,5 ммоль) и сульфид этилена-(1,30 (1,30 мп, 21,4 мл, 21,4 ммоль). Смесь о нагревают до температуры 65 С кото45 рую поддерживают 24 ч, и разбавляют водой (25 мл). Водный раствор промывают диэтиловым простым эфиром (3 х х 25 мл), обрабатывают под вакуумом и сливают на колонну обращенно-фаэовой хроматографии из силикагеля; искомое соединение элюируют водой. Соответствующие фракции собирают и выпаривают, в результате чего получают тиол в виде масла (4,80 г, выход 86X). В. Паранитробензил-3-(2-/N-метил-тиоморфолинийдифе нилфосфат/этилтио1-6о!.- (! -/R/"oêñèýòèïj-7-оксо37 зо -1-аз абицикло (3. 2. Oj гепт-2-ен-2-карбоксилат. Холодный (ледяная ванна) раствор паранитробензил-6 - (! -/R/-оксиэтил1-3, 7-диоксо-1-азабицикло (3. 2,01гептан-2-кар боксилата (557 мг, 1, 60 ммоль) в СН СИ (8 мл) обрабатывают добавлением по каплям диизопропилэтиламина (0,336 мп, 1,92 ммоль) и дифенилхлорфосфата (0,400 мл, 1,92 ммоль) и. перемешивают 30 мин. Реакционную смесь обрабатывают N-метил-N-/2-меркаптоэтил/-тиоморфолинийметансульфонатом (893 мг, 2,29 ммоль) в CHgCN (4 мп) и диизопропилэтиламином (0,336 мл, 1,92 ммоль) и перемешивают 30 мин. Раствор разбавляют водой (20 мп) и сливают на колонну обращенно- фазовой хроматографии из силикагеля. Искомое соединение элюируют смесью 50Х ацетонитрила — вода. Соответствующие фракции соединяют, обрабатывают под вакуумом в течение 2 ч и подвергают лиофилизации, в результате чего получают искомое соединение (1,01 r выход 8 %). C. 3-!2-/N-метил-тиоморфолиний/этилтио!-6о -/1 -/К/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло (3 ° 2.0jrem-2-ен-2-карбоксилат. Раствор паранитробензил-3-(2-/N-метилтиоморфолинийдифенилфосфат/этилтио) -бс!.-/1 -/R/-оксиэтил1-7-оксо-1-аз абицикло t3. 2. 0) гепт-2-ен-2-карбоксилата (1,31 г, 1, 7 ммоль) в О, 1 М фосфатном буфере с рН 7,4 (48,8 мл), тетрагидрофуране (20 мл) и диэтиловом простом эфире (20 мл) подвергают гидрогенизации над 10Х-ным Pd/С (1,5 г) на вибраторе Парра в течение 1 ч при давлении 2,812 кг/см . Реакционную смесь разбавляют диэтиловым простым эфиром (40 мл), и фазы разделяются. Органическую фазу промывают водой (2 х 5 мл). Водные фазы соединяют, фильтруют через фильтровальную бумагу, промывают диэтиловым простым эфиром (2 х 20 мл) и обрабатывают вакуумом. Водный раствор сливайт на колонну обращенно-фазовой хроматографии на силикагеле и искони карбапенем элюируют смесью 5Х ацетонитрила - вода. Соответствующие фракции соединяют и подвергают лиофилизации, в результате чего получают искомое соединение в виде аморфного твердого вещества (205 мг, 31X). Пример 18. Получение /5R,6S/-3- 12-/1,4-диметил-пиперазиний/-этилтио| -6- (1-/R/-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло (3.2.0)гепт-2-карбоксилата. А. 1-/2-Ацетилтиоэтип/-1,4-диметилпиперазинийбромид. Раствор 2-бромэтилтиолацетата (2,20 г, 0,012 моль) н 1,4-диметнл,пиперазина (1,95 мп, 0,014 иоль) в ацетоне (4 мл) перемешивают при 50 С в течение 65 ч. После охлаждения до 25 С жидкую фазу декантируют, при этом остается смола, которую растирают дважды с простым диэтиловым эфиром, в результате получают гидроско31 142473 Пример 17. Получение /5R,6$/-3- f2-/1-метилморфолино-этилтио)-6" - (/R/-1"оксиэтил) -7-оксо-1-азабицикло (3.2.01 гепт-2-ен-2-карбоксипата. A 1-метил-1-/2-меркаптоэтил/морфолинийтрифторметансульфонат. В N-метилморфолин (3,29 мп, 0,030 моль) добавляют по каплям трифторметан(моно)сульфокислоту (1,327мп,!О 0,015 моль) при 10 С, затем сульфид этилена (0,89 мл, 0,015 моль). Полученный в результате желто-коричневый раствор нагревают (масляная ванна) о до 50-60 С в атмосфере азота и вьщер-!5 живают при этих условиях 18 ч. Летучие материалы затем удаляют под вакуумои, а полученное остаточное масло переносят в 10 мп воды. Водный раствор промывают простым диэтиловым 20 эфиром (3 х 5 мл), а затем остаточный органический растворитель удаляют под вакуумом. Полученный в результате водный раствор наносят на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18, которую затем элюируют водой, смесью 57. ацетонитрила — вода и смесью 107. ацетонитрила — вода. В результате выпаривания соответствующих фракций получают более твердое вещество, которое сушат под вакуумом (P 0 ), при этом получают искомый продукт (1,92 г, 417). В. Паранитробензил/Ы,6$/-3-Г2-/1-метилморфолино/этилтио!6 (/R/-1-оксиэтил 1-7-оксо-1-аэабицикло35 (3. 2. 0) гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенипфосфат. В раствор паранитробензил- /5R,6$/-6- (1R/-1-оксиэтилJ-3 7-диоксо-1-азаУ 40 бицикло (3. 2. 07 гептан-2-карбокскпата (0,348 r 1,0 ммоль) в 25 мп сухого ацетонитрила добавляют по каплям диизопропилэтиламин (0,191мп, 1,1имоль) ° а затем дифенилхлорфосфат (0,228 мп, о 45 1 I ммоль) при О С в атмосфере азота. Э о После перемешивания при О С в течение 1 ч добавляют диизопропилэтилаийн (0,226 мп, 1,3 ммоль) полученный в результате энолфосфат, а затем 1-метил-1-/2-меркаптоэтил/морфолинийтрифторметансульфонат (0,373 г,. 1,2 миоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 1 ° 5 ч, а затеи концентрируют под вакуумом. Остаточный материал переносят в воду и на-, 55 носят затем на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18. В результате элюирования водой, затем смесью 7 32 207. ацетонитрила — вода и смесью ЗЖ ацетонитрила - вода и последукщей лиофилиэации соответствующих фракций получают искомьш продукт (0,360 r, 407) в виде аморфного твердого вещества. С, /5R,6$/-3-(2-!1-м етилморфолино/этилтио! -6-(/R/-1-оксиэтил„1-7-оксо-1-азабицикло (3.2.0) гепт-2-ен-карбоксилат. В раствор паранитробензил /5R,6$/ -3-(2-/1-метилиорфолино/этилтио -6-(/R/-1-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло(3.2.0) гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфата (0,360 r, 0,49 ммоль) в 13 мл фосфатного буфера (0,05 М, рН 7,4) добавляют 0,36 г 107.-ного палладия на древесном угле, 20 мл тетрагидрофурана и 20 мл простого диэтилового эфира. Эту реакционную смесь годвергают гидрогенизации (Парр) при давлении 2,250 кг/см2 в течение 1 ч. Смесь фильтруют через Целит, а затем фильтровальную прокладку промывают водой и простым диэтиловым эфиром. Водную фазу отделяют, ее рН обеспечивается на уровне 7,0 добавлением фосфатного буфера с рН 7,4. После удаления остаточных органических растворителей под вакуумом водный раствор наносят на колонну обращенно-фазовой хроматографии С-18. Р> результате элюирования водой и лиофилизации соответствунщих . фракций получают 0,130 r аморфного твердого вещества. Этот материал подвергают повторной очистке при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии высокого давления, в резуль тате чего получают чистый продукт (0,058 г, 347) в виде аморфного твердого вещества. 14247 33 пичный желтоватый порошок (3,2 г, 90X). В. Хлоргидрат 1,4-диметил-1-/2-меркаптоэтил/пиперазиний бромида ° Раствор 1-/2-ацетилтиоэтил/-1,45 -диметилпиперазиний бромица (1,1 r, 3,7 ммоль) в 6 N растворе хлористоводородной кислоты (4 мл) нагревают до 80 С в атмосфере азоТа и при этих 10 условиях выдерживают в течение 1 ч. Раствор концентрируют при пониженном давлении, в результате чего получают белый порошок (0,41 r, 38X) . Рассчитано. С 31,03, Н 7,16; N 9 05; S I035. С Н И ЯВгС1 Н20 Найдено: С 31,62; H 7,46; N 9,19, S 10,19. С. /5R,6S/Паранитробензил/3-(2-/1, 4-диметил-1-пиперазиний/-этилтио1-б- (1-/R/-оксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло (3. 2. 0) гепт-2-ен-2-карбоксилатдифенилфосфат. В холодный (О С) раствор /5R,6S/паранитробензил-6- (1-/R/-оксиэтилj-3, 7-диоксо-1-азабицикло ГЗ ° 2. О геп,тан-2-карбоксилата (0,465 r, 1, 33 ммоль) в ацетонитриле (2 мл), поддерживаеь ьй в атмосфере азота, добавляют диизопроиилэтиламин (0,33 мп, 1,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 30 мин и обрабатывают суспенэией хлоргидрата 1,4-диметил-1— -/2-меркаптоэтил/-пиперазинийбромида (0,40 г, 1,37 ммоль) в ацетонитриле (3 мп) — воде .(1 мл) и диизопропилэтиламином (0,278 мл, 1,59 ммоль). После перемешивания в течение 18 ч при 5 С в смесь добавляют холодную воду (15 мл). Полученный в результате раствор подвергают хроматографии над Преп-Пак-500/С-18 (Уотерз- Ассосиэйтс) в форме колонны (2,5 х 7,5 см) с использованием 25-35Х ацетонитрила 45 в воде в качестве элюирующих растворителей, в результате после лиофилиэации получают :желтоватый порошок (0,50 г, 50X). D. /5R,6S/-.3-f2-/1,4-диметил-1-пиперазиний/этилтио)-6- (1-/В./-окси50 этил)-7-оксо-1-азабицикло (3.2.0)гепт-2-ен-2-карбоксилат. В раствор /5R,6S/паранитробенэил-3-(2-/1,4-диметил-1-пиперазиний/этилтио -6- (1-/К/-оксиэтил) -7-окс о-1-аз абицикло (3. 2 . 0) гепт-2-ен-2-карбоксипат дифенилфосфата (0,47 г, 0,623 ммоль) в "мокром" тетрагидро- 37 34 Фуране (25 мл) добавляют простой диэтиловый эфир (25 мл), калиевый фосфатный буферный раствор моноосновного гидрата окиси натрия (13 мп, рН 7,22) и 107-ный палладий на древесном угле (0,47 r). Полученную в результате смесь подвергают гидрогенизации при о 23 С и давлении 2,812 кг/см в течение 1 ч. Два слоя разделяются, и органический слой экстрагируют водой (2 х 7 мл). Водные слои соединяют, фильтруют через прокладку Целита, промывают простым диэтиловым эфиром (2 х 15 мл) и подвергают хроматографии на колонне (2,5 х 9,5 см) с использованием воды в качестве элюирующего растворителя, в результате чего получают 0,097 г (43X) искомого продукта после лиофилизации. Пример 19. Получение /5R,6S/-3-(2-/1,4,4-триметил-1-пиперазиний/-этилтио1-6-(1К-oксиэтил)-7-оксо-1-азабицикло/3..2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатхлорида. о А. 1-/2-Ацетилтиоэтил/-1,4,4-триметилпиперазинийбромидйодид. Суспензию 1-/2-ацетилтиоэтил/-1, 4-диметилпиперазинийбромида (1,48 r, 5,0 ммоль) в изопропиловом спирте (10 мл) обрабатывают метилиодидом (0,373 мл, 6,0 ммоль) и нагревают до о температуры 55-60 С, которая поддерживается 30 ч. Растворители выпаривают при пониженном давлении, остаток растирают в гексане, а твердое вещество отделяют фильтрацией (1,85 г). Твердое вещество растворяют в горячей воде (8 мп) и раствор разбавляют апетоном до образования мутности (7080 мл). В результате двух последовательных кристаллизаций получают 1 5 r искомого соединения (687) с о т.пл. 2?0-225 С (раэлож.). Рассчитано: С 30,08; Н 5,51; N 6,38. Сн 24 2 Найдено: С 30 48; Н 5 53; N 6,86. В. 1-/2-Меркаптоэтил/-1, 4,4-триме т ил пипер аэ и ний6 ис хлор ид. Смесь 1-/2-ацетилтиоэтил/-1,4,4-триметилпиперазинийбромидйодида (1,84 г, 4, 19 ммоль) и 6 N раствора хлористоводородной кислоты (15 мп) о нагревают до 57 С в атмосфере азота и выдерживают при этик условиях 2,5 ч. Раствор концентрируют при пониженном давлении до сухого состояния. Твердое вещество суспенлируют в воде 1424737 36 (10 мл) и тщательно перемешиваемую суспензию обрабатывают, пермутитом S-1 Сl — вплоть до получения раствора. Раствор сливают на колонну (1,2 х х 60 см) из пермутита S -1 Cl . Колонну элюируют водой (1,5 мл/мин). Соответствующие фракции соединяют и подвергают лиофилизации, в результате чего получают белый порошок (0,93 г), 10 т.пл. 190-191 С, 85Х Рассчитано: С 39,34; Н 8,62; N 10,20; $ 11,67. С Н., К Я С1 0,75Н О Найдено: С 39,48, H 8,39; N 10,55; 15 S 11915. С. /5R,6S/паранитробензил-3-(2-/1,4,4- триметил-1-пиперазиний/этил- тио) -6-(1К-окснэтил -7-оксо-1азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилат- 20 бисхлорид. В холодный (5 С) раствор /5R,6$/= паранитробензил-6- (1 R-oxcmv ) -3, 7-диоксо-1-азабицикло/3.2.0/гептан-2R-карбоксилата (0,94 г, 2,7 ммоль) в ацетоиитриле (3 мл), который поддермивают в атмосфере азота, добавляют.диизопропилэтиламин (0,557 мл, 3, 2 ммоль) и дифенилхлорфосфат (0,663 мл, 3,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 5 С в течение 30 мин и обрабатывают диизопропилэтиламином (0,599 мл, 3,44 ммоль) и водным раствором (4 мл) 1-/2-меркаптоэтил/-1 4 4-триметилпиЭ t 35 перазинийбисхлорида (0,90 r, 3,44 ммоль). Через 1,25 ч добавляют дииэопропилэтиламин (О, 1 мл, 0,57 ммоль) и перемешивание продолжают еще 2 ч. Часть ацетонитрила уда- 40 ляют при пониженном давлении, а полученную в результате красную смесь подвергают хроматографии с использованием 25-75Х ацетонитрила в воде в качестве элюирукщего Растворителяу 45 при этом получают мелтоватый порошок (1,4 г) после лиофилизации, Порошок растворяют в воде и раствор пропускают через колонну (1,2 х 58 см) иэ пермутита S --1 Сl с использованием воды в качестве элюирующего агента. В результате лиофилизации соответствукщих фракций получают 1,17 r noроища, который вновь подвергают очи стке с использованием колонны ПрепПак-500/С-18, в результате лиофили- ° 5 -. 55 зации соответствующих фракций получакгг мелтоватый порошок (0,80 г, 53X) . Рассчитано: С 46,51; Н 6,56; N 8,68; $ 4,97; С1 10,98. С„Н„М,0,$С1, 3Н,О Найдено: С 46,31; Н 6,18; N 8,57; $5,36; Сl 11,37. D. /5R,6S/-3-(2-/1,4,4-триметил-1-пиперазиний/этилтио)-6- (1R-оксиэтил -7-оксо-1-азабицикло/3,2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатхлорид. Смесь /5R,6$/паранитробензил-3-(2-/t,4,4-триметил-1-пиперазиний/этилтио1 -6-(IR-oxcvsvmr)-7-оксо-1-азабицикло/3.2.0/гепт-2-ен-2-карбоксилатбисхлорида (0,40 r, 0,68 ммоль), фосфатного буфера (30 мл, 0,05 М, рН 7,0), тетрагидрофурана (10 мл), простого эфира (30 мл) и 10Х-ного палладия .на древесном угле (0,40 r) подвергают гидрогенизации при температуре 23 С и давлении 2,461 кг/см в течение t ч. Две фазы разделяются. Органическую фазу экстрагируют водой (IO мл). Водную фазу фильтруют через прокладку Целита, промывают простым эфиром (tO мл), концентрируют под вакуумом до обьема 10 мл и подвергают хроматографической обработке на колонне Преп-Пак-500/С-18 (2,2 х 11 см) с использованием воды в качестве элю" ируещего растворителя, в результате чего получают 70 мг (25Х) искомого продукта после лиофилизации. Формула изобретения ОН S-A-8 СООВ, нс где К, - водород, паранитробенэильная или аллильная защитная группа при наличии такме протй- воиона; R - пиридиний или замещенные пи2 Ридиний, имндазолий, тиоморфолиний, пиперазиний, морфолиний А - этилен, незамещенный.или замещенный метилом, циклогексил, исходя иэ кетоэфира общей формулы II 1. Способ получения производных карбапенема общей формулы I 1424737 ОК COOR1 Составитель И. Бочарова Техред М.Ходанич Корректор В.Романенко Редактор М. Циткина Заказ 4699/58 Тираж 370 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 где R — указанная з ащитн ая группа, ( дифенилхлорфосфата, дииэопропилзтиламина, инертного органического растворителя и производного меркаптана, со снятием в случае необходимости карбоксиэащитной группы, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве производного меркаптана используют тиол общей формулы III 38 Н$-А-R т где А и R имеют указанные значения, и взаимодействие кетоэфира общей формулы II с дифенилхлорфосфатом в присутствии диизопропилэтиламина в среде инертного органического растворителя и производного меркаптана осуществляют в одну стадию. 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— шийся тем, что процесс проводят о при температуре от -15 С до комнатной. 3. Способ по п.2, о т л и ч а ю— шийся тем, что процесс проводят при температуре от -15 до +15 С.
