Способ определения 1,5-диаминоантрахинона в крови лабораторных животных
Изобретение относится к медицине . Из сьшоротки крови удаляют белки и экстрагируют смесью бензолхлороформ (4:1). Экстракт отстаивают и спектрофотометрируют при длине волны 410 нм и толщине поглощаемого слоя 1 см. Изобретение повьппает чувствительность способа до 0,1мг/Л. 2 табл.
союз советсних
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУ БЛИН (51) 4 G 01 К 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTKPblTHA (21) 4148131/28-14 (22) 17. 11. 86 (46) 23.09.88. Бюл. N 35 (71) Пермский политехнический институт -. (72) Н.В.Зайцева, А.В.Михайлов и С.А.Силла (53) 612.015 (088.8) (56) Методические указания по химическому анализу лекарственного растительного сырья. Пермь, ПГФИ, 1979, с.45..SU 1425545 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 1,5-ДИАМИНОАНТРАХИНОНА В КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ
ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к медицине. Из сыворотки крови удаляют белки и экстрагируют смесью бензолхлороформ (4:1). Экстракт отстаивают и спектрофотометрируют при длине волны 410 нм и толщине поглощаемого слоя 1 см. Изобретение повышает чувствительность способа до 0,1мг/и.
2 табл.
Изобретение относится к медицинским токсикалогическим исследованиям, н частности санитарной токсикологии и может быть использовано для коли" чественного определения 1,5-диаминоантрахинона н биологических жидкостях, например в крови.
Цель изобретения — повышение чувствительности способа.
Поставлеьная цель достигается тем, что при осуществлении способа определе п я 1,5-диаминаантрахинана в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе экстра| гента с .последующим фотометрирова-!, нием полученного при взаимодействии
1,5"диаминаантрахинона. с зкстрагентом окрашенного продукта, отличителвной особенностью является то„ что в качестве экстрагента используют смесь бензала с хлора ормом в соотношении 4:1, что позволяет повысить чувствительность способа до 0,1 мг/л. О количестве определяемого вещества судят по величине оптической плотности.. .".:.ри экстрагировании анализируемого вещества образуется красно-коричневый раствор. который затем фотометрируют при длине волны 410 нм и толщине поглощаю-= щего слоя 1 см.
Способ осуществляют "педующим образом.
У лабораторного животного (белая крыса весом 150-180 г) отбирают
3 мл крови. Пробу крови центрифуги-
1 руют в течение 15 мин на лабораторной центрифуге ОП, -3 са скоростью
3000 об/мин. Из пробы отбирают 2 мп сыворотки крови,„ к которой прибавляют 0,5 мл 10%-ного раствора хлористого кальция. Для свертывания и осаждения белков раствор центри- фугируют в течение 5 мин со скоростью 3000 об/мин. К 2 мл надосадочной жидкости прибавляют 4 мп бензола и 1 мл хлороформа, Смесь перемешивают и содержимое интенсивно встряхивают н течение 10 мин, Смеси дают отстояться до полного расслоения реагентов и исследуемой пробы. Затем бензольна-хлороформенный слой сливают в пробирку и через
15-20 мин после экстрагирования,измеряют оптическую плотность окрашен-ного раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм и толщине поглощающегo:"ëoè 1 см, По аналогич=!
16
26
36
3"
46
45 ной прописи определяют 1,5-диаминоантрахинон в других биологических жидкостях.
Пример. Анализируют пробы крови (3 мл) с содержанием 1 ° 5-диаминоантрахинона 0,0; 0,1; 0,5; 1,0;
3,0; 5,0 мг/л. Пробы крови центрифугируют в течение 15 мин на лабораторной центрифуге ОП„ — 3 со скоростью 3000 об/мин. Из каждой пробы отбирают по 2 мл сьпзоротки крови, к которой прибавляют 0 5 мл 10%-ного раствора хлористого кальция. Для свертывания и осаждения белков раствор центрифугируют в течение 5 мин со скоростью 3000 об/мин. К 2 мл насадочной жидкости прибавляют 4 мл бензола и 1 мл хлороформа. Смесь перемешивают и содержимое интенсивно нстряхивают в течение 10 мин.
Смеси дают отстояться до полного расслоения реагентов и исследуемой пробы. Затем бензольно-хлороформенный слой сливают в пробирку и через
15-20 мин после экстрагирования измеряют оптическую плотность окрашенного раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм и толщине поглощающего слоя 1 см.
Результаты определения 1,5-диаминоантрахинона при граничных запредельных и оптимальных значениях параметрон приведены в табл.1. Полученные данные с|зидетельствуют о там, что оптимальный эффект наблюдается при использовании в качестве реагентов смеси бензола и хлороформа в соотношении 4:1.
Сравнительные данные определения
1,5-диаминоантрахинона по известному и предлагаемому способам представлены в табл.2.
Как видна из табл.2, предлагаемьй способ определения 1,5-диаминоантрахинона является более чувствительным,, чем известный способ.
Формула изобретения
Способ определения 1,5-диаминаантрахинона в крови лабораторных животных, включающий получение сыворотки кровя, удаление белков, экстракцию органическим растворителем с последующей спектрофотометрией полученного раствора, о т л и— ч а ю шийся тем, чта, с целью повышения чувствительности способа, Т а б л и ц а 1
Не определено
0,0
0,5
1,0 — 18,0
Ф
7,0
3,54
3,0
5,35
5 0
Не определено
0,0
2 °
0,1
0 5
1,0
-21,0 — 9,0 — .3,2
1,21,3,27
3,0
5,16
5,0
3:1
0,0 о
Не определено
0,1
12,0
27, 0
16,7
+ — 5,0
0,56
0 5
1,27
1,0
3,0
3 5
5,25
5,0
Не определено
О, 108
0,0
4:1.. 8,0 4,0
-50
0,1
0,52
0,5
1,05
1,0
3,0
2,9
3,09 з 1425545
4 экстракцию проводят смесью бензол- отстаивают не менее 15 мнн, после хлороформ, взятых в объемном соот- чего спектрофотометрир.ют нри длине ношении 4: 1, полученный экстракт волны 410 нм.
1425545
Продолжение табл.1
5,08
1,6
5,0
5:1
О,О
Не определено
0,1
12,0
0,5
0,56
13,0
+ — 3,3
1,0
1,13
3,1
3,0
1,0
5 05
5 0
6:1
0,0
Не определено
0,1
1,21
1,0
3,08
5,12
5,0
Таблица2
Известный способ
Предлагаемый способ
Определяемая конЦентрация, (средняя пяти определений), мг/л
Погрешность определения, %
3 анная кон центрация, мг/л огрешность пределения
% аданная онцентрация, мг/л
Не определено
0,0
Не определено
0,0
0,1
0,11
0 5
0,51
". 16, О
1,06
1,0
1,0
11,8
3,0
3,40
3,09
3,0
5 О
5,25
5,7
5,0
Тираж 847 Подписное
ВНИИПИ Заказ 4761/40
Произв.-полигр. пр-гие, г. ужгород, ул. Проектная, 4 пр ед еля емая онцентрация средняя пяти пределений), мг/л
21,0
2,6
2,4
10,0
2,0
6,0
2,9 — 4,8
