Способ определения протеолитической активности и кислотности в верхних отделах пищеварительного тракта in vivo

 

Изобретение предназначено для гастроэнтерологии. Цель изобретения - повьшение информативности и точности измерения рН. Субстрат обрабатывают 3-6 М раствором мочевины при значениях рН выше изоэлектрической точки белка-субстрата. Исследуют смещение зоны обратимой коагуляции белка и определяют протеолитическую активность и кислотность. Точность определения кислотности повышается с единицы до 0,2 единиц водородного показателя. Способ позволяет получать обобщенное представление о кислотности среды за весь исследуемый период времени. 4 ил. Г. S СО

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (П) А1 (ю 4 С 01 N 33/68, 33/84

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ С8ИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4081909/28-14 (22) 23;06.86 (46) 23.09.88. Бюл. 1(- 35

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

t (71) Ленинградский санитарно" гигиенический медицинский институт (72) В,А.Горшков, H В.Насонова и Р.И.Боговик (53) 612.015 (088.8) (56) Горшков В.А. Определение протеолитической активности в желудке и двенадцатиперстной кишке человека

in situ. Лабораторное дело, 1975, У 3, с. I31-135. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И КИСЛОТНОСТИ В

ВЕРХНИХ ОТДЕЛАХ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО

ТРАКТА IN ЧИЧЧО (57) Изобретение предназначено для гастроэнтерологии. Цель изобретения— повышение информативности и точности измерения рН. Субстрат обрабатывают

3-6 М раствором мочевины при значениях рН выше изоэлектрической точки белка-субстрата. Исследуют смещение зоны обратимой коагуляции белка и определяют протеолитическую активность и кислотность. Точность опре" деления кислотности повышается с единицы до 0,2 единиц водородного пбказателя. Способ позволяет получать обобщенное представление о кислотнос" с

Ж ти среды за весь исследуемый период времени. 4 ил.

i 425551

ЗО

1я мм 0 9

1 „, мм 1, 7

iL,y (ð, MM 1,5 рН 3,5

5,8 6,6

10,6 13,3

9,4 12,0

2,2 2,0

7,2 8,4

16,4 1/,0

15 0 15,3

1,8 1,8

7,0 5,5

15,6 13,3

14,2 12,2

1,8 2,0

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии.

Цель изобретения — повышение информативности за счет суммарной оцен5 ки параметров за весь период исследования и повышение точности измерения рН.

На фиг,1 изображена калибровочная кривая для нахождения рН по величине 10 смещения зоны обратимой коагуляции белка (1 ); на фиг.2 — зависимость

1 с от рН буферных растворов при инкубации 6 и 24 ч субстратных трубок при 38 С (субстрат, разведенный в 1,5 раза 0,9/-ным раствором хлорида

1 натрия, — яичный белок, обработанный мочевиной); на фиг.3 — зависимость

1 о от времени пребывания субстрат> ных трубок в буферных растворах с рН. от 1,0 до 2,2 (субстрат и температурные условия те же); на фиг.4 — характер изменения 1 >„ во времени при инкубации субстратных трубок в буферных растворах с рН 1 и 2, равнообъемной 25 смеси этих растворов и при попеременной часовой инкубации в буферных ра:створах с рН 1 и 2 (субстрат и температурные условия те же) .

Способ осуществляют следующим

:образом.

Используемый в качестве субстрата белок готовят в виде прозрачного геля путем предварительной обработкн его солюбилизатором, например мочевиной, при фиксированных выше изоэлект35 рической точки белка-субстрата значениях рН, в результате чего при последующей термической обработке белок приобретает консистенцию прозрачного геля, способного к обратимой коагуляции в иэоэлектрической точке. Определение кислотности проводят путем измерения величины смешения зоны обра50

Низкая протеолитическая (0,9 мм) активность и кислотность (рН 3,5) в первом сегменте указывают на его расположение в кардинальном отделе желудка или пищевода. В последующих сегментах протеолитическая активность сначала нарастает, а затем снижается, рН на протяжении желудка колеблется от 2,2 до 1,8. Таким образом, тимой коагуляции белка вглубь субстрата с последующим нахождением по калибровочной кривой соответствующего этому смешению значения рН.

Пример 1. Больной Ф,, 40 лет.

История болезни Р 30209 эа 1984 г, Диагноз; язвенная болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

При исследовании кислотообразующей функции желудка тонким зондом в содержимом желудка натощак и в базальном секрете свободной НС1 не обнаружено, В ответ на гистамин (0,01 мг/кг) концентрация НС1 возросла до 52-90 ммоль/л. Базальная (БКП) и гистаминовая (ГКП) кислотная продукция равны соответственно 2,9 и

36,6 ммоль/ч.

На основании исследования желудочной секреции трудно решить какая кислотность существует на самом деле в желудке данного больного в обычных условиях его жизни. Судя по отсутствию свободной НС1 в желудке натощак кислотность может быть невысокой °

Выраженная гиперсекреторная реакция на гистамин не исключает возможности высоких ее показателей. Для уточнения данного вопроса больному проведено исследование кислотно-пептической активности по предлагаемому способу.

Белковая цепочка 13.12.84 г. введена на сутки в желудок. Сусстрат (как и в последующих примерах), разведенный в 1,5 раза 0,97.-ным раствором хлорида натрия, — яичный белок, обработанный мочевиной. Длина сегментов 45 мм, B продолжение исследования больной вел обычный образ жизни, лекарств не получал.

Результаты записаны от проксимального к дистальному концу цепочки:! в приведенных цифрах мы имеем отражение реально существующей в желудке данного больного кислотности и протеолитической активности °

Пример 2. Больной С., 55 лет.

История болезни У 1447 за 1985 г.

Диагноз: хронический гастрит с секторной недостаточностью желудка, Функциональная кишечная диспепсия °

0,0

0,0

13. и рН 4

1 3,0 2,9

0 8,4 8,4

3 7,8 7,8

8 1,8 1,8

2,8

7,8

7,2

1,8

2,5 2,1

6,7 5,1

6,2 4,7

1,9 2,2

ТЖ

НЧД

П ции.

8,0 5,7

13,1 9,8

1,9 2,2

3 4

0000747274

0,0 0,0 11,4 15,5 15,0 .44201818

6 6 3 2 2

) пр

1- и рН

РНина

3 14255

При исследовании кислотообразующей функции желудка выявлено отсутствие свободной соляной кислоты во всех порциях желудочного сока БКП

0,6, ГКП 0,3 ммоль/ч.

В течение суток (с 24.01 по

25.01.85) проведено исследование кислотно-пептической активности.

Результаты: l0

1пр 0 0 0 ° 0 0,0 0 4 1 4 2 0 25 рН во всех сегментах вьппе 4.

В этом примере данные исследования кислотно-пептической активности

in vivo согласуются с данными исследования кислотообразующей функции желудка тонким зондом. Видно, что, несмотря на ахлоргидрию в желудке 20 определяется небольшая протеолитическая активность, нарастающая в дистальном направлении, Последнее характерно для больных атрофическим гастритом и объясняется забросом в желудок протеза дуоденального содержимого, которые в отсутствии кис1

0,8 2,0 2,7 3,2 3, 0,0 4,8 7,2 8,0 8, 0,0 4,4 6,7 7,4 7, 4 2 3 1 9 lå8 1з, 35

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в области луковицы двенадцатиперстной кишки у данного больного показатели кислотно-пептической активности не отличаются от 40 таковых в теле желудка, что указывает на высокую степень кислотнопептической агрессии в зоне ульцера 45

Пример 4 (контрольный). Боль" ной М., 33 лет. История болезни

1г 4315 за 1985 . Диагноз: язвенная

При 1» 5,7 содержимое и субстрат в сегменте прокрашены желчью. е

Сопоставление полученных результатов показывает, что наибольшие и прилоты проявляют свое протеолитическое действие.

Пример 3, Больной Д., 32 лет.

История болезни l" 372 за 1986 г °

Диагноз: язвенная болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

При исследовании кислотообразующей функции желудка выявлена выраженная гиперхлоргидрия: БКП 16,8, ГКП

32,6 ммоль/ч. Для выяснения уровня кислотно-пептической агрессии в проксимальных отделах дуоденум 9.0l.86ã, проведено исследование кислотнопептической активности с использованием рентгеноконтрастной цепочки.

Длина сегментов 35 мм, время исследования 6 ч.

Через 1,5 ч после введения цепочки и через 1 ч после завтрака произведена рентгенография области желуд= ка. По данным рентгенограммы выявлены

Ъ сегменты, расположенные в пищеводе (II) теле желудка (I7l) антропилорическом отделе (АП), в луковице (Л) и нисходящей части дуоденум (НЧД) °

Результ аты: болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

С 28.02. по 1.03.85 г. в течение суток производилось исследование кислотно-пептической активности.

По извлечении белковой цепочки рН интрагастральной среды определяли но величине смещения зоны обратимой коагуляции индикаторным способом (инд.) с помощью универсальной индикаторной бумаги согласно известному способу.

Результаты: том весьма существенные расхождения в значениях рН получены в сегментах цепочки, соответствующих проксимальному и дистальному отделам желудка.

5 14255

Это объясняется тем, что в предутренние часы, когда секреция кислоты в желудке у большинства людей снижается, рН субстрата подвержен значитель5 ному влиянию заглатываемой слюны (в проксимальных отделах) и щелочному дуоденальному рефлюксу (в дистальных). Последнее находит подтверждение и в приводимом наблюдении, так как содержимое последнего сегмента (гидролиэат и субстрат) интенсивно про" крашено желчью. Зона обратимой коагуляции белка, значительно удаленная от края субстрата, остается недопус15 тимой влиянию непродолжительных изменений рН интрагастральной среды.

Сдвиги рН в ту или иную сторону лишь меняют скорость ее смещения к центру сегмента, В теле желудка по данным

1 ок также получены более низкие значения рН, чем при использовании индикаторного метода. В этой связи напомним, что с помощью индикаторной бумаги растворы, имеющие рН от 1,8 до 2,0, неразличимы.

Пример 5 (контрольный). Больной П., 36 лет. История болезни

Ф 28263 эа 1984 г. Диагноз: язвенная болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

Исследование кислотно-пептической активности произведено дважды: до и на фоне приема 50 мг гастроцепина.

Время исследования 6 ч. Определение рН остатка субстрата индикаторным 35 способом в обоих случаях показало одинаковые значения рН в желудке, равные 2. При исследовании рН интрагастральной среды по величине 1 к получены следующие данные.

До приема гастроцепина:

1пр 0,4 2,8 3,0 2 ° 9 2в7 2в4 рН ) 4 1,7 1,5 1,6 1,6 1,8

На фоне приема гастроцепина:

1пр 0,0 1,3 2,3 2,2 2,2 2,1

1ркн 00 45 7,1 7,3 .6,8 68 рН ) 4 2,2 1,8 1,8 1,9 1,9

Иэ сопоставления приведенных данных видно, что на фоне действия гаст- 50

51 6 роцепина рН интрагастральной среды возрос от 1,5- 1,6 до 1,8-1,9. Этому соответствует хотя и не слишком выраженное, но убедительное снижение протеолиза. Зарегистрировать обнаруженные сдвиги в величине рН с помощью индикаторной бумаги невозможно ввиду недостаточной точности этого способа.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что определение кислотности ° в верхних отделах пищеварительного тракта предлагаемым способом обладает несомненными преимуществами перед известным способом, которые состоят в повышении точности определения рН от 1,0 до 0,2 единиц водородного показателя; в возможности получать обобщенное представление о кислотности среды за весь исследуемый перйод времени, При этом предварительная обработка субстрата мочевиной не снижает его гидролизуемости протеазами желудочного и дуоденального содержимого.

Формула изобретения

Способ определения протеолитической активности и кислотности в верхних отделах пищеварительного тракта

in vivo, включающий введение в пищеварительный тракт эластичного зонда с термическим денатурированным белковым субстратом с последующим определением активности и кислотности по расщеплению субстрата, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения информативности за счет суммарной оценки параметров за весь период исследования и повышения точности измерения рН, субстрат предварительно обрабатывают 3-6 М раствором мочевины при значениях рН выше изо1 электрической точки белка-субстрата, B полученном прозрачном субстрате исследуют смещение зоны обратимой коагуляции белка и по значению смещения определяют протеолитическую активность и кислотность.

1425551 э 22

18 !

О И 18 22 Zb ХО X4 О рн

Фиг.1 16

32

1425551 драя, v

Фиа 4

Составитель M.Ïóñòûííèêîâ

Редактор Н.Рогулич Техред A.Êðàâ÷óê Корректор В.Романенко

Заказ 4762/41 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4