Способ определения массовой доли нерастворимого осадка молокосвертывающих ферментов

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при оценке качества молокосвертьшающих ферментов, а именно для определения массовой доли нерастворимого осадка в них. С целью ускорения и упрощения способа перед фильтрацией измеряют оптическую плотность раствора, после фильтрации вторично изме ряют оптическую плотность раствора, а затем массовую долю нерастворимого осадка определяют по формуле: Н 3,52Е+0,136, где Н - массовая дсшя нерастворимого осадка, %J Е - разность оптических плотностей раствора до и после фильтрации , о.ед;53,52 и 0,136 - постоянные коэффициенты. 1 ил, 1 табл . (Л

СО)ОЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) А1 ц1) 4 С О1 М 33/48,, 21/00 //

С 12 N 9/64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ цтр-;".

Б;:6 .. ":

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

llO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4290531/31-13 (22) 27.07.87 (46) 30.01.89. Бюл. Ф 4 (71) Восточно-Сибирский технологический институт (72) P..А.Васильева, M.Á.Данилов и Л.В.Сысоева (53) 664.000(088.8) (56) Инихов Г.С., Брио Н.П. Методы анализа молока и молочных продуктов.

М.: Пищевая промышленность, 1971, с. 154.

ТУ 49 522-79. Пепсин пищевой куриный, с. 13. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ

НЕРАСТВОРИМОГО ОСАДКА МОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при оценке качества молокосвертывающих ферментов, а именно для определения массовой доли нерастворимого осадка 5 в них.

Цель изобретения — упрощение и ускорение способа.

Согласно предлагаемому способу

t0 пепсин растворяют в дистиллированной воде. Нерастворимые частицы — продукты различной химической природысоздают суспензию. По разности оптических плотностей у раствора суспенэии (растворенный пепсин + нерастворившаяся часть) и отфильтрованного раствора (растворенный пенсии) опреде/ ляют значение, а затем по предлагае(57) Изоб))етение относится к биотехнологии и может быть использовано при оценке качества молокосвертывающих ферментов, а именно для определения массовой доли нерастворимого осадка в них. С целью ускорения и упрощения способа перед фильтрацией измеряют оптическую плотность раствора, после фильтрации вторично измеряют оптическую плотность раствора, а затем массовую долю нерастворимого осадка определяют по формуле: Н = 3,52E+0,136, где Н вЂ” массовая доля нерастворимого осадка, Е, Š— разность оптических плотностей раствора до и после фильтрации, о.ед; 3,52 и 0,136 — постоянные коэффициенты. 1 ил, 1 табл, мой формуле находят массовую долю нерастворимого осадка.

На чертеже представлена графичес- СЛ кая зависимость с указанием точек раэ- Ql броса разности оптической плотности ф,) до и после фильтрации от массовой до- в ли нерастворимого осадка, при колеба- ра нии последней от 0,7 до 77.

В опытах используют 5 видов моло-! косвертывающих ферментов: овечий, говяжий, свиной фп-6 и фп-7, Повторность опытов 7-10 кратная. Массовую долю сырого осадка определяют по существующей методике, а разность оптических плотностей — по предла гаемой методике.

Исходя из графика следует, что между массовой долей нерастворимого

3 145 осадка молокосвертывающих ферментов и разностью оптических плотностей раствора до и после фильтрации существует функциональная зависимость, описываемая линейным однофакторным уравнением вида: у=ах+Ь, где,.а и Ъ " постоянные коэффициенты.

Коэффициенты а и Ь рассчитывают, по методу наименьших квадратов.

При обработке экспериментальных данных получены значения коэффициен тов: а = 3,52; Ь = 0,136.

Проверку адекватности полученного уравнения вида Н = 3,52Е + 0,136: экспериментальным данным проводят пу .тем определения критерия Стьюдента и ! последующего сравнения полученного результата с табличными при довери тельной вероятности р = 0,95.

Значение табличного критерия (при числе опытов 40 и р = 0 95) сос-! тавляет 2,02. ! !

Расчетное значение определяют по формуле:

5311 а установлена функциональная зависимость междумассовой долей нерастворимого осадка и показателем оптической плотности

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Навеску молокосвертывающего ферментного препарата 0,1 r взвешивают

10 с точностью до 0,001 г, растворяют в 10 мл дистиллированной воды, нагретой до 35 0,5 С, выдерживают 10 мин при указанной температуре в ультратермостате, затем содержимое перемешивают 10 с и определяют процент светопропускания раствора в неизбирательной области спектра на фотоэлектрокалориметре при ширине кюветы 1 = 1 см.

Далее переводят по таблице процент

2р светопропускания на показатель оптической плотности и,зная разность оптических плотностей растворов до и после фипьтрования (Е)„ находят массовую долю нерастворимого осадка по

25 уравнению:

Н = 3,52K+0,136;,.

añ,,/sañ

,где d — среднее значение разности результатов анализа, определенных различными метода-! ми;

Sd — среднее квадратичное отклоср нение.

Среднее квадратичное отклонение находят по уравнению:

/n-1, ср где d — среднее значение, d< — значение единичного результата, n — число опытов.

По всем измерениям d = 0Ä37

Бйс = 0,48. Тогда t = 0,37/0,48 — 0,79.

Так как рассчитанная величина критерия Стьюдента 0,79 меньше табличного значения 2,02 (при количестве опытов 40 и доверительной вероятности

0,95), то отсутствует систематическая погрешность метода.

Таким образом, в результате дли-. тельного эксперимента (более 100 оп-, ределений) выявлена возможность создания экспресс-метода для определения массовой доли нерастворимого осадка, пропускания до фил ь тр ации

Показатель свето19,20 пропускания после фильтрации 15,50

Затем по таблице переводят про50 цент светопропускания в показатель оптической плотности и получают следующие значения.

Показатель оптической плотности до фильтрации 0,72х3 (степень разбавленйя) = 2,16, после фильтрации

0,81.

Разность составипа 1,35 (2, 16

0,81). Следовательно, H=3,52 ° 1,35 +

+ 0,136 = 4 88.",.

Пример 1. Для исследований

30 берут О, 1 r овечьего пепсина, навеску растворяют в 10 мл дистиллировано ной воды, нагретой до 35 С, содержимое перемешивают 10 с, определяют светопропускание раствора в неизбирательной области спектра на фотоэлектрокалориметре.ФЭК при ширине кюветы

1 = 1 см (разбавление 1:2). Далее раствор фильтруют через бумажный фильтр Р 90 и B профилированном раст40 воре вновь определяют процент светопропускания.

Получены следующие значения, Показатель светотон эксперимента. Точность эксперимента повышается за счет снижения количества производимых операций (4-кратное взвешивание в известном).

Технические преимущества предлагаемого способа заключаются в упрощении и значительном ускорении способа определения качества молокосвертываюшего препарата по массовой доле нерастворимого осадка. Время определения по известному способу составляет

5-6 ч с учетом проведения всех операций, по предлагаемому способу определение может быть выполнено за

20-30 мин. Уменьшается также объем навески в предлагаемом способе О, 1 г, в известном — г, Учитывая дефицит молокосвертывающих ферментов, сложность их вьделения,можно значительно экономить материал.

Формул а изобретения пропускания до фильтрации

Показатель свето16,2

Способ определения массовой доли нерастворимого осадка молокосвертывающих ферментов, предусматривающий взвешивание навески, растворение ее в воде, вьдержку, фильтрацию раствора фермента и последующую оценку результатов, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса определения, оценку результатов проводят путем измерения показателей оптической плотности растворов фермента до и после фильтрации и расчета по формуле

3,52Е+0,136, где Н

3,52 и

0,136 — постоянные коэффициенты

Статистические показа- Известный матод Предлагаемый метод тели

Среднее арифметическое и его сшибка

3,49+0, 165

3,43+0,081

Относительная погрешность измерения

2,43

4,72

3,75

Коэффициент вариации, Х 6,86

5 14553

Одновременно массовую долю нераст,воримого осадка в овечьем пепсине определяют известным способом по разности весов фильтра без навески и

5 после фильтрации через него с последующей сушкой до постоянного веса.

Массовая доля нерастворимого осадка по известному способу составила

4,90%. Отклонение результатов по 10 сравниваемым методам составило О, 07

HJIH 1, 2%

Пример 2. Для исследований берут О, 1 г говяжьего пепсина. Технологические приемы аналогичны опи- 15 санным в примере 1.

Показатель светопропускания после фильтрации 53,5

Показатель оптической плотности до фильтрации 0,79х3=2,37

Показатель опти ческой плотности после фильтрации 0,27Разность оптических плотностей 2,37-0,27=2, 10

Расчетная массовая доля нерастворимого осадка в ферменте Н = 3,52"

42,10 + 0,136 = 7,39Х.

Массовая доля нерастворимого осадка по известному способу составила

7,56. Разность составила 0,17 или

2,25%.

Результаты сравнения по ферментному препарату фп-6, представлены в таблице, (количество опытов 8).

Как видно из таблицы при определении массовой доли нерастворимого осадка предлагаемым методом снижается относительная погрешность измерения примерно на 50Х, что обеспечива- 45 ет получение более надежных результамассовая доля нерастворимого осадка, Х, разность оптических плотностей раствора до и после фильтрации, о.ед, 1455311 ., 2,0 ,, tlQ

Составитель И.Привалова

Редактор Л.Пчолинская Техред М.Дцдык КорректорВ сутяга

Заказ 7452/53 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ ;осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Про. зводс -венно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4