Способ радиоиммунологического определения биологически активных веществ

 

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повышение точности и упрощение способа. В полимерный (Носитель включают сцинтиллятор. В стеклянные флаконы вносят полученный раствор,.равномерно распределяют его по внутренней поверхности флакона.путем непрерьшного вращения флако на. Во флаконы добав-- ляют раствор иммуноглобулина G против простагландина В в буфере. Проводят сорбцию антител. Раствор слчвают и флаконы промьтают буфером. Затем регистрируют световое излучение . 2 ил. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК и 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

Г1РИ ГННТ СССР (21) 4! 03085/28-14 (22) 18. 07 . 86 (46) 07.02.89, Бюл. У 5 (71) МГУ им. М.В. Ломоносова, Институт биохимии им. А.Н. Баха и Центральный научно-исследователь ский институт эпидемиологии (72) А,П. Осипов, В,А. Лебедев, А.В. Краснянский, А.В. Майоров, Н.К. Гапонова, А.М. Блинковский, В.М. Ганшин, А.М. Егоров и И.В. Березин (53) 612.015(088.8) (56) US Patent nr. Re 29480, USС1, 424(1.5).

Изобретение относится к медицине,. а именно к способам. проведения радиоиммунологического анализа (РИА) с использованием в качестве маркера трития и I.

1йз

Цель из о бре тения — по вышек не точности и упрощение способа за счет ликвидации стадии разделения иммунных комплексов от несвязавшихся меченых компонентов.

Пример 1. Для нанесения на стеклянную поверхность полимерной сцинтиллирующей пленки 100 г полистирола, I 5 г 2,5-дифенилоксаэола и 0,04 г 1,4-бис(5-фенил(оксазолил)) бенэола растворяют в 500 мл толуола. В стеклянные флаконы для измерения радиоактивности вносят по

„„Я0„„3456892 д1 (54) СПОСОБ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — повышение точности и упрощение способа. В полимерный носитель включают сцинтиллятор. В стеклянные флаконы вносят полученный раствор,.равномерно распределяют его по внутренней поверхности флакона. путем непрерывного вращения флакона. Во флаконы добав ляют раствор иммуноглобулина G против простагландина В в буфере. Проводят сорбцию антител. Раствор слцвают и флаконы промывают буфером.

Затем регистрируют световое излучение. 2 ил.

0 5 мл полученного раствора и равномерно распределяют его по внутренней поверхности флакона путем непрерывного вращения флакона ° В течение суток при комнатной температуре органический растворитель полностью ис- . паряется, а на внутренней поверхности флакона образуется полистирольная пленка с равномерно распределейным в ней сцинтиллятором..

Пример 2. Стеклянную палочку длиной 3 см и диаметром 1 см погружают в раствор, содержащий

100 г полистирола и 0,01 г 1,4-бис (5-фенил(оксазолил)) бенэола в

500 мл толуола. Палочку с равномер но нанесенным раствором полистирола высушивают при комнатной температуре з 1456892

4 активности с нанесенной на внутреннюю поверхность полистирольной плен <ой, в течение суток, в результате чего на поверхности образуется полимерсогласно примеру 1, содержащей сорбиная пленка с равномерно распределенным в ней сцинтиллятором. рованные на ней, согласно примеру 4, Пример 3. )00 r поливинил- антитела против простагландина В, до5 толуола и 10 r 2,5-дифенилоксазола бавляют 0,85 мл 0,01 М фосфатного растворяют в 500 мл толуола. В раст- буфера рН 7,0, содержащего 0,14 MNaC1, вор опускают стеклянную пластинку 0,1 мл раствора (Н)-простагландина В размером 1 "3 см, затем пластинку вы- 0 (удельная активность 20000 распадов в сушивают при комнатной температуре в минуту на мл раствора) к 50 мл опретечение суток, в результате чего на ;: деляемого раствора простагландина В.

Флакон помещают в счетчик для измеповерхности пластинки образуется порения радиоактивности и регистрируют лимерная пленка с равномерно распределенным в ней сцинтиллятором. 15 счет в течение 3 мин через каждые

15 мин в течение нескольких часов.

Пример 4. В стеклянные флаконы для счета радиоактивности с нанесенным на внутреннюю поверхность

Получаемые кинетические кривые, отражающие процесс связывания меченого антигена с соответствующими антителами на поверхности полимерной пленслоем полистирола со сцинтиллятором 20 согласно примеру 1, вносят по 1,5 мл ки в присутствии свободного простараствора IgG кролика против проста гландина В в концентрациях 70 и гландина В в 0,01 М трис-НС1 буфере 630 мкг/мл (кривые 1 н 2 соответстрН 7,3 с концентрацией 0,02 мг/мл. венно), представлены на фиг. 1. НаСорбцию антител на поверхности. твер- 25 хождение неизвестной концентрации дого сцинтиллятора осуществляют в те- простагландина В проводят по калибчение 2 ч при комнатной теипературе. ровочной кривой, сравнивая через фикРаствор сливают и флаконы промывают сированные моменты времени счет оптрис-НС1 бефером. Для уменьшения не- ределяемого образца со стандартом. Каспецнфической сорбции оставшиеся сво- 30 либровочные кривые, полученные как в бодными участки носителя блокируют равновесном режиме (кривая 1, время

0,37- ным раствором бычьего сывороточ- инкубации 2,5 ч), так и в кинетиче» ного альбумина в течение 1,5 ч при ской области (кривая 2, время инку комнатной температуре. Раствор сли- бации 25 мин) > приведены на фиг. 2. вают и промывают 3 раза трис-НС1 буфе- Коэффициент вариации результатов ана-

35 ром по 3 мин каждой порцией.. Закры- лиза составляет .З . тые крышками высушенные флаконы сФормула изобретения нанесеннымч на внутреннюю поверхность .

/ антителами хранят в холодильнике ; .Способ радиоиммунологического опо при 4 С. 40 ределения биологически активных веСорбцию антител другой специфич- ществ, включающий иммобилизацию анти.ности на полимерных пленках другой тел на полимерном носителе, обработприроды (поливинилтолуол, поливинил- ку их антигенами,. меченым тритием в хлорид и др.), нанесенных на стеклян-, присутствии определяемого соединения, ную поверхность, проводят по анало 45 введение сцинтиллятора и региСтрацию гичной методике с использованием его светового излучения, о т л ирастворов антител соответствующей спе" ч а ю шийся "тем, что, с целью поцифичности. вышения точности и упрощения способа, Пример 5. Для проведения кон- сцинтиллятор включают в полимерный

-4 курентного варианта анализа проста- 50 носитель при соотношении 10 -1(Г r гландина В во флакон для счета радио- сцинтиллятора на 1 г носителя.

1456892

20 1

1 8

Ь

° л

I б

12 ф

q 10

В "8 :ь 6 л ф 4

Вг ф

40 ЮО 80

Время инеубоциц мин

1 Я 3. 4 .5 (йрастаелоидин В), игал

49uz 2