Способ диагностики алкогольной миокардиодистрофии

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано в кардиологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики алко гольной миркардиодистрофии. Способ диагностики алкогольной миокардиоди™ атрофии заключается в том, что из исследуемой сьшоротки крови путем адсорбиии удаляют антитела к здоровому сердцу и сердцу, пораженному атеросклерозом . Затем с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют антитела к миокарду, пораженному алкогольной миокардиодистрофией, специфичность которой подт тверждают реакцией торможения пассивной гемагглютинащш (РТПГА), и при уменьшении титров антител в РТПГА по сравнению с РПГА в четыре и более раз результат анализа считают положительным , что позволяет диагностировать алкогольную миокардиодистрофию. Предлагаемый способ обеспечивает с высокую точность диагностики алкогольной миокардиодистрофии (89,2%). (Л

СОЮЗ СОЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН g 4 G 01 N 33/53

), ° 4

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4033002/28-14 (22) 14.03,86 (46) 07.03,89. Бюл, Р 9 (71) Ростовский медицинский институт (72) Е,П.Москаленко, A.Ã.Можайцева, И.A.Êëåíîâà и О.Н.Кобзарь (53) 615.373 (088.8) (56) Терапевтический архив, 1981, N - 8, с,96-101. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛКОГОЛЬНОЙ

ИИОКАРДИОДИСТРОФИИ (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано в кардиологии, Пель изобретения повышение точности диагностики алкогольной миокардиодистрофии. Способ диагностики алкогольной миокардиодистрофии заключается в том, что из исИз обре т ение о тно сится к медицине, а именно к нескольким смежным дисциплинам — кардиологии, иммунологии, и может быть применено для диагностики алкогольного поражения сердечной мышцы (алкогольной миокардиодистрофии).

Цель изобретения — повышение точности способа диагностики алкогольной миокардиодистрофии.

Способ осуществляют следующим об разом.

Сыворотки больных с подозрением на на диагноз алкогольной кардиомиопатии (миокардиодистрофии) прогревают при

56 С 30 мин, После отстаивания добавляют взвесь 507.-ных формалинизироваиных эритроцитов для адсорбции в .количестве 0,1 мл иа 1,0 мл сыворотки.

Смесь встряхивают и оставляют на 18 ч,.SUÄÄ 1464087 А1 следуемой сыворотки крови путем адсорбпии удаляют антитела к здоровому сердцу и сердцу, пораженному атеросклерозом. Затем с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют антитела к миокарду, пораженному алкогольной миокардиодист" рофией, специфичность которой под тверждают реакцией торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА), и при уменьшении титров антител в РТПГА по сравнению с РПГА в четыре и более раз результат анализа считают положительным, что позволяет диагностировать алкогольную миокардиодистрофию. Предлагаемы способ обеспечивает а высокую точность диагностики алкогольной миокардиодистрофии (89,27). при +4 С. Для выявления антител к сердцу, пораженному алкогольной мио- фЬ кардиодистрофией, сыворотки больных, {5ф предварительно инактивированные и ад- ф сорбированные формалинизированными эритроцитами барана, последовательно истощапи эритроцитарвым диагностикумом, содержащим антиген нормального сердца, и эритроцитарным,диагностикумом, содержащим антиген сердца, пораженного атеросклерозом. Количественное соотношение сыворотки и диагностикума 1:3, длительность истощения

60 мин, температура истощения 37 С.

Полноту истощения сыворотки больного проверяли в РПГА с эритроцитами, сен-. сибилизированными антигенами здорового сердца и эритроцитами, сенсибилизированными антигенами сердца, пора1464087 женного атеросклерозом. Адсорбированные таким образом сыворотки исследуют в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА) с препаратом

5 формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных антигенами, выделеннымл из сердца, пораженного алкогольной миокардиодистрофией, Пре- 10 парат представляет собой 0,6Х-ную взвесь танзированных эритроцитов, формалинизированных по модифицированному методу Чиэмеса в модификации

Леви и сенсибилизированных соответст- 5 вующими антигенными комплексами, выделенными иэ сердца (50X-ные формалинизированные эритроциты обрабатывают

0,3Х раствора танина при 37 С в течение 40 мин. Танизированные бараньи эритроциты отмывают дважцы стандарт".. ным солевым раствором (0,9Х:ЕаС1 +

+ 0,45 Na>C

40 мин. Рекомечдуемая доза антигена

20 мкг/мп по белку) позволяет полу»„ чать диагностикумы с наибольшей чувствительностью. После окончания сенсибилиэации эритроциты два раза отмы-30 вают смесью ССР. Третий раз отмывают смесью ССР с бычьим сывороточным альбумином в соотношении (100 мл ССР—

28 мг БСА). Осадок эритроцнтов суспендируют в 10 мл смеси ССР и БСА

35 и добавляют 0,37Х . раствора форма "IHна. Каждая серия препарата содержит опытный и контрольный диагностикумы, приготовленные из одной серии формалинизированных эритроцитов. Контрольный препарат отличается от опытного тем, что не проходит обработки антигеном.

Выявляемые антитела в титре 1;8 и выше свидетельствуют о наличии у больного пораж ния миокарда,.связан-.. ного с алкогольной интоксикацией, Техника постановки реакции состоит в разливе раствора,цля реакции (стандартно-солевого раствора) капельницей с мерной на 0,025 мл на" садкой во все лунки пластины микротитратора Такачи. Прокаленными и остуженными приспособлениями для разбавления исследуемая сыворотка вносится в раствор первой лунки. Вращением приспособления для разбавления достигается перемешивание и обеспечивается захват 0.025 мл смеси, кото". рая переносится в следующую лунку.

Таким способом производятся титрование — разведением кратностью, равной двум, и получение ряда разведений испытуемой сыворотки от 1:2 до 1:

:256, последняя лунка служит контролем опытного диагностикума, Доведенный до рабочего разведения (1 мл диагностикума и 3 мл стандартно-солевой смеси) опытный диагностикум капельницей с мерной насадкой вносится в каждую лунку. Контрольный диагностикум проверяют с исходным разведением сыворотки, Осторожным покачиванием доводят смесь до.гомогенного состояния в каждой лунке и оставляют пластину на неподвижной поверхности.

Учет результатов РПГА проводят через 1,,5-2 ч по слецующей схеме:

+ — положительная РПГА, эритроциты равномерно устилают всю сферу лунки;

- - отрицательная РПГА, эритроциты равным (колечком" или "пуговкой" лежат на самом,цне лунки; + - переходные формы, частичная агглютинация широкое "колечко", иногда по краю заметна агглютинация.

Для подтверждения специфичности каждого положительного результата

РПГА применяют РТПГА.

К серии двукратных разведений испытуемой сыворотки, аналогичных для РПГА, добавляют 0,025 мл рабочего разведения антигена (1:10 при наличии 1500 мкг/мл белка по Лоури в исходном антигене). К смеси сыворотки и антигена через 30 мин инкубации

О при 37 С добавляют диагностикум по

0,025 мл. Шкала учета не отличается от принятой для РПГА, В качестве обязательного контроля входит постанов- . ка РПГА и РТПГА с сывороткой больных с эаведсмо известным диагнозом, Антиген для постановки РПГА получали Ь -нафтоловым методом. Пля выделения антигенов использовали ткань нормального сердца, взятого от трупа человека., погибшего от травмы, а также патологически измененного сердца, взято го о т трупа пациента, страдавшего атеросклерозом, а также от трупа больного, длительное время страдавшего хроническим алкоголизмом с поражением сердца, Ткань. брали не по,эднее 12 ч после смерти, очищали от жира и кровеносных сосудов, гомогениэировали, проводили экстракцию р-нафтолом и этиловым

14640

Формула изобретения

Способ диагностики алкогольной миокардиодистрофии путем исследования организма больного, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуют

5 спиртом при 68 С в течение 30 мин и центрифугировали при 27000 об/мин.

Супернатант многократно осаждали ацетоном и этиловым спиртом. Полученный антиген подвергали дальнейшей очистке методом колоночной гель-хроматографии на сефадексе E-200, Антиген, выделенный из пораженного алкоголем сердца, представляет собой липополисахаридопептидный комплекс без свободного липида, полученный р-нафтоловым методом, Содержание белка в нем, .определяемого по Лоури, составляет 450 38 мкг на 1 мл, В диск15 электрофорезе в 7,5% ПААГ он содержит

11 белковых зон. Значение белковых зон следующее: О; 0,02; 0,1; 0,12, 0,.26; 0,44, . 0,52", О, 7; 0,82; 0,9;

0,99.

Пример..Больной П., госпита20 лизирован в кардиологическое отделение областной больницы с диагнозом:

ИБС, атеросклеротический кардиосклероз. Врач по косвенным признакам (тремор конечностей, гиперемия лица, гипергидролиз) заподозрил алко гольную миокардиодистрофию. Венозная кровь больного в количестве 10 мл была направленаа на иммуноло гическое исследо30 вание. Иэ крови общепринятым методом готовили сыворотку, которую прогревали при 56 С в течение 30 мин, а затем адсорбировали 50%-ным формалинизированными эритроцитами из расчета

0,025 мл, 50% бараньих эритроцитов на 3б на 1 мл сыворотки. Сыворотку с эрито роцитами оставляли на 24 ч при +4 С, .затем эритроциты удаляли центрифуги= рованием. Обработанную сыворотку исследовали в РПГА на наличие антител к антигенам нормального сердца. Для этого использовали препарат фармалинизированных эритроцитов барана, которые сенсибилизировали антигенными субстанциями, выделенными иэ сердца 4Б здорового человека, погибшего от травмы. Результат этой реакЦии оказался положительным. Титр РПГА равнялся 1:32. Затем сыворотку этого больного адсорбировали антигенами 60 нормального сердца. Для этого 3 мл диагностикума нормального сердца; центрифугировали 5 мин при 6000 об/

/мин, надосадок сливали, а к осадку добавляли 1 мл сыворотки больного П., яя взбалтывали и оставляли в холодильнике на сутки. Затем сыворотку отсасывали и исследовали в РПГА с препаратом формалиниэированных эритроцитов, 87 6 сенсибилизированных антигенныь,и комплексами, выделенными из ткани сердца, пораженного атеросклерозом. Титр этой реакции оказался равным 1:64, Затем сыворотку адсорбировали антигеном атеросклероза аналогично указанному.

Сыворотку больного проверяли на пол-. ноту алсорбцни. Для этого сыворотку, адсорбированную антигенами, полученными от больного с кардиосклерозом и здорового, погибшего от травмы, исследовали последовательно в РПГА с соответствующими диагностикумами, Если титр в РПГА равен или менее 4, то приступали к следующему этапу исследования. После этого сыворотку исследова.-.и в РПГА с препаратом формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных антигенами, выделенными из сердца, пораженного алкогольной миокардиодистрофией. Титр

РПГА оказался равен 1: 28. Специфичность этой реакции подтверждали в

РТПГА с использованием антигена алкогольной миокардиодистрофии. Реакции ставили в двух параллельных рядах полистироловой пластины. Сыворотку титровали в обоих рядах, после чего. в лунки первого ряда добавляли по одной капле цитрата, в лунки второго ряда по одной капле антигена (из расчета 3 мкг по белку в 0,025 мл антигена), Пластину оставляли на 30 мин при 3? С, а затем в каждую лунку обоих рядов добавляли .диагностикум алкогольной миокардиодистрофии.

Учет реакции вели через 3 ч. Титр в РПГА оказался равен 1: 128, титр в РТПГА 1:32, Уменьшение титра РТПГА по сравнению с титром РПГА более чем в 4 раза считается признаком специ" фичности, В результате такого исследования сыворотки крови больному П. поставили диагноз алкогольной миокардиодистрофии.

Предлагаемый способ обладает вы- сокой чувствительностью и специфичностью, позволяющей с выоской степенью достоверности (89,2%) диагнос,тировать у больных поражение сердца алкогольной этиологии.

1464087 с

Составитель Г, Крюкова

Редактор И.Горная Техред М .Дидык Корректор С.Черни

Заказ 819/48 Тираж 788 Подписное

ВНИИПК Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина,101 сыворотку крови путем адсорбции ее антигенами сердечной ткани, полученной -от здорового лица и больного атеросклерозом, далее определяют антитела к ткани миокарда, полученного от.больных миокардиодистро4ией в реакции пассивной гемагглютйнации и в реакции торможения пассивной гемагглвтинации, сравнивают титры антител и при наличии различий показателей в 4 и более раз диагностируют алкогольную миокардиодистрофию,