Способ определения формы холерных вибрионов

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

C12Q1 - Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы (устройства для измерения или испытания при работе с ферментами или микроорганизмами, например счетчики колоний C12M 1/34); составы для них; способы получения подобных составов

Изобретение относится к микробиологин. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. В бактериальную взвесь добавляют тритон Х-100, глиоксилат, ацетил-коэнэим А, перемешивают и после инкубирования вводят основной фенилгндраянн. После кипячения и охлаждения н смесь добавляют соляную кислоту и красную кровяную соль. Но интенсивности окраски можно определить формы холерных вибрионов в течение 30 мин. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

OC APOTE1EHH é HOMHTET

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННт Оса (46) 23. 09. 90. Бюл. Р 35 (21) 4187785/28-14 (22) 18, 11. 86 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Л.А.Голубкова, Л.Е.Асеева, Ю.И.Ломов, И.М.Фоменко и Б.Д.Рублев (53) 612.015(088.8) (56) Механизмы и диапазон изменчивости холерных вибрионов, Ростов-на-До" ну, 1981 с. 166-167.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к методам диагностики холеры.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Цель достигается тем, что дифференциацию измененных форм холерных вибрионов проводят по определению активности фермента малат-синтазы (К.Ф.

4.1 ° 3.2).

Способ осуществляют следующим образом.

Иэ. колоний клеток отбирают 2 петли материала (что соответствует 5 млрд. микробных клеток) и готовят взвесь в .0,2 мл буферного раствора (трис-НС1, рН 7,4), добавляют последовательно растворы компонентов с таким расчетом, чтобы в конечном объеме 1 мл содержалось: 5 млрд. микробных клеток, 0,05-0,3 мкмоль глиоксилата, 0,2

0,3 мкмоль ацетил-КоА, после 15-30Р минутного икубирования при 37 СвЂ”

5-15 мкмоль основного фенилгидраэина, после доведения до кипения на водя„„Я0„„1475336 А 1 (51) 5 G 01 N 33/48 C 12 1 00 (54) С!!ОСОБ ОПРЕДЕ1!ЕНИЯ ФОР!1Ы ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ (57) Изобретение относится к микробиологии. Цель изобретения вЂ” ускорение и упрощение способа. В бактериалъную взвесь добавляют тритон X-100, глиоксилат, ацетил-коэнэим А, перемешивают и после инкубирования вводят основной фенилгидразин. После кипячения и охлаждения в смесь добавляют соляную кислоту и красную кровяную соль. По интенсивности окраски можно определить формы холерных вибрионов в течение 30 мин. 1 табл.

2 ной бане и охлаждения до комнатной температуры вЂ” 0,25 вЂ” 1,0 ммоль соляной кислоты и 4-16 мкмоль красной кровяной соли К >(Fe(CN) ). Учет результатов (см. таблицу) проводят через 1-2 мин по интенсивности окраски.

П р.и м е р 1. Иэ подозрительных колоний отбирают 2 петли материала (соответствует 5 млрд, микробных кле- р ток и в 0,2-0, 4 мл буферного раствора (например: 0,2 М трис-НС1, рН 7,4) приготавливают бактериальную взвесь.

Рабочие растворы приливаемых ингредиентов готовят с таким расчетом, .чтобы в конечном объеме 1 мл содержались следующие количества компонентов, добавляемые в указанной последовательности: 5 млрд. микробных кле- а ток, 0,5 мг тритона Х-100, 0,05 мкмоль глиоксилата, 0,2 мкмоль ацетилVoA, после тщательного перемешивания и 15-минутного инкубирования при 37 С (минимальное время, необходимое для конденсации ацетил-КсА с глиоксилатом) вЂ” 5 мкмоль основного фенилгидра1475336 зина, после доведения до кипения на водяной бане и охлаждения до комнат- ной температуры - 0,25 ммоль соляной кислоты и 4 мкмоль красной кро-: вяной соли Kg(Pe(CN}e j. 11ри использоC 5 ванг и данных концентраций предлагае" мой смеси через 1-2 мин у гладких

S-форм холерных вибрионов окраска отсутствовала, К-формы окрашивались в. бледно-розовый цвет, а у Л-форм наблюдалось красное окрашивание, свидетельствующее об образовании фенилгицраэона:глиоксиловой кислоты.

Пример 2. Иэ подозрительных колоний отбирают 2 петли материала (соответствует 5 млрд. микробных клеток) и в 0,2 " 0,4 мл буферного растнора (например, 0,15 М ХЕПЕС; рН 7,4) приготавливают бактериальную взвесь.

Рабочие растворы приливаемых ингре" диентов готовят с расчетом, чтобы в, конечном объеме 1 мл содержались следующие количества компонентов, добавляемые в указанной последова-". тельности: 5 млрд. микробных клеток,.

1,0 мг тритона Х"100, 0,2 мкмоль глиоксилата, 0,25 мкмоль ацетил-. КоА, после перемешивания н 30-минутного с инкубирования при 37 С (максимальное время, необходимое для конденсации ацетил-КоА с глиоксилатом) - 10 мк моль основного фенилгидраэина, после кипячения на водяной бане и охлажде ння до комнатной температурывЂ”

0,5 ммоль соляной кислоты и 8 мкмоль красной кровяной соли. Учет резуль" татов проводят через 1-2 мин. У гладких S-форм окраска не развивается, что говорит о наличии у них фермента малатсинтазы. Проба с Л-трансформиро40 ванными клетками мгновенно окрашивается в красный цвет, а проба с К-формами вЂ” в розовый цвет,, что свидетельствует о6 отсутствии фермента малатсинтазы у Л-форм и ггизкой его актив45 ности у R-форм холерных вибрионов.

П р и и е р 3. Из подозрительных колоний отбирают 2 петли материала (соответствует 5 млрд. микробных клеток) и в 0,2"0,4 мл буферного раствора (например, О, 1 М МОПС; рН 7,4) приготавливают бактериальную взвесь.

Рабочие растворы приливаемых ингредиентов выбирают с расчетом, чтобы в конечном объеме 1 мл содержались сле" дующие количества компонен1ов, добавляемые в указанной последовательности: 5 млрд. микробных клеток, 1,5 мг тритона Х-100, 0,3 мкмоль глиоксилата, 0,3 мкмоль ацетил-КоА, после перемешивания и 15-минутного инкубирования прн 37 С вЂ” 15 мкмоль основного фенилгидразина, после кипячения на водяной бане и охлаждения до комнатной температуры вЂ” 1,0 ммоль соляной кислоты и 16 мкмоль красной кровяной соли, 1

При учете результатов через 12 мин у гладких S-форм окраска не появляется, в связи с тем, что образуется малат, который не дает цветного комплекса с фенилгидразнном н

KqlFe(CN) ). У К-форм мгновенно появляется малиновая окраска, а .у Л-форм холерных вибрионов окрашиваются в ярко-красный цвет, что свидетельствует об образовании фепилгидраэона глиоKcHJIoBoй кислоты °

Способ. позволяет в течение 30 мин (по сравнению с 3 сутками в прототипе) определять формы холерных вибрионов.

Ф о р и у ë а и з о б р е т е н и я !

Способ определения формы холернггх вибрионов путем приготовления взвеси клеток исследуемых вибрионов и обра" ботки ее реагентами с .последующей регистрацией результата прошедшей реакции, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, взвесь содержит 5 млрд. микробных клеток, а обработку проводят 0,5-1,5 мг тритона Х-100, 0,050,3 мкмоль глиоксилата, О,?"0,3 мкмоль. ацетил-коэнэима А rr течение 1530 мин, затем добавляют 5-15 мкмоль основного фенилгидраэина, смесь донодят до кипения, охлаждают, добавляют к ней 0,25-1 моль соляной кислоты и 4"16 мкмоль красной кровяной соли и прн сохранении исходной окраски смеси огределяют S-форму, ярко-красном окрашивании смеси Л-форму, розогor окрашиванин К-форму.

147533б и 5

Х! о iO C аф

1! о5

» IC аф х

О ф

1 о ф Ik а ф

М й

1 о о ф

A и

» Ф а»

1 ф М о а» !

» 11!

»» ф». м

O В н ю» !»!

O Ю\

1»

Ю х х к

v а

3! о

1 1 о

egeg

Й»3,»

1 о

cpm

Л х аа

1 о

0» Ф

1 1 о

4I I юъ М ! л2 да к о о фй Ф Ф оаэи ЮЖ

1 о v к В» аале сикх! 1 о v !! ф М

oахф

Т"

cs! о v к»к о.ае к х

1 1 о и ааф

1К К

1 о о о.а»

1х 3с х

Способ определения формы холерных вибрионов

Изобретение относится к медицине, касается определения токсичности плазмы крови больных

Способ диагностики рака // 1475332

Изобретение относится к медицине , касается методов лабораторной диагностики рака

Способ цитологического определения активности миелопероксидазы в крови // 1474512

Изобретение относится к медицине

Способ получения распластанных мейотических клеток для ультраструктурного анализа мейоза на уровне синаптонемных комплексов // 1472830

Изобретение относится к цитогенетике , в частности, к технике приготовления препаратов мейотических клеток для ультраструктурного анализа, и может быть использовано как для фундаментальных исследований мейоза, так и для решения задач прикладной цитогенетики (выявление различных нарушений синапсиса хромосом, транслокаций и других хромосомных аномалий, невидимых в световом микроскопе)

Способ определения диклофенака натрия в биологической жидкости // 1471131

Изобретение относится к методам определения вольтарена в биологических жидкостях

Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в крови // 1471130

Изобретение относится к медицине, в частности, к способам определения продуктов перекисного окисления липидов в крови

Способ диагностики хронической почечной недостаточности // 1471129

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лабораторной диагностики стадий хронической почечной недостаточности

Способ диагностики тяжести повреждения плечевого сустава при привычном вывихе плеча // 1471128

Изобретение относится к области медицины, в частности, к ортопедии и травматологии

Способ определения этиологии экссудативного плеврита // 1471127

Изобретение относится к области медицины ,в частности, к пульмологии

Способ исследования организованного осадка мочи // 1471107

Изобретение относится к медицине, а именно к способам микроскопического анализа мочи, и может быть использовано в нефрологии, урологии, гинекологии, педиатрии

Способ получения биокатализатора для определения концентрации глюкозы // 1475151

Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе // 1472509

Изобретение относится к способам определения содержания алифатических альдегидов в растворах и может быть применено в сельском хозяйстве, медицине, аналитической химии, биохимии

Способ определения активаторов плазминогена // 1472508

Изобретение относится к прикладной биохимии и может быть использовано в производстве препаратов активаторов плазминогена, а также при лабораторном изучении состояния гемостаза и фибринолиза

Способ определения контаминации производственных бактериальных культур // 1472507

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для определения чистоты бактериальных культур, выращиваемых в промышленных условиях

Реагент для определения ацетатазы, цитратазы и малонатазы микробов // 1472506

Изобретение относится к микробиологии, а именно к реагентам для определения ферментативной активности микробов

Питательная среда для выделения комплекса тионовых бактерий // 1472494

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается питательных сред для выделения геохимически активных комплексов тионовых бактерий, используемых для выщелачивания и вскрытия золота из золотосодержащего сырья

Способ спектрального определения активности пептидаз // 1470766

Изобретение относится к анализу пептидаз по флюоресценции продуктов реакции

Способ подготовки бактерий для электронно-микроскопического исследования // 1465740

Изобретение относится к микробиологии , в частности к методам электронной микроскопии бактерий.

Способ определения биологической активности почвы // 1458390

Изобретение относится к области агробиологии, преимущественно сельс кохозяйственной и почвенной микробио ,логии

Способ определения жизнеспособности микроорганизмов // 1458389

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к технике бактериологического анализа

Способ неинвазивной диагностики хеликобактериоза ин виво // 2100010

Изобретение относится к области медицинских технологий: неинвазивной атравматичной диагностике гастродуоденальных заболеваний, вызываемых бактериями Helicobacter pylori, далее по тексту хеликобактер