Способ получения распластанных мейотических клеток для ультраструктурного анализа мейоза на уровне синаптонемных комплексов

 

Изобретение относится к цитогенетике , в частности, к технике приготовления препаратов мейотических клеток для ультраструктурного анализа, и может быть использовано как для фундаментальных исследований мейоза, так и для решения задач прикладной цитогенетики (выявление различных нарушений синапсиса хромосом, транслокаций и других хромосомных аномалий, невидимых в световом микроскопе). Целью изобретения является упрощение способа получения распластанных мейоцитов для ультраструктурного анализа мейоза на уровне синаптонемных комплексов (СК) и увеличение числа получаемых на одном препарате клеток, пригодных для анализа СК. Предложенный способ предусматривает приготовление суспензии мейоцитов в гипотоническом растворе сахарозы, нанесение этой суспензии на предметное стекло, которое покрыто нитроцеллюлозной пленкой, смоченной раствором фиколла, высушивание препарата на воздухе, фиксацию параформальдегидом, окрашивание клеток спиртовым раствором фосфорновольфрамовой кислоты и перенос пленки на электронно-микроскопические сеточки. Нанесение суспензии мейотических клеток в гипотоническом растворе непосредственно на специально подготовленную поверхность предметного стекла, а также метод подготовки этой поверхности, включающий покрытие ее нитроцеллюлозной пленкой и смачивание пленки перед нанесением клеток раствором фиколла обеспечивает упрощение отдельных процедур и сокращение их числа и позволяет получать препараты, содержащие в несколько раз больше хорошо распластанных мейоцитов с недеформированными СК, чем в случае способа-прототипа. При этом достигаемое упрощение и повышение эффективности способа не приводит к ухудшению качества препаратов. 1 з.п. ф-лы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU 1472830 А1 (51)4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (СК) и может быть использовано как для фундаментальных исследований ме-. йоза, так и для решения задач приКладной цитогенетики (выявление различных нарушений синапсиса хромосом, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4255102/ 31-13 (22) 04,05.87 (46) 15.04,89. Бюл, № 14 (71) Институт экологической генетики

АН МССР (72) С.Б.Бурд (53) 578.69 (088.8) (56) Генетика, 1985, т. XXI> ¹ 5, 793. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕ НИЯ РАСПЛАСТАННЫХ

МЕЙОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ДЛЯ УЛЬТРАСТРУКТУРНОГО АНАЛИЗА МЕР103А 11А УРОВНЕ

СИНАПТОНЕМНЫХ КОМПЛЕКСОВ (57) Изобретение относится к цитогенетике, в частности к технике приготовления препаратов мейотических кле— ток для .ультраструктурного анализа, и может быть использовано как для фундаментальных исследований мейоза, так и для решения задач прикладной цитогенетики (выявление различных нарушений синапсина хромосом, транслокаций и других хромосомных аномалий, невидиМых в световом микроскопе). Целью изобретения является упрощение способа получения распластанных мейоцитов для ультраструктурного анализа мейоза на уровне синаптонемных комплексов (СК) и увеличение числа получаемых на одном препарате

Изобретение относится к цитогенетике, в частности к технике приготовления препаратов мейотических клеток для ультраструктурного анализа мейоза на уровне синаптонемных комплексов клеток, пригодных для анализа СК, Предложенный способ предусматривает приготовление суспензии мейоцитов в гипотоническом растворе сахарозы, нанесение этой суспензии на предметное стекло, которое покрыто нитроцеллюлозной пленкой, смоченной раствором фиколла, высушивание препарата на воздухе, фиксацию параформальдегидом, окрашивание клеток спиртовым растворсм фосфорно-вольфрамовой кислоты и перенос пленки на электронномикроскопические сеточки. Нанесение суспензии мейотических клеток в гипотоническом растворе непосредственно на специально поцготовленную поверхность предметного стекла, а так О же метод подготовки этой поверхности, р включающий покрытие ее нитроцеллюлозной пленкой и смачивание пленки С перед нанесением клеток раствором фиколла обеспечивает упрощение от- ф дельных процедур и сокращение их числа и позволяет полу- ать препараты, содержащие в несколько раз больше хорошо распластанных мейоцитов с недеформированными СК, чем в случае способа-

1 прототипа, При этом достигаемое упрощение и повышение эффективности способа ©Р не приводит к ухудшению качества препа- („ ) ратов. 1 з. и. ф-лы. 1472830 транслокаций и других хромосомных аномалий, невидимых в световом микроскопе).

Целью изобретения является упрощение способа и увеличение числа полу5 чаемых на одном препарате клеток, пригодных для анализа СК.

Предложенный способ предусматривает приготовление суспензии мейоци- 10 тов в гипотоническом растворе сахарозы, нанесение этой суспензии на предметное стекло, которое покрыто . нитроцеллюлозной пленкой, смоченной раствором фиколла, высушивание пре- 15 парата на воздухе, фиксацию параформальдегидом, окрашивание клеток спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты и перенос на электронно-микроскопические сеточки. 20

В отличие от известного способа суспензию мейоцитов готовят не на физиологическом растворе, а на О, 1 М растворе сахарозы, и наносят капли гипотонического раствора. не на по- 25 верхность, а непосредственно на поверхность предметного стекла со специально подготовленной гидрофильной электронно-прозрачной пленкой, после чего препарат высушивают на воздухе. 30

Благодаря этому, во-первых, отпадает необходимость в проведении двух достаточно сложных операций (нанесения клеток на каплю гипофазы и переноса их с ее поверхности на покров-3 ное стекло), а во-вторых, появляется возможность одномоментного получения препарата с гораздо большим, чем„ в прототипе, числом пригодных для анализа СК клеток. 40

Кроме того, изобретение включает новый, более простой вариант получения и обработки электронно-прозрачной пленки: используют нитроцеллюлозное покрытие, которое перед нанесением суспензии мейоцитов смачивают 0,010,02 -ным раствором фиколла.

В целом совокупность предложенных .методических приемов в несколько раз повышает эффективность анализа и прежде всего использования предназначенного для исследования СК биологического материала.

Применение изобретения при решении задач фундаментальной и прикладной цитогенетики позволит более просто, чем в прототипе, получать качественные препараты распластанных мейоцитов, пригодные для исследования

СК, более эффективно использовать предназначенный для анализа биологический материал.

Пример. Семенники гусениц, тутового шелкопряда или домовой мыши или пыльники кукурузы препарируют s О, 1 M растворе сахарозы. Их содержание извлекают и пипетируют, а затем наносят на электронно-грозрачную пленку следующим образом.

Предметное стекло, покрытое электронно-прозрачной пленкой (для этого его погружают в 0,6Х-ный раствор нитроцеллюлозы в амилацетате, вынимают и высушивают), смачивают в растворе фиколла с концентрацией

0,01-0,02 . Избыток раствора удаляют, ! прикасаясь краем стекла к фильтровальной бумаге, На влажную поверхность пленки наносят 10-20 мкл суспензии мейоцитов, после чего стекло высушивают на воздухе. Препараты далее фиксируют 10 мин в 10 мМ боратном буфере рН 8,5, содержащем 4Х параформальдегида и 3,4 сахарозы.

Перед употреблением в раствор фиксатора добавляют додецилсульфат натрия до конечной концентрации 0,04 .

После фиксации предметные стекла промывают 15 с в 10 мМ боратном буфере рН 8, 5 и высушивают на воздухе. Распластанные мейоциты анализируют в фазово-контрастном микроскопе.

Участки пленки, содержащие мейоциты с хорошо распластанными и недеформируемыми СК, обводят острой иглой.

Препараты окрашивают 10 мин 2Х-ным раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты в 50Х-ном этаноле, промывают последовательно в 70 -ном и 95 -ном этаноле и снова высушивают на воздухе.,После нанечения дистиллированной воды на предметное стекло возле надрезов и ее проникновения под пленку вырезанные участки пленки всплывают и их переносят на электронномикроскопические сеточки.

Предложенный способ позволяет стабильно получать из 2-4 семенников гусениц 200-400 распластанных мейоцитов, пригодных для анализа мейоза на уровне СК. Способ является универсальным, поскольку он применим для исследования мейотических клеток как животного, так и растительного происхождения.

5 1472 изобретения

830

Формула

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве влажной гицрофильной электронно-прозрачной пленки используют нитроцеллюлозную пленку, смоченную в 0,01-0,027" ном растворе фиколла.

Составитель О. Скуратовская

Редактор О.Спесивых Техред М.Дидык Корректор M.Ìàêñèìèøèíåö

° »»

Заказ 1703/44 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

1. Способ получения распластанных мейотических клеток для ультраструктурного анализа мейоза на уровне

5 синаптонемных комплексов, включающий приготовление суспензии мейоцитов, их распластывание и связывание со стеклом, покрытым гидрофильной электронно-прозрачной пленкой, с последующей фиксацией и окраской клеток и перенесением пленки на электронномикроскопические сеточки, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения числа получаемых на одном препарате клеток, пригодных для анализа синаптонемных комплексов, суспензию мейоцитов готовят в гипотоническом рас-воре сахарозы, наносят ее непосредственно на предметное стекло с влажной электронно-прозрачной пленкой и перед фиксацией высушивают на воздухе.