Способ получения консерванта для эритроцитов

 

Изобретение касается способа получения консерванта для эритроцитов. Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет повышения длительности сохранения морфофункциональных свойств эритроцитов. Желатин растворяют в дистиллированной воде, затем проводят термодеструкцию при температуре 122 - 126°С и после охлаждения раствора до 50 - 60°С и подают на систему последовательно соединенных колонок с катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. Деионизированный раствор желатина выдерживают при нагревании с янтарным ангидридом, охлаждают и выдерживают под давлением, проводят повторный гидролиз в идентичных условиях до достижения мол.м. желатина 13 - 20 тыс. дальтон, гидролизат охлаждают до 50 - 60°С, добавляют гидроцитрат натрия до конечной концентрации 0,08 - 0,12% и после нейтрализации - хлорид натрия до конечной концентрации не более 0,35% и разбавляют его дистиллированной водой до концентрации желатина 8%. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения консерванта для эритроцитов. Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет повышения длительности сохранения морфофункциональных свойств эритроцитов. П р и м е р 1. В реактор загружают 4,5 кг желатина (влажность 12,6%) и 20 л дистиллированной воды для набухания и растворения желатина при 60^оС в течение 1 ч при перемешивании. Далее повышают температуру в реакторе до 122-126^оС и проводят (во избежание желатинизации раствора) предварительную термодеструкцию желатина в течение 1,5 ч при перемешивании, после чего раствор охлаждают до 50-60^оС и подают на систему последовательно соединенных колонок, заполненных на 80% объема набухшим катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. Раствор желатина пропускают через смолы при 45^оС с удельной нагрузкой 2-3 л/л смолы/ч. Деионизированный раствор собирают в промежуточную стерильную емкость, тщательно перемешивают, измеряют объем (20 л), рефрактометрически определяют концентрацию желатина (12%) и разбавляют дистиллированной водой (5,26 л) до концентрации 9,5%. Затем раствор передавливают в стерильный реактор и добавляют 0,06 кг янтарного ангидрида (0,2%). Реакционную смесь нагревают до 122^оС при 1,2 ати и гидролизуют в течение 1 ч, после чего реактор охлаждают и выдерживают под давлением около 14 ч (до утра). Повторный гидролиз проводят в идентичных условиях в течение 1,5 ч и прекращают по достижении мол.м. раствора желатина 13-20 тыс. дальтон. Затем гидролизат охлаждают до 50-60^оС, добавляют 0,6 л стерильного 5%-ного раствора двузамещенного гидроцитрата натрия до конечной концентрации 0,1% и нейтрализуют 8%-ным раствором бикарбоната натрия (2,35 л, рН 8,5) стерилизованным в негерметичных условиях при 98-102^оСв течение 15 мин. Затем в гидролизат добавляют 0,42 л 20%-ного стерильного раствора хлорида натрия до конечной концентрации 0,30% и разбавляют его дистиллированной водой (1,37 л) до концентрации желатина 8%. Регенерацию катионита проводят раствором 2 н. соляной кислоты, анионита - раствором 1н. NaOH с последующим промыванием их дистиллированной и деонизированной водой. П р и м е р 2. В реактор загружают 3,57 кг желатина (влажность 10%) и 20 л дистиллированной воды для набухания и растворения желатина при 60^оС в течение 1 ч при перемешивании. Далее повышают температуру в реакторе до 122-126^оС и проводят (во избежание желатинизации раствора) предварительную теpмодеструкцию желатина в течение 1,5 ч пи перемешивании, после чего раствор охлаждают до 50-60^оС и подают на систему последовательно соединенных колонок, заполненных на 80% объема набухшими катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. раствор желатина пропускают через смолы при 45^оС с удельной нагрузкой 2-3 л/л смолы/ч. Деионизированный раствор собирают в промежуточную стерильную емкость, тщательно перемешивают, измеряют объем (18 л), рефрактометрически определяют концентрацию желатина (12%) и разбавляют дистиллированной водой (3,29 л) до концентрации 9,5%. Затем раствор передавливают в стерильный реактор и добавляют 0,04 кг янтарного ангидрида (0,2%). Реакционную смесь нагревают до 122^оС при 1,2 ати и гидролизуют в течение 1 ч, после чего реактор охлаждают и выдерживают под давлением около 14 ч (до утра). Повторный гидролиз проводят в идентичных условиях в течение 1,5 ч и прекращают по достижении мол.м. раствора желатина 13-20 тыс.дальтон. Затем гидролизат охлаждают до 50-60^оС, добавляют 0,42 л стерильного 5%-ного раствора двузамещенного гидроцитрата натрия до конечной концентрации 0,08% и нейтрализуют 8%-ным раствором бикарбоната натрия (2,52 л, рН 8,4), стерилизованным в негерметичных условиях при 98-102^оС в течение 15 мин. Затем в гидролизат добавляют 0,35 л 20%-ного стерильного раствора хлорида натрия до конечной концентрации 0,25%, разбавляют его дистиллированной водой (0,17 л) до концентрации желатина 8%. Регенерацию катионита проводят раствором 2 н. соляной кислоты, анионита - раствором 1 н. NaOH с последующим промыванием их дистиллированной и деионизированной водой. П р и м е р 3. В реактор загружают 3,93 кг желатина (влажность 11%) и 20 л дистиллированной воды для набухания и растворения желатина при 60^оС в течение 1 ч при перемешивании. Далее повышают температуру в реакторе до 122-126^оС и проводят (во избежание желатинизации раствора) предварительную термодеструкцию желатина в течение 1,5 ч при перемешивании, после чего раствор охлаждают до 50-60^оС и подают на систему последовательно соединенных колонок, заполненных на 80% объема набухшими катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. Раствор желатина пропускают через смолы при 45^оС с удельной нагрузкой 2-3 л/л смолы/ч. Деионизированный раствор собирают в промежуточную стерильную емкость, тщательно перемешивают, измеряют объем (18,5), рефрактометрически определяют концентрацию желатина (12%) и разбавляют дистиллированной водой (2,95 л) до концентрации 9,5%. Затем раствор передавливают в стерильный реактор и добавляют 0,05 кг янтарного ангидрида (0,2%). Реакционную смесь нагревают до 122^оС при 1,2 ати и гидролизуют в течение 1 ч, после чего реактор охлаждают и выдерживают под давлением около 14 ч (до утра). Повторный гидролиз проводят в идентичных условиях в течение 1,5 ч и прекращают по достижении мол.м. раствора желатина 13-20 тыс.дальтон. Затем гидролизат охлаждают до 50-60^оС, добавляют 0,64 л стерильного 5%-ного раствора двузамещенного гидроцитрата натрия до конечной концентрации 0,12% и нейтрализуют 8% -ным раствором бикарбоната натрия (2,29 л, рН 8,3), стерилизованным в негерметичных условиях при 98-102^оС в течение 15 мин. Затем в гидролизат добавляют 0,45 л 20%-ного стерильного раствора хлорида натрия до конечной концентрации 0,35% без последующего разбавления. Регенерацию катионита проводят раствором 2 н. соляной кислоты, анионита - раствором 1 н. NaОН с последующим промыванием их дистиллированной водой и деионизированной водой. Препарат, полученный предлагаемым способом, представляет собой 8%-ный раствор модифицированного (сукцинилированного) деионизированного, частично расщепленного желатина, прозрачный, коричневато-желтого цвета, слегка пенящийся при встряхивании, со специфическим запахом, стерильный, нетоксичный, апирогенный. Препарат характеризуется следующими биохимическими показателями: Мол. м. , дальтон 13-20 тыс. Содержание общего азота, г/л 12-17 Содержание ионов, ммоль/л: натрия 120-170 хлора Не более 60 цитрата 3,0-4,6 кальция Не более 0,25 Осмолярность, мосм/кг 270-300 Цветной показатель Не более 0,2 рН 6,4-7,4 Морфологические изменения эритроцитов изучались микроскопированием нативной капли взвеси и оценивались процентным содержанием нормальных (дискоциты) и измененных (тутовые, сфероциты) форм клеток крови. Данные представлены в табл. 1. Функциональная сохранность эритроцитов оценивалась по содержанию свободного гемоглобина (бензидиновым методом), количеству осмотически неустойчивых клеток (по степени гемолиза в 0,6%-ном растворе хлорида натрия) и содержанию АТФ (энзимоспектрофотометрическим методом). Данные представлены в табл. 2. Из представленных таблиц следует, что через 21 сутки хранения соотношение нормальных (дискоидных) и измененных форм оказалось наиболее благоприятным при хранении эритроцитов в консерванте, полученном предлагаемым способом. Осмотически неустойчивые эритроциты при хранении их в предлагаемом консерванте составляют 17,5%, в то время как в известном консерванте - 56,2%.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНСЕРВАНТА ДЛЯ ЭРИТРОЦИТОВ путем термодеструкции желатина, последовательной деионизации на катионите и анионите, гидролиза, нейтрализации и стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что, с целью повышения качества целевого продукта за счет повышения длительности сохранения морфофункциональных свойств эритроцитов, перед нейтрализацией добавляют гидроцитрат натрия до конечной концентрации 0,08 - 0,12% и после нейтрализации - хлорид натрия до конечной концентрации не более 0,35%.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 18.06.2004

Извещение опубликовано: 20.08.2005        БИ: 23/2005

---