Способ получения гемоглобина
t„«с
«в««« пате;, и - -И-"-Е«
ОПИСХ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Республик
< 7211ОО .
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 090878 (21) 2652827/28-13 с присоединением заявки N9(23) Приоритет{51) м. Кл.
A 61 К 35/18
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано 150380. Бюллетень М 10
Дата опубликования описания 200380
{53) УДК 615.45!615. .961,018.51/55 (088.8) (72) Авторы изобретения
Л. Г. Богомолова, М. М, Вели кина, И.М. Быстрова и Г.Я. Гдалевский
Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА, Изобретение относится к гематологии, а именно к способу получения нативного гемоглобина.
Известен способ получения гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки и гемолиза с последующей очисткой гемолизата от балластных веществ, отделения осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина (1) .
Однако известный способ не обеспечивает дастаточной чистоты конечного продукта вследствие образования метгемоглобина и попадания в растВор фосфолипидов, повышающих прокоагулянтную активность. Кроме того, по этому способу невозможно получить концентрированный раствор гемоглобина, так как происходит заметное нарастание прокоагулянтной активности препарата .
Цель изобретения - повышение концентрации и чистоты целевого продукта.
Цель достигается тем, что очистку гемолизата от балластных веществ ведут обработкой его смесью бенто-. нита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина
2 через колонку с катионитом в натриевой форме.
Способ осуществляют следующим образом. К эритроЦитарной массе, отмытой раствором хлористого натрия, добавляют охлажденную (О + 2 С) дистиллированную воду, гемолиз ведут в течение 30-41) мин. Полученный гемолизат обрабатывают смесью бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и центрифугируют. Образовавшийся растнтзр гемоглобина пропускают через колонку с катионитом в натриевой форме.
II р и м е р. 2 л эритроцитарной массы, оставшихся после отделения стромы, смешивают с 8 л 1,6% хлорида натрия. Смесь перемешивают и содержимое вносят в сепаратор Сатурн-2, где происходит отделение эритроцитов от более легкой части (воды).
Полученный 1-1,2 л отмытых эритроцитов вливают в бутыль, содержащую
4 л охлажденной до 2оС дистиллированной воды. Гемолиэ происходит в течение 40 мин при перемешивании. В ту бутыль к 5 л гемолизата добавляют
400 r смеси бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1. Содержимое размешивают
721100
Формула изобретения
Составитель Л. Морозова
Редактор В. Трубченко Техред 3.Чужик Корректбр A. Гриценко
I аказ 26/5 . Тираж 673 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
* " Филиал ППП Патент, r, Ужгород, ул. Проектная, 4
3 прй плавном вращении ее в горизон" "тальной йаПравлейии в течение 1 ч.
После чего смесь гемолизата с сорбентом центрифугируют в центрйфуГе ЦЛР-1
s течение 30 мин при ЗООО об/мин и температуре +2 C. 3 л полученного супернатанта (раствор гемоглобина) ропускают под давлением 0,6-0,8 атм через асбестовые пластины (типа СФ) фильтра Сальникова,, затем - через колонку с катионитом Ку-2 в натриевой форме, содержащую 100 г катионита.
К фильтрату (около 3 л) добавляют
90 г порошкообразной глюкозы, рН раствора доводят до 7,2-7,4, 45 мл 10%-його гидрокарбойата натрйя (ИайСО ) .
Стерилиэуют раствор посредством фильтрации через фильтры Миллипор с диаметром пор 0,22 ммк. Фильтрат разливают во флаконы емкостью 250 или 500 мл, замораживают при теМпературе не выше -35 С и затем подвергают 20 лиофиЛиэации. Хранится препарат в сухом состоянии при О-6 С в темном.
Препарат гемоглобина, полученный предложейным способом, содержит в сред.нем в 2 раза меньше метгемоглобина g$ и обладает меньшей проиоагулянтйой активностью при большей (в 2 раза) концентрации гемоглобина в растворе.
Способ позволяет повысить выход гемоглобина, а также получить препарат его, свободный от стромы и растворимых фосфолипидов, повышающих прокоагулянтную активность, Способ получения гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки и гемолиэ,а с последующей очист-. кой гемолиэата от балластных веществ, отделения осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта, очистку гемолизата от балластных веществ ведут обработкой его смесью бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина через колонку с катионитом в натриевой форме.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Великина М.N. Получение и экспериментальное изучение гемоглобинсодержащего продукта (эригем), автореферат диссертации кандидатской.
Л., 1967, с. 18.
