Способ обработки эритроцитов

 

О П И С А Н И Е ()649434

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

R АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Зая:.лено 01.0G.76 (?1) 2365827/28-13 (51) M. Клд

А 61К 35/18 с присоединением заявки № по делам изобретений (43) Опубликовано 28.02,79. Бюллетень № 8 (53) УДК 576.8.097 (088.8) и сткрыткй (45) Дата опубликования описания 28.02.79 (72) Автор изобретения

И. Я. Мошиашви.—,и (71) Заявитель

Моске=скийл научно-исс.едовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ ЭРИТРОЦИТОВ

Гасударственный комитет (23 Приоритет

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для получения эритропптарных диагностических препаратов.

Известен способ обработки эритроцитов для получения эритроцитарных диагностикумов путем отделения эритроцитов от сыворотки крок. с последующим их отмыванием и формалинизацисй, Однако известный способ не обеспечивает высокой адсорбционной способности, высокого выхода и стабильности целевого продукта.

Целью изобретения является повышение адсорбцпонной способности, увеличение выхода и стабильности целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что в процессе отмывания эритроцитов удаляют эритроцитарную строму и сывороточные липиды путем адсорбции на инертном материале.

Кроме того, в качестве инертного материала используют целлофан.

Способ осуществляют следующим образом.

Свежие эритроциты берут из яремной вены барана в банки емкостью 800 — 1000 мл до объема 400 — 500 мл с постояппым помешиванием в теч" :iiñ 9 — 10 мин. Перед взятием крови в банки повлещают стеклянные бусы диаметром 3 — 5 мм. После получения кровь фильтруют через 1 — 4-слойные марли и отмывают на центрифуге со скоростью

2 — 2,5 тыс, об/мин в течение 10 мин 4—

5 раз 3 — 5-кратным объемом раствора № 1

5 (состав: па каждые 10 л физиологического раствора рН 7,2 добавляют 2 л 1,15 М фосфатного буфера рН 7,2 с содержанием

0,85 / МаС1) . Раствор фильтруют через стеклянный фильтр ¹ 5 и используют

10 охлажденным до 4 — 10 С. Надосадочную жидкость выливают, а отмытый осадок осторожно смешивают с остатком раствора и переливают в другой чистый центрифужный стакан. Оставшиеся на дне стакана тя15 желыс белки (серая пленка на дне стакана) удаляют раствором ¹ 1. Эту операцию повторяют несколько раз до полного отмывания эрптроцптов. Отмытые эритроциты ресуспсндируют до 50%-ной концентрации

2О раствором № 2 (раствор готовят так же, как раствор № 1, «о вместо 2 л буферного раствора добавляют 5 л).

Используемый формалин нейтрализуют

25 1 М .,".СН до рН 7,2.

Формалпнизацию эритроцптов проводят в пятиметровых стерильных банках. Отмытую р суспендпрованпую свежую кровь (50%-ную) разводят 4 раза раствором № 2 зО (заливают 2,2 л).

ЮФ

649434

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор М. Дмитриева Техрсд С. Антипенко Корректор-; Т. Добровольская и А. Степанова

Заказ 83/4 Изд. ЛЪ 190 Тнраьк 680 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 3С,-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Нейтральный (с содержанием 0,85%

NaCl) формалин в объеме 800 — 850 мл (в зависимости от процентного содержания) заливают в целлофановые мешки, которые находятся внутри банки, и герметично закрывают. Банку шуттелируют, встряхивают при 18 — 22 С в течение 16 ч. Через 2 ч банку вскрывают и образовавшуюся пену (липиды) тщательно удаляют механически.

Затем края банки протирают стерильной 10 салфеткой. Через 8 ч от начала процесса мешок прокалывают в трех местах на равном расстоянии по вертикали. Банку вновь закрывают и продолжают встряхивание в течение 6 ч. Операцию удаления липидов 15 за это время повторяют 3 раза. После этого целлофановые мешки разрывают и удаляют, а в банку помещают идентичный свежий целлофан (смоченный в растворе № 2). Операцию удаления липидов повто- 20 ряют еще 4 раза с интервалами по 2 ч и каждый раз меняют целлофан. Снятие пены и смена целлофана дают возможность полностью удалить липиды.

Шуттелирование длится всего 16 ч. Во время встряхивания целлофановый мешок сорбирует на себя липиды и тем самым исключает их попадание на поверхности субстрата.

Консервированные эритроциты фильтруют поочередно через 1 — 4-слойные марлевые стерильные фильтры и отмывают раствором № 1 в таких же условиях, как и для свежих эритроцитов. Процесс отмывания заканчивают тогда, когда надосадочная жидкость становится прозрачной и бесцветной.

Осадок стандартизируют, ресуспендируют раствором № 2 (с содержанием 0,4 /о формалина рН 7,2) и переливают в мерный цилиндр до удваивания объема осадка (судят по расходу раствора № 2 и полученного объема) или 50%-ной концентрации.

Готовый продукт разливают по 50 мл в стеклянные флаконы, герметично закрывают резиновой пробкой и хранят при

4 — 10 С.

Предлагаемый способ позволяет повысить адсорбционную способность и увеличить выход целевого продукта с 50 — 60о/о до 90 — 95% с длительным сроком годности.

1. Способ обработки эритроцитов для получения эритроцитарных диагностикумов путем отделения эритроцитов от сыворотки крови с последующим их отмыванием и формалинизацией, отличающийся тем, что, с ц ль|о повышения адсорбционной способности, увеличения выхода и стабильности целевого продукта, в процессе отмывания эритроцитов удаляют эритроцитарную строму и сывороточные липиды путем адсорбции на инертном материале.

2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве инертного материала используют целлофан.