Способ определения степени тяжести кандидоза

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в диагностике заболеваний, вызванных грибами рода CANDIDA ALBICANA. Цель изобретенияповышение точности способа. В пробах крови считают число лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов барана (Е-РОК) после предварительной инкубации с антигеном грибов CANDIDA в течение 45 мин. при 37° по сравнению с контролем (без антигена), и при увеличении количества розеткообразующих лимфоцитов определяют тяжелую степень кандидоза, а при уменьшении или сохранении их количества на уровне контроля определяют легкую степень кандидоза.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l9) (11) (511 4 С 01 N 33/53

ri . ) ь л

;А(;

". „iг,«(;

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

rlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П(НТ СССР (21) 4007549/23-14 (22) 06.01.86 (46) 30.05.89. Бюл, ¹ 20 (71) Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им. С.N.Êèðoâà (72) Н,В.Сардыко, З,О,Караев и Е.А.Голикова (53) 619.375(088.8) (56) Кашкин П,Н., Шеклаков Н.Д. Руководство по медицинской микологии.

И.: Медицина, 1978. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ КАНДИДОЗА (57) Изобретение относится к области

Изобретение относится к медицине и может .быть использовано в диагностике заболеваний, вызываемых грибами рода Candida для оценки их тяжести.

Целью изобретения является повышение точности определения степени тяжести кандидоза.

Способ осуществляют .следующим. образом.

К 4-5 мл крови, полученной пункцией локтевой вены в гепаринизированную пробирку, добавляют 1,5 мл 6Х-ного раствора желатины. Плазму с лейкоцитами центрифугируют при 300 g

10 мин. Избавляются от аутологичных эритроцитов, припивая к полученному осадку клеток 0 5 мл дистиллированной воды с последующим трехкратным отмыванием избытком раствора Хенкса при указанном режиме центрифугирования, Осадок клеток взвешивают в среде Иг2 медицины и может быть использовано в диагностике заболеваний, вызванных грибами рода Candida albicans. Цель изобретения — повышение точности способа. В пробах крови считают число лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов барана (Е-РОК) после предварительной инкубации с антигеном грибов Candida в течение 45 мин при 37 по сравнению с контролем (Ges антигена), и при увеличении количества розеткообразующих лимфоцитов определяют тяжелую степень кандидоза, а при уменьшении или сохранении их количества на уровне контроля определяют легкую степень кандидоза. <О с, С:: ла или Хенкса до концентрации 2,5

«10 кл. в 1 мл. Смешивают 0,2 мл взве- 2 си клеток с равным объемом антигена

Candida albicans в рабочей дозе, предварительно оттитрованной на крови здоровых добровольцев. Зто опытные пробы. В контрольные пробы вместо антигена добавляют соответствующий объем среды Игла или Хенкса. Все пробы инкубируют в термостате 45 мин (время, в течение которого еще не выра.батываются лимфокины, но уже происходят мембранные изменения) при 37 С о ((обычная температура для клеточных реакций у млекопитающих), После этого клетки трижды отмывают средой Д

Хенкса при 300 g по 5 мин, чтобы избавиться от антигена, и осадок взвешивают в 0,1 мл среды Игла или Хенкса. Затем к клеточной взвеси добавляют равный объем 0,4Ж-ных эритроцитов

1483374 барана на среде Хенкса, смесь выдерживают в термостате 5 мин при 37 С, центрифугируют при том же режиме и

5 затем инкубируют 1 ч при (+4) С в холодильнике. Далее добавляют 0,1 мл сыворотки человека IV (АВ) группы, осторожно пипетируют клеточную взвесь и делают мазки на предметных стеклах, После высушивания на воздухе мазки окрашивают красной Май-Грюнвальда

1 мин и 2 мин этой же краской, разведенной в два раза водой. Краску смывают водой, мазки высушивают на воздухе и под микроскопом с иммер-, 15 сией подсчитывают 200 лимфоцитов и среди них число розеткообразующих (Е-РОК), т.е. присоединивших 3 и более эритроцитов барана. Для характеристики реакции лимфоцитов на об- 20 работку антигеном высчитывают процент прироста или уменьшения количества Е-POK после инкубации с антигеном СапйЫа albicans по сравнению с контролем-пробами, не обработанными предварительно антигеном, так называемый индекс сдвига спонтанного розеткообразования (ИС) по формуле:

Š— POK в опыте — Š— РОК в контроле 3, Š— POK в контроле х 1007., Если количество Е-РОК повышается . в пробах, обработанных антигеном, по сравнению с контролем на 10 и более процентов, определяют тяжелую сте- . пень кандидоза, например, хронический кандидоз кожи и слизистых, характеризующийся тяжелым хроническим течением с частыми рецидивами, плохо поддающийся антимикотической терапии.

Если количество Е-POK после обработки проб антигеном СапйЫа albicans уменьшается или не изменяется, определяют легкую степень тяжести кандидоза, например, локализованный кандидозный вульвовагинит, хейлит и т.п. локализованные формы.

Пример 1., Больная О., 30лет поступила 12„09.85 года. Клинически при осмотре обнаружено поражение 50 слизистой оболочки рта, языка, коньюктивы,. ногтевых пластинок. Степень тяжести по этим признакам определить невозможно. Титр антител в РНГА =

1/16 (-log =4,0). Больная обследована до лечения предлагаемым способом. Количество Е-РОК в контроле 64, после обработки лимфоцитов антигеном

72,5. Следовательно, количество

Е-РОК повысилось на 197.. Поставлен диагноз: хронический кандидоэ кожи и слизистых (тяжелая степень кандидоза). Последующее наблюдение, частые рецидивы, эффективность только комплексной терапии, включающей гормоны, иммуномодуляторы, наряду с антимикотической подтвердили этот диагноз.

I1 р и и е р 2 ° Больная Х., 53 года, поступила 08,09.85. Клинически обнаружено поражение слизистой языка.

Степень тяжестки кандидоза оценить не представляется возможным и титр антител в РНГА = 1/32 (-log =5, О). До лечения больная обследована предлагаемым способом, Установлено, что количество Е-РОК,в контроле 45, после обработки антигеном 37. Следовательно, имеет место уменьшение количества

Е-РОК íà 17Х ° Определена легкая степень .кандидоза. Больная вылечена местной антимикотической терапией, рецидивов нет в течение двух лет, что подтверждает правильность определения степени тяжести кандидоза предлагаемым способом.

Пример 3. Больная Ц1., 31 год, поступила 21.12.85. Клинически обнаружено поражение слизистой влагалища и двух ногтевых пластинок. Оценить степень тяжести затруднительно по этим симптомам. Титр антител в РНГА=

1/16(-log =4, О). Больная обследована до лечения указанным способом.

Количество Е-РОК в контрольных пробах

58, после обработки лимфоцитов антигеном 59. Следовательно, количество

Е-POK практически не изменилось. Определена легкая степень тяжести кандидоза. Назначена местная антимикотическая терапия. Больная выздоровела через 23 дня, Повторно поступила через 1 год 8 мес. с признаками вульвовагинита, который при бактериологическом обследовании исключался. Однако местная антимикотическая терапия вновь привела к выздоровлению. Все это подтверждает установленную степень тяжести кандидоэа.

Предлагаемым способом обследовано 35 больных тяжелой степенью кандидоза и 31 — с легкой. Обнаружено, что данный способ позволяет в 9597% случаев точно определить степень тяжести кандидоза, в отличие от прототипа, что доказано статистической обСоставитель Г.Крюкова

Редактор Н.Горват Техред М.Дидык Корректор А.Обручар

Заказ 2822/42 Тираж 789 Подписное ке

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

5 14833 работкой результатов различными способами.

Формула изобретения

Способ определения степени тяжести кандидоза путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диаг- 1р ностики, в исследуемой крови выявляют

74 6 количество розеткообразующих лимфоцитов после обработки их антигеном Candida albicans, и при увеличении количества розеткообразующих лимфоцитов по сравнению с контролем определяют тяжелую степень кандидоза, а при уменьшении розеткообразующих лимфоцитов или сохранении их количества на уровне контроля определяют легкую степень кандидоза.