Способ получения изотиурониевых галогенидов

 

Изобретение касается производных тиомочевины ,в частности, способа получения изотиурониевых галогенидов общей формулы 1: H<SB POS="POST">2</SB>N-C(NH)-NH-C(SR<SB POS="POST">1</SB>)=N-R<SB POS="POST">2</SB><SP POS="POST">.</SP>HX, где R<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">1-6</SB>-алкил, замещенный оксигруппой, C<SB POS="POST">2-6</SB>-алкенил

R<SB POS="POST">2</SB> - H, X - галоген, обладающий противоопухолевым и иммуностимулирующим действием. Цель изобретения - создание новых более активных соединений указанного класса. Синтез ведут взаимодействием соединений общих формул П и Ш: H<SB POS="POST">2</SB>N-C(NH)-NH-C(S)-NHR<SB POS="POST">2</SB><SP POS="POST">.</SP>HX (П) и R<SB POS="POST">1</SB>HAL (Ш), где R<SB POS="POST">1</SB>, R<SB POS="POST">2</SB> и X - указаны выше

HAL - галоген. Новые соединения имеют сильное или среднее противоопухолевое и иммуностимулирующее действие при низкой токсичности (LD<SB POS="POST">50</SB>=2380-2860 мг/кг - перорально или 320 мг/кг - внутрибрюшинно), против средней активности и токсичности для известного соединения. 7 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3990052!23-04 (86) РСТ/HU 85/00022 (02.04.85) (2?) 29. 11. 85 (31) 1324/84 (32) 03.04.84 (33) HU (46) 30.07.89. Бюл. № 28 (71) Перемартони Ведьипари Валлалат (HU) (72) Чаба Вертеши, Аттила Молнар и Лайош Гуцоги (HU) (53) 547.495.2.07(088.8) (56) Патент ФРГ № 2426683, кл . С 07 С 129/16, опублик. 1979. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОТИУРОНИЕВЫХ ГАЛОГЕНИДОВ (57) Изобретение касается производных тиомочевины, в ча" òíîñòè способа получения изотнурониевых галогенидов общей формулы I: HgN-С(NH)Изобретение относится к способу получения новых иэотиурониевых галогенидов общей формулы

NH — с — МБ — с =N — и. g ÍÕ

2ЧН $-В1 где R, — С„-С6-алкил, замещенный оксигруппой, С -С;-алкенил;

R< - водород, указанные соединения обладают противоопухолевым и иммуностимулирующим действием.

Целью изобретения является разработка способа получения новых иэотиурониевых производных, которые по..SU„„1498384 Д 5 ()1)4 С 07 С 157/14 А 61 К 31/155

-NH-C(SR „) = N-R НХ, где R, — С, алкил, замещенный оксигруппой, Г алкенил; R — Н, Х вЂ” галоген, облаI дающий противоопухолевым и иммуностимулирующим действием. Цель изобретения — создание новых более активных соединений укаэанного класса.

Синтез ведут взаимодействием соединений общих формул II u III Н И-С(МН)-NH-C(S)-NHR НХ (II) и

R,Íà1 (III), где К,, R > и Х вЂ” указанный выше; На1. — галоген ° Новые соединения имеют сильное или среднее противоопухолевое и иммуностимулирующее действие при низкой токсичности (LD = 2380-2860 мг/кг—

so перорально или 320 мг/кг — внутрибрюшинно), против средней активности и токсичности для известного соединения. 7 табл. сравнению с соединениями, близкими по структуре, имеют более высокую активность.

Пример 1. Получение Иаминоиминометил-$-аллил-изотиуроний бромида .

К 50 мл безводного этанола добавляют 14,9 г (0,05 моль) карбоната

N-аминоиминометил-тиомочевины. К полученной суспензии добавляют 14,5 г (0,12 моль) бромистого аллила. Реакционную смесь медленно нагревают до кипения при энергичном перемешивании. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильнин м в течение

30 мин и охлажден г д ° комнатной температуры. См< c, и,труют для

8384

50

3 149 удаления «ыпадающего в осадок вещества. Фильтрат выпаривают под вакуумом и маслянистый остаток кристаллизуют иэ этилацетата. Выпадающие в осадок кристаллы фильтруют и высушивают при 40-50 С. Таким образом получают 19,6 r целевого соединения с выходом 82% и т. пл. 123-125 С.

Вычислено, %: С 25,10; Н 4,60;

N ?3,43; S 13,39; Br 33,47.

Найдено, %: С 25 07; Н 4 61;

N 23,48; S 13,3?; Br 33,50.

Характерные пики в ИК-спектре:

3290, 3260, 2160, 3105, 1640, 1605, 1550, 1375, 1090, 980, 910, 705, 650„

Пример 2. Получение М-аминоиминометил-S àëëèë-изотиуроний хлорида.

К 50 мл безводного этанола добавляют 14,9 r (0,05 моль) карбоната

N-аминоиминометил-тиомочевины. K полученной таким образом суспензии добавляют 9,18 r (0,12 моль) хлористого аллила и реакционную смесь медленно нагревают до кипения при энергичном перемешивании. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч и охлаждают до комнатной температуры. Смесь фильтруют для того, чтобы удалить возможное выпадающее в осадок вещество. Фильтрат выпаривают под ваку-, умом. Маслянистый остаток кристаллизуют из этилацетата. Выпадающие в осадок кристаллы отфильтровывают и высушивают при 40-50 С.

Продукт может быть перекристаллизован следующим образом„

К 60 мл смеси этанола и металона в соотношении 5:1 добавляют 10 г

N-аминоиминометил-S-аллип-иэотиуроний хлорида„ Неэначителвное количество Hpðàñòâoðèâøèõñÿ кристаллов удаляют фильтрованием горячей смеси.

Фильтрат очищают от примесей с помощью актинированного древесного угля, если это необходимо. Прозрачный фильтрат охлаждают до комнатной температуры, в результате чего выпадают в осадок белые кристаллы. Смесь охлаждают до 0-5 С, ее оставляют при этой температуре на 1 ч и фильтруют„ Кристаллы промывают с помощью этанола, охлажденного льдом и высушивают при 40-50 С. Получают

8,1 г целевого продукта с выходом

81%.. Т. пл, 123-175 С.

4

Вычислено, %: С 30,84; Н 5,66;

N 28,79; S 16,45; С1 18,25.

Найдено, %: С 30,88; Н 5>61;

N 28,78; S 16,49; С1 18-27.

Данные ИК-спектроскопии аналогичны, как и для бромида н примере 1.

Пример 3. Получение N-аминоиминометил-S (?-оксиэтил)-изотиуроний хлорида.

К 50 мл безводного этанола добавляют 14,9 г (0,05 моль) карбоната

N «миноиминометил-тиомочевины. К суси . зии добавляют 9,7 г (0,12 моль) этиленхлоргидрина и реакционную смесь медленно нагревают до кипения при энергичном перемешиванин. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником н течение 90 мин и охлаждают до комнатной температуры.

Смесь фильтруют, чтобы удалить воэможно выпадающее в осадок вещество, и прозрачный фильтрат выпаривают под вакуумом. Маслянистый остаток кристаллизуют из этилацетата. Кристаллы отфильтровывают и высушивают при

40-50 С. Таким образом получают

13,5 г целевого соединения с выходом

68% и т. пл. 134-136 С.

Аналогично получают N-аминоиминометил-S-(3-оксипропил)-изотиуроний бромид (соединение 3). Т. пл. 132135 С. Выход 35,57..

Вычислено, %: С 23,34; H 5,06;

N 21,79; 0 6,22; S 12,45; Br 31,13.

Найдено, Е: С 23,35; Н 5,04;

N 21,81; S 12,51; Br 31,20.

Характерные пики в ИК-спектроскопии следующие: 3590, 3300, 3220, 2925, 1680.

Биологическая активность соединений указанной общей формулы доказана следующими испытаниями.

Испытание специфических действий.

Иммунологические испытания, Лимфоциты. Лимфоциты отделены на

Фикол-Уромиро градиенте (Boyum 1968) из крови здоровых доноров и пациентов, страдающих опухолью лимфатических узлов (злокачественной лнмфой) и метастазирующими твердыми опухолями соответственно. При подборе пациентов, принадлежащих к последней группе, принимается во внимание цитоксичность клетки зависимого антитела (АДСС) и NK-активность. Фагоциты удалены обработкой порошкообразным железом и магнитом.

1498384

АДСС. ЛДСС определена следукщим образом, Эритроциты цыплят, меченые с

10 Сг и покрытые сывороткой кролика против .зритроцито . цыплят, инкубированы нм сте с лимфопитя и н тео чение 4 ч при !7 С. Реакпия, вызывающая прекращение активности плавающих на поверхности центрифугирован10

55 ных клеток, определена в сче тчике гамма-излучения Степень освобожденияя хрома выражена в виде индекса цитотоксичности (ИЦ, 7) . (см. табл. 1) .

NK. NK-активность определена сле- 1 дующим образом.

0пухолевые клетки К-562, меченые !Cr, инкубируют вместе с эффекторными клетками в ТС 199 жидкой питательной среде, содержащей 107 декомплементарной Calf †ñûâîðîò. Реакция, останавливающая радиоактивность плавающих на поверхности центрифугиронанных клеток (освобождение хрома), подсчитана в счетчике гаммяизлучения, Уничтожение меченых клеток (ИУ, 7) выражено в виде различия испытуемого освобождения и спонтанного освобождения хрома.

Статистические вычисления проведены посредством испытания с одним образцом. Соединения 1, 2 проявляют значительное иммуностимулирующее действие, Укаэанные соединения способны значительно увеличивать нормальную и сильно пониженную ИК- и К-клеточную активность, даже выше нормального уровня. Указанное действие может быть настолько сильным, что цитотоксическая активность, пониженная до 1/10 первоначального значения, может быть восстановлена до первоначального уровня (табл. 2), В пределе дозы, соответствующей ожидаемой концентрации плазмы человека, соединения увеличивают NKи К-клеточную активность лимфоцитов человека и повышают цитотоксичность природной клетки посредника (NCMC-) и АДСС-реакцию соответственно со скоростью, зависящей от дозы. Согласно предварительным результатам дополнительных иммунологических испытаний соединения увеличивают бластопреобраэонание и миграцию.

Миграция лейкоцитов.

Спонтанная миграция лейкоцитов измерена на микрокяплях агарозы.

2 мл капель ягяроэы (0,27) помещают ня пластины для миграции. Добавляю-. ТС 199 жидкую питяте;»ную среду и плотно закрывают пластины для доступа воздуха. После 24 ч изменяют площадь миграции (мм ) с помощью стереомикроскопя.

Миграция лейкоцитов.

Беспорядочная миграция полиморфонуклеарных клеток здоровых доноров увеличена с помощью соединений, полученных согласно примерам 1, 2. Оптимальная доза достигает 1,0 р г/мл.

При более высокой дозе (10р г/мл) действие менее ныражено.

В табл. 3 представлено in vitro действие на направленную(беспорядочную) миграцию полиморфонуклеарных лейкоцитов человека.

Бластопреобразование, индуцируемое митогеном.

Лимфоциты выращивают н ТС 199 жидкой питательной среде, содержащей 107 декомплементарной calf-сыворотки, антибиотики и 25 мН НЕРЕS (Serva). 200 1чл клеточной суспензии, содержащей 2-10 лимфоцитон, наносят на микропластину, пят:- параллельных опытон проводят каждый раэ.

К культурам добавляют 2 и

10 р г/мл соответстненно фитогемагглютинина (лейкоагглютинин) и

25 !ц г/мл конканавялиня А (carbio

chem); указанные величины относятся к конечной концентрации. Культуры выращивают при 37 С н течение 72 ч, За 8 ч до окончания конца периода выращивания к образцам добавляют

0,5 р Ci3 H-тимидина и завершают замораживание культур. После расплавления образцы фильтруют на автоматической сборочной машине (Dyuatech), Радиоактивность образцов измерена в сцинтилляционном счетчике. Активность выражена в виде с.р.м, (табл. 4 и 5) . В табл. 4 и 5 представлено in vitro действие на бластопреобраэование лимфопитон человека, стимулируемое с помощью фитогемагглютинина (PHA) и конканавялина А (ConA), Статистический анализ.

Важность определена с помощью испытания 2Т2 с одним образцом, Результаты, полученные с продуктом реакции из примера 1, представлены в табл. 1 — 3.

1498384

Отсутствует

Среднее

Сильное (ингибирование) Повышение иммунной системы организма оценено на основе количества и активности нейтрофильных гранулоцитов, лимфоцитов и макрофагов, появляющихся среди асцитных опухолевых клеток и принимающих участие н имФ мунной системе, Активность иммунной системы проявляется также по скорости, при которой указанные клетки в асците образуют плазма-мостиконую связь с опухолевыми клетками, Согласно этой оценке, если отсутствует различие по числу и актинности указанных клеток, то можно заявить, что

50 отсутствует повышение над контролем.

Среднее действие наблюдается, если повьппение числа клеток или активнос— ти над контролем достигает до 20%.

Действие является сильным, если псньппение числа клеток и активности иммунной системы составляет более

207. контроля (табл. 7).

Предварительное быстрое испытание для определения протиноопухолевого иммуностимулирующего действия.

Мыши-самцы вида CFLP (средний

5 ж вой нес 30 г) ннутрибрюшинно заражены 4 млн клеток асцитной лимфомы.

При испытании использованы те животные, у которых на четвертый день

i бразоналась легко наблюдаемая опухоль, т„е. асцит. В каждой группе использованы по крайней мере десять животных, и мьппи были орально обработаны 1/10 величины 1.П

Спустя 24 ч после оральной обработки оценены результаты посредством окрашенного асцитного мазка (посева) Гиемса на основе цитологического анализа. Как и н обработанной группе, в контрольной группе использовано то же количество животных. Оценены повреждения опухолевых клеток, активация организма и возможные токсические действия (табл. 6). 25

При оценке противоопухолевого действия оценено процентное соотношение уничтоженных и неповрежденных опухоленых клеток. Результаты выражены по следующей шкале: 30

Уничтожение опу- Действие холеных клеток, 7

0-30

30-70

70-100

Токсичность определена путем оценки морфологических изменений гранулоцитов и лимфоцитов, васкулязации плазмы, фрагментации клеточного ядра, образования полисегментов и токсической грануляции,, Токсичность выражена по следующей шкале:

Наблюдаемые результаты Токсичность

Отсутствуют указанные изменения Отсутствует н имеющихся клетках 207-ное изСредняя менение

Изменение превышает 207 Высокая.

Испытание противоопухолевого действия.

In vitro.

К-562 клетки человеческой эритролейкемии и Р-388 клеточные культуры лимфомы мьппи обработаны с 1100ы г/мл испытуемого материала.

In vivo.

А. NK-ly-асцитная лимфома.

1 млн клеток асцитной лимфомы

Немет-Келнера внутрибрюшинно трансплантированы в 20 мьппей-самцов нида

OFLP (средний живой вес 30 г) (новая асцитная опухоль мьппи использована в качестве средства для скрининга). Половина животных служила н качестве контроля, а другая обработана с 1/10 величины LD y различных соединений перорально и внутрибрюшинно н первый и пятый последовательные дни соответственно.

Если 1/10 величины LD эффективна, была использована более низкая доза, В группе, подвергнутой одной обработке, цитоморфологическое определение асцитного мазка проведено после 24 ч и сделано соотношение поврежденных и уничтоженных клеток соответственно. В группах, обработанных в течение 5 дней, определен процент ныживания, Б. Е, onóõîëü.

0 клеток 1-12„опухоли трансплантиронаны внутрибрюшинно в 20 мьппейсамок вида ЛДУ, весом 20 r, Обработка начата спустя 24 ч после трансплантации опухоли и продолжена в течение 8 дней. Каждая группа состоит из 5 животных; доза 5, 50 и

500 мг/кг перорально ежедневно. Контрольная группа также состоит из 5

1498384

10 животных„ Определен процент выживания.

В. Длинная опухоль Люиса, В каждой группе использованы 6 животных. Доза; 5 и 50 мг/кг, Контроль5 ная группа также состоит из 6 животных. В испытании использованы мыши-самки вида С В1 (нес ?О г).

Опухоль подкожно трансплантирована в мышцу правой ноги. После

10 дней нога ампутирована, оральная обработка начата и продолжалась в течение 9 дней. Животные умерщвлены и метастазы подсчитывались под сте10 реомикроскопом.

Г. Собаки, принадлежащие к различным видам и имеющие спонтанную опухоль молочной железы (auctus СС), обработаны в течение 4 недель с

1 — 10 мг/кг оральными дозами испытуемых материалов. Осуществлено вырезание для испытания образцов тканей, для гистологического анализа °

Соединение согласно примеру 1 проявляет значительное противоопухолевое действие, так как ингибирует клетки человеческой эритролейкемии

К-562 в тканевой культуре при концентрации 4 р г/мл. Кроме того, это

30 соединение ингибирует распространение Р-388 клеток только при концентрации 40 г/мл, а когда увеличивают концентрацию до 400 р г/мл, активность не повьппается.

Указанное соединение значительно уменьшает количество метастаэов легких в длинной опухоли льюиса при дозе более низкой, чем 1/10 величины 1Л

Выявлено, что действие может быть усилено до значитольного большей степени путем повторения обработки, нежели увеличением дозы.

Соединение по примеру 1 является

45 активным против NK-ly-асцитной опухоли при концентрации ниже 1/10 величины 1.0 . Это соединение проявляет о иммуностимулирующее действие при малых дозах, при более высоких дозах показывает направленное противоопухолевое действие. Так, соединение проявляет иммуностимулирующее действие при дозах ?5 мг/кг и является цитотоксичным при пределе доэ 250500 мг/кг. Оно высокоактивно против спонтанной опухоли молочной железы у собак. При биопсии, взятой после обработки, проведенной в течение 34 недель, клеточная инфильтрация инваэивного характера обнаружена в опухолях (ductus СС), состоящих из лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов, макрофагов и эпизодически эозинофильных гранулоцитов. На опухолевых клетках обнаружены дегенеративные изменения и сильная декомпозиция.

NK-клетки образуют плазма-мостиковые связи с опухолевыми клетками и это вызывает вауколярную дегенерацию (вырождение) плазмы опухолевых клеток и большое прореживание в DNS расположении клеточного ядра, Соотношение клеточное ядро — плазма изменяется, клеточное ядро сильно набухает и баэофильность — способность клеток воспринимать только основные красящие вещества плазмы — уменьшается.

Примерно в 1/4 случаях лейкоцитная инфильтрация в опухоли является незначительной; с другой стороны, опухолевые клетки набухают и гиалиниально дегенерируют. В межклеточном пространстве отлагается весьма большое количество гиалиноокрашенного материала.

При оральном приеме соединения примера 1 при ежедневной дозе 30120 мг (0,5 — 2 MI"/Kr) в течение

6-12 мес отмечено значительное улучшение состояния или выздоровление в случае метастаэов, опухолей молочной железы, опухолей половой железы женщины и опухолей поджелудочной железы человека.

Испытание противоопухолевого действия в сочетаниях

Сочетание с известными цитостатическими веществами.

Различные цитостатические вещества, имеющие биологическое алкилирующее действие, введены вместе с полученными соединениями мьппам вида

CFLP, имеющим NK-ly-асцитную опухоль. Цитостатические вещества были введены орально, внутрибрюшинно или внутривенно при доэе, соответствующей 1/5 или 1/10 величины LD o или в наиболее эффективной дозировке.

Полученные соединения введены орально при дозе 1/10 или l/20 величины

LD< один или несколько раз спустя

48 ч после обработки цитостатическим веществом. Таким образом введены сочетания циклс>фосфамида, карно12! 1 1498384 мустина, дегранола, дибромдульцита Формула и дибромманита, и соединение примера 1. По сравнению с контрольной группой, обработанной только извест5 ным цитостатическим веществом, противоопухоленое действие усиливается, а иммунодепрессия уменьшается.

Сочетание с известными витаминами.

Изотиурониевые галогениды могут быть скомбинированы со средними дозами витаминов А и D и с высокими дозами витамина С. Хорошие результаты получены как при фармакологических испытаниях, так и при клинических случаях на людях.

Сочетание с известными гормонаизобретения

NH — С-NH — С=)) — R НХ, 1 !

NH S-R „ ми.

При обработке опухолей, зависимых от гормонов, сочетание, как было доказано, является полезным как при фармакологических испытаниях, так и при клинических случаях на

R Hal

Действие на АДСС, средние значения

+ S F. ИЦ, 7, при обработке соединением 1 (мол. вес. 194,7) дозой, моль

Группа (количество случаев) Контроль

6,7 10

6,7 «10 з 6,7x)0

68,245,3

Нормальная АДСС (10) 42,0 5,0 58,5+5,2

64 5,8,.

+52X

7,7 1,9

+39X

+62X

10,212,7

2e8i0,8

6,35 1,7

Пониженная АДСС (!О) +) 267

+175X

+2647

П р и м е ч а н и е. Соотношение зффекторные клетки: меченые клетки = 5:1. Инкубационный период 4 ч, Важные (р (0,05) людях.

Использование в хирургии.

Полученные соединения использованы при фармакологических испытаниях в случае твердых опухолей до и после хирургической обработки (NK-ly твердая, Йоисда).

Способ получения изотиурониевых галогенидов общей формулы где R — С, -С -алкил, замещенный оксигруппой, С>-С -алкенил;

R Z — водород;

Х вЂ” галоген, отличающийся тем, что соединение общей формулы где R < и Х имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

3р где R, имеет указанные значения.

Таблица ) 13

l4

Таблица 2

)498384

Группа (количество случаев) Контроль

Нормальная NK

32,9+2,5 41 12,9

+25X

43,4+ 2,7 47,6 ),4 (8) +32%

2)96ФЗЭО

+43X

Пониженная NK

)5,)t2,4

25,3+3,2

+68X

П р и м е ч а н и е. Соотношение зффекторные клетки: меченые клетки = 50:1. Инкубационный период 4 ч.

"Важные (р с 0,05) Таблица 3

Контроль

1О,О

0,1

1,0

10,02+1,65

П р и м е ч а н и е. Средние значения от семи здоровых контрольных доноров: + S.Е.М.

«Не важные

Важные (р (О, 01)

Важные (р (О, 05)

Таблица 4

Контроль

Митогенный реагент, рг/мл

),0 10,0

О,) 29959+4051

10545+3414

П р и м е ч а н и е. Здоровые контрольные пациенты нормальной реактивности; n = --6.

PHA 2

РНА,10

СопА, 25

Действие на NK-активность, средние значения +S Е., ИЦ, X при обработке соединением I (мол.вес: 194,7) дозой, моль/мл

6у7Ф)0- 617л)0 6у7 м)0 C

+45X

32,2+3,2 *

+) )33

Площадь миграции, мм, при дозе соединения ), 2 и /-

10 5111 22 12 25+1 58 11124+1169 »

Активность, средние значения с.р.м.

t S.Е.М. при дозе, г/мл

21166+3774 22233г3688 23156>2737 2540412860,-29969 t3557 33826+3638 3379025203

1056443764 )4089f.2602 17038+3202

1498384

Табл ила 5

Митогенный реагент, (д г/мл

Контроль

Активность, средние значения с.р.M

+ S.Е.М. при дозе, г/мл

0,1

1,0

10,0

Соединение

РНА, 2

4344 1153 .4716i1287

П р и м е ч а н и е. Пациенты пониженной реактивности (опухоль и Б?Е); n = 6.

Таблица 6 ко МГ/14 динения

Перорально Внутрибрюшинно

2380+320

2860tl 80

320+30

Таблица 7

Иммуности- Токсичесмулирующее кое дейдействие ствие

Противоопухолевые действия

Соединения

1 Сильное

3 Среднее

Известное

Сильное

Среднее н

М

Соединение формулы где R 1 — СН, R — Н

Составитель М. Меркулова

Техред Я.яндык Корректор М. Максимишинец

Редактор О. Спесивых

Заказ 4463/58

Тираж 352

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

РНА, 10

СопА, 25

3034+1293

5267t1392

804+307

28771984

5802+1504

1097+354

6323+1161

935+363

0

Среднее

6968+1669

1023+ 361