Способ получения средства,обладающего иммуностимулирующей активностью
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, .ОБЛАДАЮЩЕГО ИММУНОСТИМУЛИРУЮВЩЙ АКТИВНОСТЬЮ, включающий гомогенизацию животного сырья, его экстракцию неограническим растворителем, очистку и выделение целевого продукта из супернатанта и диализ против дистиллированной воды, отличающийс я тем, что, с целью повышения иммуностимулирующей активности целевого продукта и расширения сырьевой базы, в качестве сырья используют мантию брюхоногого моллюска Stromtous gigas, экстракхшю проводят 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты при соотнсхиении 1:5, а обработку i супернатанта - койцентрйрованным раствором щелочи . (Л
0% (И) i
СОЮЗ СОВЕТСНИХ соцИАлистичесн их
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ н втд сном свидетельств
ggQj@c
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
1(21) 3580458/28-13 (22) 14.12.82 (46) 23.06.84. Бюл. Р 23 (72) Р.Г.Оводова, В.И.Молчанова, Ю.С.Оводов, Н.Н.Беседнова, Т.A.Kóçíåöoâà и Идалия Перера Гарсия (Куба) (71) Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного научного центра AH СССР и Научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения АМН СССР (53) 615.361(088.8) (56 ) 1. Авторское свидетельство СССР
В 906071, кл. A 61 К 35/56, 1981.
2. Авторское свидетельство СССР
Р 703926, кл. A 61 К 31/715, 1979..(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА,) ,ОБЛАДИОЩЕГО ИММУНОСТИМУЛИРУВЩЕИ
АКТИБНОСТЫ0, включающий гомогенизацию животного сырья, его экстракцию неограническим растворителем, очистку и выделение целевого продукта из супернатанта и диализ против дистиллированной воды, о т.л и ч а ю щ и йс я тем, что, .с целью повышения иммуностимулирукщей активности целевого продукта и расширения сырьевой базы,- в качестве сырья используют мантию брюхоногого моллюска Strombus
gigas, экстракцию проводят 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты при соотношении 1:5, а обработку супернатанта — койцентрированным раствором щелочи..
1098551
ВНИНПИ Заказ 4275/1 Тираж 688 Подписное
Филиал НП "Патент", r. Ужгород, ул.Проектная, 4
Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения биологически активных препаратов из животного сырья,в частности из морских беспозвоночных. 5
Известен способ получения углевод-белкового соединения, обладающего иммуностимулирующей активностью, иэ мягкого коралла pseudoptегоgorgia
americana путем гомогенизации ткани, 30 экстракции раствором хлористого натрия, осаждения высокомолекулярной фракции 96%-ным этиловым спиртом, диализа и лиофилизации (1 3.
Наиболее близким к изобретению является. способ получения средства, обладающего имеуностимулирующей активностью, заключающийся в том, что мантию мидии Crenomytilus grayanus экстрагируют раствором хлористого натрия, осадок удаляют и надосадочную жидкость обрабатывают смесью хлороформ-бутанол. Выпавший осадок денатурированного белка удаляют центрнфугированием, затем врдную фазу отделяют от органической и к водному раствору добавляют этиловый спирт ° Выпавший осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде и диалиэуют. Диалиэованный раствор концентрируют в вакууме и 30 лиофилиэуют. Получают препарат (митилан) в вйде белоснежного порошка,. выход 3% от сырого веса исходного материала. митилан содержит в своем составе полисахаридную 35 (90%) и белковую компоненты. Полисахаридная часть представляет собой разветвленный D --глюкан (23.
Однако известные способы не обес- 40 печивают получение препарата с достаточно высокой иммуностимулирующей активностью.
Целью изобретения является получение средства с более высокой иммуно- 45 стимулирующей активностью и расширение сырьевой базы.
Поставленная, цель достигается тем, что при способе получения средства, обладающего иммуностимулирующей активностью, включающем 50 гомогениэацию животного сырья, его экстракцию неорганическим растворителем, очистку и выделение. целевого продукта из супернатанта и диализ. против дистиллированной воды, в ка- 55 честве сырья используют мантию брюхонсгого моллюска Strombus gigas, экстракцию проводят 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты при соотношении 1:5, а обработку супернатанта - концентрированным раствором щелочи.
П р и и е р. 100 r мантии свежесобранного моллюска Gtrombus gigas измельчают, добавляют 50 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, полученную смесь гомогенизируют в течение 10 мин при +4 С, добавляют
5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты до 500 мл (исходное сырье: эксстрагент = 1:5), для экстракции смесь оставляют при периодическом перемешивании на 6-10 ч при +4ОС, затем центрифугируют при 3 тыс.об/мин в течение 30 мин, нерастворившийся материал отбрасывают, а супернатант осторожно нейтрализуют (до рН 7,6) добавлением концентрированного раствора щелочи (едкого натрия). Раствор диализуют через целлофан против дистиллированной воды в течение 72 ч при двухкратной смене воды ежедневно.
Диалиэат лиофилизуют при заморажива.нии в жидком азоте. Получают биополимер в виде белого порошка (выход
6,5 r на 100 r веса сырого исходного материала) практически свободный от белка (содержание белка около 1%).
Содержание углеводов в его составе достигает 93,7%. По данным хроматографии (бумажная и жидкостная)выделенный полисахарид является глюканом (в кислом гидролизате в качестве единственного моносахарида обнаружена глюкоза).
Технико-экономическая эффективность изобретения заключается в возможности получить новое средство, выделенное из мантии моллюска Strombus gigas, которое заметно сильнее стимулирует иммуногенез у животных при экспериментальных инфекциях, что известный препарат митилан из мидий. При этом значительно (в 3-4 раза) возрастают показатели поглотительной и переваривающей активности лейкоцитов крови, усиливается лейкоцитарная реакция, выживаемость животных существенно увеличивается (в контроле все животные погибают, под влиянием митилана выживаемость сос— тавляет 66%, под.действием предлагаемого препарата из Яtrombus gigas она достигает 85%). Кроме того, предложенный способ позволяет расширить сырьевую базу для производства иммуностнмулирующего препарата использованием для этой цели мантии моллюска
Strombus gigas
