Институт органической химии AH Украинскои . CP-. и Киевский научно-исследовательский инстй гут» отоларингологии им. А.И.Коломийченко -- / (72) Авторы изобретения (71) Заявители ((5 4 ) БРОМИД 2, 3, 5, 6-ТЕТРАГИДРО-6-ФЕНИЛ-7ФЕНАЦИЛИМИДАЗО(2,1-)з)ТИАЗОЛИЯ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ИММУНОРЕГУЛИРУЮЩУЮ

АКТИВНОСТЬ

Изобретение относится к новому биологически активному соединению, а именно к бромиду 2,3,5,б-тетрагидро-6-фенил-7-фенацилимидазо (2, 1Ь) тиазолия формулы

ca,ÑîÑ,н, QYQ проявляющему иммунорегулирующую активность, и может найти применение в медицине.

Известно, что хлоргидрат с(,(-)вЂ”

2,3,5,б-тетрагидро-б-фенилимидазо (2, 1-Ъ) тиазола (левамизол) вЂ” антигельминтный препарат широкого спектра действия обладает иммунорегуляторной активностью, что обусловливает его применение в качестве иммуностимулятора, в то время как его оптически неактивный аналог вЂ” хлоргидрат 0).-2,3,5,6-тетрагидро-б-фенилимидазо (2,1-b) -тиазола (тетрамиэол) такой активностью практически не обладает (1).

Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия ма живой организм.

Предлагается соединение формулы

1 в качестве вещества, обладающего иммунорегулирующей активностью.

Производное имидазотиазола формулы I получают взаимодействием DL2,3,5,б-тетрагидро-б-фенилимидазо (2,1-Ь) тиазола с фенацилбромидом в органическом растворителе.

Пример 1. Бромид 2,3,5,6тетрагидро-6-фенил-7-фенацилимидазо (2, 1-Ь) -тиазолия.

Растворяют 2,04 г (0,01 моль)

2, 3, 5, 6-тетрагидро-б-фенилимидаэо (2,1-Ь) тиаэола в 20 мл ацетона и к раствору прибавляют раствор 2 г (0,01 моль) v -бромацетофенона в

10 мл ацетона. Через 12 ч осадок отфильтровывают, промывают ацетоном.

Получают .3, 4 r (85%) бромида 2,3, 5,6-тетрагидро-б-фенил-7-фенацилимидаэо (2,1-В) -тиазолия, т.пл. 109110 С (из смеси иэопропиловый спиртпетролейный эфир).

Найдено, Ъ: Br 19,49; S 7,71.

25 с„й í g вт н оь. Вычислено, %: В 19,81; В 7,95.

Испытания соединения формулы 1 на биологическую активность прово

30 дили следующим образом.

910636

Эффективность иммунорегуляторного действия исследуемого соединения

Формулы 1 оценивали, сопоставляя его влияние на иммунные реакции с действием, оказываемым в аналогичных условиях стандартным препаратом вЂ” 5 левамизолом фирмы Гедеон Рихтер (Декарис) .

Влияние указанных препаратов на образование антител определяли в

Таблиц а 1

Но- Группа мышей, мер получивших

Х 2M

В смертности

Ге моли зины Агглюти нины

I Имуран и физиологический раствор 3,0 0,0 3,0 0,0 71,2

П Имуран и левамиэол

5,3+0,59 5,1" 0,6

Ш Имуран и соединение формулы 1

5,510,43 5,01 0,58

td(I,П) =5,9, Р<0,05;td(I,П) =

3,5, Р < 0,051

td(I,Ö) = 6, 1 i P<0i 05 td(Iihl) =

3,5, Р с 0,05.

Статистическую. обрабОтку результатов титрования антител проводили по методу Левинсона, где: Х вЂ” средняя величина1 re вЂ” средняя ошибка

d вЂ” кратность разведениями 18 вЂ” разность средних показателей; P вЂ” достоверность.

Как видно из данных, приведенных в табл.1, введение исследуемого препарата в такой же степени, как и введение левамиэола, значительно уменьшает смертность животных, обусловленную имураном. У мышей, получавших исследуемый препарат, .как и у животных, которые получали ле-. вамизол, увеличились титры гемолизинов и агглютининов по сравнению с мышами, получавшими в те же сроки разводящую жидкость.

Поскольку одним иэ существенных эффектов левамизола является способность угнетать синтез pearHHOB, обусловливающих развитие аллергических реакций заболеваний немедленноэкспериментах на иммунодефицитных мышах, получавших до иммунизации иммунодепрессор нмуран.

Опыты проводили на 21 беспородной белой мыши весом 15-18 r.

Влияние левамизола н исследуемого препарата на образование гемолнэинов, агглютининов и смертность животных, получавших имуран, показано в табл.1. го типа, было проведено сравнительное изучение влияния предлагаемого препарата на образование реагинов у крыс. Для этого крысам линии WAY закапывали по 0,05 мл 0,1%-ного раствора гистамина в оба носовых хода и через 40 мин закапывали такое же количество 0,05%-ного раствора левами40 зола или исследуемого препарата, а через 15 мин после этого - по 0;05 мл стандартного аллергента из пыльцы амброзии, содержащего 10000РЙО/мл.

Контрольным животным вместо иссле45 дуемого препарата закапывали физиологический раствор в том же количестве. Через 48 ч после иммунизации животных забивали и гбтовили экстракты трахеи и легких иэ расчета

0,1 мл физиологического раствора на

10 мг ткани. Содержание реагинов оп- ределяли в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток.

Содержание реагинов гомегенатах трахеи и легких крыс, получавших физиологический раствор, левамиэол или исследуемый препарат до введения аллергента дано в табл.2.

910636, Т а б л и ц а 2

Номер трахея легких

17,5 1,2

18,1l 1,3

7,41 0,2

tl Левамиэол

6,1+ 1,7

7,0 0,4

7,3+ 0,8

Т а б л и ц а 3

Толщина стоп, мм

Препарат контроль опыт опыт контроль

<О, 02

5,42 (0,01 6,20

30,0

0,01 31,3

0,05 25,6

Левамизол

6,69

6,14

26,9 (О; 05 (0,01

5,91

7,25

<0,001 6,88 (0 Ol 6,67

29,0

27,4

0,05 26,0

Группа животных; получивших

1 Физиологический раствор

Ш Соединение Формулы 1

Как следует из приведенных в табл.2 данных, по способности угнетать образование реагинов изучаемое вещество не уступает левамиэолу.

Влияние исследуемого препарата на развитие реакций гиперччвствительности замедленного типа (ГЗТ) изучали в опытах на морских свинках и. мышах.

ГЗТ у морских свинок вызывали введением в подушечку задних лап по

0,1 мл 0,4%-ного раствора динитрохлорбензола (ДНХБ) в 25 -ном спирте.

Через 14 дней аналогичным.образом вводили такое же количество ДНХБ (раэрешающая доза). За сутки перед

Доза,Ъ Температура, ОС

Соединение

ФоРмулы 1 0,01 30,4

Для индукции ГЗТ у ьышей сенсибилизирующую дозу антигена (10 тимоцитов крысы, убитых прогреванием в течение 1 ч при 56 С) вводили в подушечки обеих задних лап в объеме

0,04 мл. Разрешающую дозу антигена (l0 убитых тимоцитов) вводили анаСодержание реагинов в гомегенатах сенсибилиэирующим и за сутки перед разрешающим введением ДНХБ в подушечку опытной лапы иньекцировали

0,1 мл 0,01 или 0,05%-ного раствора

2$ левамизола или исследуемого препарата, в контрольную лапу вводили такое же количество Фаэ Физиологического раствора. Реакцию оценивали через сутки после введения разрешаюрц щей дозы ДНХБ, измеряя температуру подошвенных поверхностей и толщину стоп контрольной и опытной лап. Статистическую обработку проводили по методу прямых разностей, достоверность определяли по таблице Стьюдента. Результаты приведены в табл.3. логичным дйособом на пятые сутки

60 после сенсибилизации. За 4 ч до сенсибилизирующей инъекции антигена вводили 0,01 или 0,05%-ный раствор левамизола или исследуемого препарата в подушечку. одной иэ .лап, в

65 противоположную вводили такое же

910636

Таблица4

Препарат

Доза,Ъ Вес лимфоузлов, мг кснтроль опыт

0,01 5,5

0,05 3,1

4,5

Левамиэол

<0,01 (0,01

3,8

Соединение формулы 1

0 01 6,5

0,05 5,0

5,5

<0,01

6,5

Составитель Л. Кедик

Редактор 3.Бородкина Техред И. Гайду. Корректор У.Пономаренко

Заказ 1020/25 Тираж 448 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент,r. Ужгорол, ул. Проектная,4 количество физиологического раствора. Выраженность реакций оценивали, Как видно из данных, приведенных в табл. 3 и 4, оба препарата в дозе 0,01% стимулируют, а в дозе 0,05В подавляют развитие ГЗТ..

ЬЭ50 определяли на белых 6еспородных мьваах обоего пола весом 1820 r..Ìûøàì подкожно вводили в объеме 0,1 мп препарат в дозе от 300 до

600 мг/кг с интервалом 50 мг/кг.

Учет результатов проводили через

24 ч после введения. И)50 рассчитывали по Керберу (1931) и Першину.

Для соединения формулы 1 LD e составляет 442 мг/кг., для левомизо.ла - 121 мг/кг. сопоставляя вес контрольных и опытных лимфоуэлов. Результаты. приведены в

Формула изобретения

Вромид 2, 3, 5, 6-тетрагндро-6 "фе.33 нил-7-фенацилимидазо (2, 1- Ь) тиазолня ф рмулы dH боббН5

<4 Н М !

30 е проявлявший иммунорегулирующую активность

Источники информации, 3$ принятые во внимание при экспертизе

1. Sampson D., Lui А. The effect

of tevamisote on.се@ mediated Хтmunity and suporesor ce8t function.

"Cancer.Res",1976,36,Р З,р.952-956.